碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌adeB外排泵基因表达与多重耐药相关的研究

目的了解临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药情况,并探讨对碳青霉烯类药物耐药与AdeABC主动外排泵表达及碳青霉烯酶OXA-23存在的关系。方法采用琼脂二倍稀释法测110株临床分离菌对常用20种抗菌药物的MICs;用泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)检测分离菌的外排表型;用PCR技术扩增外排泵结构基因adeB、adeJ、abeM及碳青霉烯酶基因bla OXA-23;RT-PCR方法检测adeB的mRNA相对表达量。结果 32株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌除对多黏菌素B全部敏感外,对其他抗菌药物的耐药率均大于90%;96.9%(31/32)的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌含adeB、adeJ和bla OXA-23基因,93.8%(30/32)的含abeM基因。另78株敏感菌中,adeB、adeJ、abeM基因的检出率分别为78.2%、79.5%和80.8%;与耐药菌相比,敏感菌的adeB基因mRNA相对表达量显著较低。110株临床分离菌中,美罗培南加CCCP共筛出15株泵阳性菌。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对临床常用的多种抗菌药物耐药;外排泵机制和碳青霉烯酶OXA-23在介导鲍曼不动杆菌多重耐药中具有重要作用。

插入序列ISAba1对多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因表达的影响

目的了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中插入序列ISAba1的存在对碳青霉烯酶基因表达的影响。方法筛选32株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌,运用PCR技术检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58型酶基因及插入序列ISAba1;RT-PCR方法检测ISAba1下游基因的mRNA的相对表达水平。结果 OXA-51型基因的检出率为100%,OXA-23型基因为96.9%。其中23株OXA-23型基因、18株OXA-51型基因上游均存在插入序列。RT-PCR结果显示上游存在ISAba1时,OXA-23和OXA-51型基因相对表达水平分别为1.6471±0.6560和1.3209±0.3678,与不存在插入序列的相应基因表达水平相比,二者差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 OXA-23和OXA-51型基因是本组试验菌的主要碳青霉烯酶基因型,ISAba1序列的插入可引起下游碳青霉烯酶基因高表达。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白表达的分析

目的筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌并了解其耐药情况,分析碳青霉烯类耐药菌及碳青霉烯类敏感菌的外膜蛋白表达情况。方法采用琼脂二倍稀释法筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,运用聚合酶链反应(PCR)技术检测外膜蛋白基因carO;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜蛋白的表达情况。结果 110株临床分离鲍曼不动杆菌中的32株细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药,此32株碳青霉烯类耐药菌除对多黏菌素B敏感性为100%,对其他所试药物均呈不同程度耐药;碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均携带carO基因,SDS-PAGE分析显示碳青霉烯类耐药菌株与敏感菌株相比,在相对分子质量约22×103和50×103等处的蛋白条带存在差异。结论鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药情况严重,且碳青霉烯类耐药菌与敏感菌的外膜蛋白在表达上存在明显差异。

3种方法测定替加环素对鲍曼不动杆菌的体外药敏结果比较

比较替加环素对鲍曼不动杆菌的体外药敏试验不同方法之间的差异。分别采用微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和K-B法测定119株临床分离鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感性,比较不同检测方法结果的差异。微量肉汤稀释法MIC500.5μg/m L、MIC901μg/m L,FDA/EUCAST的耐药率0.0%（0/119）/0.0%（0/119）,中介率0.0%（0/119）/5.0%（6/119）,敏感率100%（119/119）/95.0%（113/119）;琼脂稀释法MIC501μg/m L、MIC904μg/m L,FDA/EUCAST耐药率11.7%（14/119）/45.4%（54/119）,中介率33.6%（40/119）/21.0%（25/119）,敏感率54.7%（65/119）/33.6%（40/119）;K-B法Jone/EUCAST的敏感率47.1%（56/119）/31.9%（38/119）、中介率48.74%（58/119）/31.9%（38/119）,耐药率4.2%（5/119）/36.2%（43/119）。替加环素对鲍曼不动杆菌体的外药敏实验中,微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和K-B法之间存在差异。以微量肉汤稀释法为参考方法,MH琼脂稀释法总误差41.2%-60.5%,K-B法总误差47.9%-63.9%。