选择性雌激素受体调节剂对MC3T3-E1细胞生长分化的调节

目的探讨选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)———雷洛昔芬对小鼠颅顶成骨细胞MC3T3-E1分化的调节及其机制。方法体外培养MC3T3-E1细胞,10-7mol/L的雷洛昔芬和雌激素受体拮抗剂ICI-182780刺激细胞,另设空白对照组,24、48、72 h后检测各指标。MTT法检测细胞增殖;微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞内β-catenin,雌激素受体α、β(estrogen receptorα、β,ERα、ERβ)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞分别加入10-7mol/L的雷洛昔芬和ICI-182780后,相对于对照组,雷洛昔芬处理组的促细胞增殖作用较强,在24 h增殖率最高,达(55.93±10.88)%;ALP活性增加,在48 h活性增加率最高,为(30.881±5.614)%;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均增高,有统计学意义(P<0.05)。ICI-182780组的促细胞增殖率、ALP活性降低;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均降低,有统计学意义(P<0.05)。结论雷洛昔芬可能通过上调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达促进MC3T3-E1细胞的增殖分化,而ICI-182780则下调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达抑制MC3T3-E1细胞的增殖和分化。

流体剪切应力和雷洛昔芬对成骨细胞增殖的影响及作用机制研究

目的研究流体剪切应力与选择性雌激素受体调节剂——雷洛昔芬单独作用及联合作用对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖的影响及其作用机制。方法选择12dyn/cm2(1dyn=10-5 N)流体剪切应力与10-7 mol/L雷洛昔芬单独作用和联合作用于体外培养的MC3T3-E1细胞,同时设置阴性对照组(雌激素拮抗剂)和空白对照组,倒置显微镜下观察细胞的外形、大小、细胞核的形态等,并进行活细胞计数,分别采用RTPCR和Western bolt方法检测细胞中β-catenin、雌激素受体α(ERα)的mRNA和蛋白的表达。结果相对于空白对照和阴性对照组,流体剪切应力组、雷洛昔芬组与雷洛昔芬+流体剪切应力组的细胞数量均增加,ERαmRNA和蛋白表达增加(P<0.05),而β-catenin mRNA和蛋白表达,除雷洛昔芬组的β-catenin mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)外,其余表达均增加(P<0.05)。雷洛昔芬组与流体剪切应力单独作用组的细胞数、β-catenin蛋白、ERαmRNA及蛋白表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05),但雷洛昔芬+流体剪切应力联合作用组所有检测参数均高于前述两组(P<0.05)。结论流体剪切应力和雷洛昔芬均有促MC3T3-E1细胞增殖的作用,能上调β-catenin、ERα的表达,且两者联合作用后有协同效应。流体剪切应力和雷洛昔芬可能通过调节Wnt/β-catenin和ER信号通路来影响成骨细胞的增殖。