四川地区兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类药物耐药性调查

本研究旨在调查四川地区兔场中粪肠球菌对恶唑烷酮类药物的耐药性,检测恶唑烷酮类耐药基因。以四川多个地区兔场分离鉴定的79株粪肠球菌为研究材料,开展分离株对恶唑烷酮类的药物敏感性试验。运用PCR技术检测分离株中恶唑烷酮类耐药基因cfr、poxtA和optrA。结果显示,在分离出的79株粪肠球菌中,有19株对利奈唑胺耐药(MIC≥2mg/L),耐药率为2405%。PCR结果表明,有16株含有optrA基因,其余基因未检出。16株携optrA基因粪肠球菌分为13个ST型,其中分离自峨眉山市某兔场的CSC1菌株可能是一个新的ST型。结论:兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类耐药率为2405%,由optrA基因介导,optrA基因在粪肠球菌中检出率为2025%,兔场与兔场之间分离的菌株之间存在密切进化关系,耐药菌株的广泛交流可能造成多重耐药基因optrA传播。

碳青霉烯类抗生素中间体MAP的合成工艺改进

本研究报道了一种以4-乙酰氧基氮杂环丁酮(4-AA)为起始原料经过Reformatsky、酰化、还原、亲核取代、Dieckmann环合、烯醇化六步反应得医药中间体β-甲基乙烯基磷酸酯(MAP)的方法,通过单因素对照实验对关键反应的重要参数进行了优化,得到一条收率高、成本低和高效的合成路线,总收率达到43%,液相纯度达到98.82%,并采用MS和^(1)HNMR对关键中间体和产物都进行了表征。

苯丙氨酸脱氢酶分离纯化的开放实验教学设计与实践

开放实验教学既是一种教学理念,又是一种教学策略,在本科生毕业阶段和向研究生过渡的阶段显得尤为重要。本次开放实验教学设计依托课题组研究较为深入的苯丙氨酸脱氢酶,将发酵、提取、粗纯、精纯、酶活测定、高效液相色谱(HPLC)分析和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的整条项目链作为教学和实践内容,同时训练学生整理、处理数据和撰写报告的能力,提升其综合科研水平。

刺糖多孢菌高产菌株转录组及其多杀菌素合成代谢调控研究

目的 通过对高产多杀菌素的刺糖多孢菌进行转录组分析,挖掘多杀菌素合成相关代谢通路的差异基因,并在此基础上结合发酵优化进一步提高多杀菌素产量。方法 利用RNA-seq技术对高产株SS-168及低产野生菌株SS-WT进行比较转录组分析,通过荧光定量PCR验证差异基因表达,再通过发酵培养基优化考察高产菌株的发酵水平。结果 转录组分析表明,与低产菌株相比高产株中有1341个差异表达基因,GO注释表明DEGs主要参与氧化还原生物过程和脂质代谢及辅因子结合和辅酶结合,主要分布在甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、脂肪酸降解等通路。荧光定量PCR结果与转录组数据一致性达到100%。采用分别含有不同浓度的甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸的发酵培养进行筛选,多杀菌素发酵水平显著提高。结论 本研究通过新颖的转录组学方法获得了刺糖多孢菌高产菌株的差异基因,并对其高产机制和发酵优化进行了初步分析,为改良刺糖多孢菌菌株和优化发酵工艺提供重要的理论基础和参考依据。

化学实验教学与绿色化学教育的探究与实践

本文旨在介绍绿色化学的历史及其里程碑,并对如何教授这门学科提出一些建议。对绿色化学领域的意识以及现有的教学材料进行了探讨。此外,还描述了教授和学生应该知道和使用的绿色化学实践。介绍了绿色化学的教学方法,重点介绍了有机化学和分析化学的教学。

双水相系统纯化重组苯丙氨酸脱氢酶的条件研究

目的 研究重组大肠埃希菌表达的苯丙氨酸脱氢酶在双水相系统中的分配,并对其影响因素进行单因素考察,优化出最佳的双水相系统。方法 采用高效液相色谱法检测,依据纯度和收率来优化纯化条件。研究了聚乙二醇(PEG)分子量,聚乙二醇(PEG)浓度,硫酸铵浓度,氯化钠浓度,pH对苯丙氨酸脱氢酶在双水相中分配的影响。结果 优化的双水相系统为:PEG4000 10%,硫酸铵14%,氯化钠10%且pH 6.5,此系统下的酶活收率、纯化倍数及酶比活分别为162%、578及9280 U/mg。结论 在双水相系统的中间层提取苯丙氨酸脱氢酶是一种新的纯化方式,此方法简单易行,收率较高,纯度好且处理量大,仅通过一步实验就达到初级纯化和浓缩的目的,是一种经济有效的纯化方法,为下步工业化生产奠定基础。

