脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯(DAS)通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。方法 30只雄性BALB/C小鼠平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+DAS组)和模型组(LPS组)。使用ELISA对肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。测量BALF中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。对肺组织进行湿/干比(wetto dry ratio,W/D)测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。RT-PCR被用于iNOS mRNA的测定。使用Western blot测定iNOS和β-肌动蛋白(β-actin)蛋白的表达。结果 LPS干预后小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平明显上升而SOD水平显著下降,W/D比值和肺组织损伤评分明显升高,iNOS mRNA和蛋白的表达明显增加。LPS+DAS组小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平、W/D比值、肺组织损伤评分、iNOS mRNA和蛋白的表达较LPS组小鼠明显下降;同时BALF中SOD水平较LPS组小鼠明显增加。结论 DAS可能是通过抑制iNOS表达减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。

胰岛素通过激活SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下钠离子通道的调节作用

目的探讨胰岛素通过SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下的钠离子通道的调节作用。方法 30只雄性Wistar大鼠随机平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+Insulin组)和模型组(LPS组)每组10只。记录5个时间点(0、0.5、1、3、6h)大鼠的血糖水平,并使用胰岛素使LPS+Insulin组大鼠血糖控制在1.5到4.5mmol/L。通过HE染色观察肺组织病理学改变;使用湿/干比(W/D)分析肺水肿程度;使用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学对α-ENaC的表达进行测量;SGK1和磷酸-SGK1(phospho-SGK1)蛋白表达使用Western blot进行定量分析。结果大鼠注射LPS后血糖明显上升并于3h达到最大值。LPS干预6h后大鼠肺损伤评分和W/D比值明显增加,α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平明显下降,差异有显著统计学意义。同时发现,LPS+Insulin组大鼠肺损伤评分和W/D比值较LPS组大鼠稍低,而α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平较之升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素可以有效减轻LPS诱导的大鼠ARDS导致的肺水肿,其机制可能与促进SGK1的活化后上调了ENaC的表达相关。该结果为应用胰岛素治疗肺水肿奠定了理论基础。

miR-600通过抑制HIF-1α信号通路降低宫颈癌细胞的增殖能力

目的探讨miR-600是否可通过HIF-1α信号通路调控宫颈癌HeLa细胞的增殖及对Cyclin D1和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α转染HeLa细胞增加和诱导miR-600和HIF-1α的表达。qPCR和Western blot检测转染6 h后Plasmid-HIF-1α对于HeLa细胞HIF-1α表达的影响。将HeLa细胞分为空白对照组(无特殊处理)、miR-600 mimic组(转染miR-600拟似物miR-600 mimic)、Plasmid-HIF-1α组(P-HIF-1α组,转染Plasmid-HIF-1α)和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组(miR-600 mimic+P-HIF-1α组,同时转染miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α)。在转染6 h后,使用MTT法检测细胞活性,采用qPCR和Western blot测定VEGF、Cyclin D1和HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平。结果在转染6 h后,miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α对HeLa细胞活性无显著影响(P均<0.05)。但转染Plasmid-HIF-1α6 h后,细胞HIF-1α表达水平显著增加。在转染24 h和48 h,与对照组相比较,miR-600 mimic组细胞活性呈时间依赖性下降,Plasmid-HIF-1α组和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组细胞活性呈时间依赖性增加,且Plasmid-HIF-1α组较miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组细胞活性时间依赖性增加更加显著(P均<0.05)。转染6 h后,与对照组相比较,miR-600 mimic组VEGF、Cyclin D1和HIF-1α表达均明显下降,Plasmid-HIF-1α组和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组VEGF、Cyclin D1和HIF-1α表达均明显增加,且Plasmid-HIF-1α组较miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组增加更明显(P均<0.05)。结论在HeLa细胞中miR-600可以通过抑制HIF-1α信号通路下调Cyclin D1和VEGF的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和分化。

布地奈德协同辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠并发动脉粥样硬化的治疗机制

目的:研究布地奈德联合辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠并发动脉粥样硬化的影响及机制,为联合用药方案提供理论依据。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(M组)、布地奈德组(BD组)、辛伐他汀组(SV组)和布地奈德+辛伐他汀组(BD+SV组)。以气管内滴注脂多糖和烟熏建立COPD并发动脉粥样硬化大鼠模型,采用吸入布地奈德(0.5 mg/kg,2次/d)和口服辛伐他汀(5 mg·kg-1·d-1)进行干预。实验60 d后,测定血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,计算动脉粥样硬化指数(AI),ELISA法测定各组大鼠血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、白三烯B4(LTB4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,取肺和冠状动脉组织,经HE染色后检查病变情况,同时采用免疫组织化学方法检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达。结果:与正常对照组相比,其余4组大鼠的AI、血清炎性因子水平(CRP、IL-6、IL-8、LTB4和TNF-α)和肺组织MMP-9水平均明显升高(P均<0.05);与M组相比,BD组、SV组和BD+SV组大鼠上述指标均明显降低(P均<0.05);与BD组和SV组相比,BD+SV组仍有明显降低(P均<0.05)。各组TIMP-1水平比较结果与上述指标情况相反(P均<0.05)。与M组、BD组及SV组相比,BD+SV组大鼠肺组织中肺气肿形成的囊腔变小,各级支气管炎症减轻,冠状动脉内膜相对较平整,内膜增生及斑块形成程度明显降低。结论:布地奈德与辛伐他汀联合用药对COPD大鼠并发动脉粥样硬化有明显改善作用,其机制可能与降低动脉粥样硬化相关细胞因子水平、平衡基质金属蛋白酶与基质金属蛋白酶抑制剂的比例有关。