医学院校生命科学实验教学体系的改革

从“生命科学的完整体系、医药科学的根本出路、教学科研的客观需要”3方面论证了在医学院校建设生命科学实验室的意义；总结分析了有关实验教学改革尝试的利弊；提出了建设具有医学院校特色的生命科学实验室的初步构想，并对实验室的运行机制进行了探讨。

浅谈医学生物化学实验教学现状及对策

本文分析了传统的生化实验课教学存在的不足,就生物化学实验教学过程中的教学环节、教学手段等方面,提出了实施创新教育的措施,以求提高生物化学实验教学质量,获得最佳的实验教学效果。

HIF-1基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1活性的亚单位。HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF)依赖性的肿瘤血管形成。本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达。RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降。本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点。

Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究

目的研究Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的影响。方法针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸,转染A549细胞,PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量;Western印迹显示Survivin蛋白水平;以MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549细胞中survivin的mRNA和蛋白水平。MTF比色法结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制A549细胞增殖,抑制率远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。TUNEL法检测结果显示,反义寡核苷酸还显著增强A549细胞对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。结论sur- vivin反义寡核苷酸有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。

壳聚糖树脂吸附提取辣椒素及其含量的测定

目的以干辣椒为原料,用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱并测定其含量。方法采用1%NaOH粗提取,提取液脱脂后用壳聚糖树脂柱吸附,乙醇洗脱、重结晶得淡黄色针状辣椒素的晶体。采用香兰素-亚硝酸钠比色法测定辣椒素含量,用HPLC分析晶体中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。结果辣椒素收率为0.38%,辣椒素晶体纯度为91.20%,其中辣椒碱为63.17%,二氢辣椒碱为26.75%。结论采用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱,方法简便,成本低廉,产率和纯度较高。

汉族冠心病与ABCA1基因C69T多态性的相关研究

目的探讨ATP-Binding Cassette Transporter 1(ABCA1)基因C69T多态与汉族冠心病(CHD)的关系。方法以264例CHD患者和278名性别、年龄匹配的正常人为对象进行病例-对照研究;采用PCR-RFLP技术对ABCA1基因C69T多态位点进行分析。结果ABCA1基因C69T多态在CHD组与对照组分布差异无统计学意义(P>0.05);CC基因型和T等位基因携带者患者间各项血脂水平及心血管事件发生率比较差异均无统计学意义。结论ABCA1基因C69T多态性与汉族人群CHD不存在关联。

ATP结合盒转运体A1基因R219K多态与冠心病的相关性研究

目的探讨ATP-Binding Cassette Transporter 1(ABCA1)基因R219K多态在中国汉族人群中的分布及其与冠心病(coronary heart disease,CHD)的关系。方法采用PCR-RFLP方法,对396例CHD患者和417名正常人ABCA1基因R219K多态位点进行分析。结果对照组R219K多态K等位基因及KK基因型的频率(0.465、0.228)较CHD组(0.381、0.162)显著为高(P<0.05);根据发病年龄分组,早发CHD组K等位基因及KK基因型频率(0.34、0.111)明显低于晚发CHD组(0.419、0.205)和对照组(P<0.05),而在对照组和晚发CHD组间此频率差异无显著性(P>0.05);KK基因型患者血浆甘油三酯(TG)水平较RR基因型显著降低(P<0.05);不同基因型患者血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平差异无显著性(P>0.05)。结论ABCA1基因R219K多态与CHD存在相关性;KK基因型可能具有对抗动脉粥样硬化的作用,但这种作用不伴有血浆HDL-C水平的改变。

手性与手性药物

近年来,手性药物的临床意义引起人们的广泛关注,手性药物的开发已成为国际研究的热点。本文对手性和药物手性的概念、研究的实际意义以及手性药物研究现状进行阐述,说明手性药物具有广阔的市场前景。

手性药物及其开发与应用

随着人们对手性药物认识的不断深入，手性药物的市场逐年扩大，手性药物的研究目前已成为国际新药研究的新方向之一，各国政府和各大医药公司、实验室纷纷投入巨资．在手性药物制剂、手性原材料和手性中间体等领域进行研究开发，抢占世界手性药物市场。现就手性药物的作用机理、种类及其开发与应用作一综述。

利用流式监控高质量小鼠脾细胞的制备

目的流式技术监控小鼠脾细胞裂解过程,在确保脾淋巴细胞高活力的同时,充分裂解其中的红细胞。方法以流式细胞术监控ACK和Tris-NH4Cl两种红细胞裂解液的裂解效果,通过细胞融合率判断淋巴细胞活力。结果结合FSC和PI荧光强度分析,在确保淋巴细胞相对存活率大于或等于90%的前提下,ACK处理0.5～1min即可去除90%以上的红细胞,Tris-NH4Cl处理10min也可去除82%的红细胞,获得的淋巴细胞的融合效率为85%～90%。结论流式细胞术能够实时监控ACK和Tris-NH4Cl的裂解过程,获得高质量的脾淋巴细胞以适用于杂交瘤细胞的制备。

人原发性胆囊癌单克隆抗体制备及其特异性研究

目的制备人原发性胆囊癌单克隆抗体,对其特异性进行研究。方法以胆囊癌细胞系SGC-996免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得稳定分泌抗SGC-996单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。结果杂交瘤细胞符合融合细胞核型特点,有较强的成瘤性。抗体亚类为IgGl。相对应的抗原主要表达在胞质和胞核中,分子量约为67kD。抗体对胆囊癌有较强的免疫反应,其他癌组织、癌旁组织及间质、正常胆囊上皮和成纤维细胞均呈阴性。结论建立一株杂交瘤细胞系,能稳定分泌单克隆抗体,陔抗体具有较高特异性。

成骨分化的骨髓间充质干细胞的免疫原性

目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSC)具有多向分化潜能,又因其低免疫原性,成为细胞移植治疗的良好选择。本实验室前期实验表明猪MSC具有低免疫原性和免疫调节作用,而猪MSC在人体内微环境中,将自动分化。本试验研究猪MSC在体外诱导分化后是否还能维持其低免疫原性,仍具有免疫调节作用。方法:MSC细胞从近交系版纳微型猪骨髓中分离获得,转入SV40基因,进行永生化。再用β-甘油磷酸钠、地塞米松、抗坏血酸磷酸盐等体外诱导其分化为成骨细胞,以未分化MSC为对照,用RT-PCR法检测分化MSC的主要组织相容性抗原(swine lymphocyte antigen classⅠ、classⅡ,SLAⅠ、SLAⅡ)的表达情况,用单向混合淋巴细胞反应(MLR)的方法检测分化MSC是否仍不能引起人外周血淋巴细胞(human peripheral blood lymphocyte,hPBL)的增殖反应。结果:RT-PCR结果显示未分化MSC只有SLAⅠ表达;分化MSC既有SLAⅠ,也有SLAⅡ的表达,但很低。这一结果支持MSC的低免疫原性特性。混培结果也显示分化猪MSC与未分化猪MSC一样都不引起hPBL增殖反应。结论:分化和未分化猪MSC均不引起人淋巴细胞增殖反应,具有低免疫原性。提示猪MSC移植到人可能不会被排斥。