辛伐他汀对小鼠结肠癌细胞CT26凋亡的诱导作用及机理研究

考察了辛伐他汀对小鼠结肠癌细胞CT26生长率的影响,并探究其对CT26细胞凋亡的诱导作用及机理。以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定辛伐他汀对CT26细胞生长的抑制情况;以蛋白质免疫印迹法测定细胞凋亡和增殖的标志蛋白PARP、Cleaved-PARP、P21和磷酸化的P53的蛋白表达水平;以AMPK的抑制剂Compound C来阻断AMPK信号途径后,观察辛伐他汀对CT26细胞中Cleaved-PARP表达的影响;以Compound C处理CT26细胞后,以RT-PCR和蛋白质免疫印迹法测定辛伐他汀在CT26细胞中诱导KLF2和KLF4的情况.辛伐他汀可以明显抑制CT26细胞生长,可以诱导CT26细胞中的凋亡相关的Cleaved-PARP蛋白上升,并且其作用机理可能和KLF4的上升有关.

基于糖谱法的半夏及其炮制品多糖结构特征分析及水/酶解前后抗氧化活性评价

目的:采用糖谱法,通过部分酸水解和特异性糖苷酶酶解结合高效薄层色谱法(HPTLC)和荧光辅助凝胶电泳法(PACE),分析半夏及其炮制品多糖的糖苷键结构特征,以及其水/酶解前后的抗氧化活性变化。方法:半夏及其炮制品多糖加入淀粉酶除淀粉后,超滤法除去3000 Da以下的小分子成分;精制后的多糖以酸水解和5种特异性糖苷酶酶解制备样品,采用HPTLC和PACE进行分析;以2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基清除实验评价多糖水/酶解前后抗氧化活性的变化。结果:通过HPTLC和PACE分析发现,半夏及其炮制品多糖能被β-半乳糖苷酶、β-甘露糖酶、纤维素酶和果胶酶水解,而几乎不能被葡聚糖酶水解,表明半夏及其炮制品的多糖含有β-吡喃半乳糖苷键、β-1,4-甘露糖苷键、β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键。通过体外抗氧化实验发现,半夏及其炮制品多糖经酸水解和果胶酶酶解后清除ABTS自由基能力减弱,而经纤维素酶,β-半乳糖苷酶和β-甘露糖酶酶解后,清除ABTS自由基能力增强;而半夏及其炮制品多糖经不同水/酶解后,清除DPPH自由基能力均明显增强。结论:该研究通过糖谱法分析了半夏及其炮制品多糖的糖苷键结构特征,并明确了其与抗氧化活性之间的关系,有利于进一步阐明半夏及其炮制品相关功效的物质基础,并为中药多糖结构特征分析提供新的思路与方法。

Paraglaciecola hydrolytica中新型β-琼胶酶Aga2的异源表达及酶学性质分析

琼胶寡糖具有抗氧化、抗肿瘤和调节肠道菌群等多种生物活性,而微生物来源的琼胶酶是酶法制备琼胶寡糖的重要工具酶。目前报道的琼胶酶数量较少,而具有优良酶学特性的琼胶酶数量更少,极大阻碍了酶法制备琼胶寡糖的工艺开发进程。因此有必要发掘更多微生物来源的新颖琼胶酶。从副居冰菌属Paraglaciecola hydrolytica细菌基因组中挖掘到一个新颖琼胶酶基因aga2,构建至表达载体pET28a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;通过镍金属亲和层析纯化蛋白并探究温度、pH、金属离子、NaCl浓度对Aga2活性的影响;采用^(13)C核磁共振、薄层色谱和基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析酶解产物。Aga2与已知琼胶酶的最高相似度为53.7%。同时Aga2在IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside)浓度为90μmol/L,20℃下诱导9 h时,可溶性表达量最高。纯化的Aga2最适反应温度为50℃,且40℃孵育3 h后仍保持72.9%的相对酶活力,具有较好的温度稳定性。Aga2的最适pH为6.0,在不同pH(4-9)下放置5 h后,仍保持62.6%以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性。Aga2在NaCl浓度为2.5 mol/L时仍保持78%的相对酶活力,具有较强的盐耐受性。同时Aga2对Ni^(2+)、Ca^(2+)、Ba^(2+)、K^(+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、EDTA、DTT、Urea、SDS、TritionX-100有耐受性。薄层色谱结果表明,该酶属于内切型β琼胶酶,产物为新琼四糖和新琼六糖。Aga2具有温度和pH稳定性、盐耐受性和重金属离子耐受性,具有良好的工业应用前景。

益生菌的应用现状和发展前景

益生菌是一类严格选择的,如果给予足够的量,能够为宿主带来健康益处的活性微生物。常见的具有益生功能的微生物,包括传统益生菌乳酸菌(lactic acid bacteria)和酵母菌(Saccharomyces)等,以及下一代益生菌普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila)和普雷沃氏菌(Prevotella copri)等。益生菌与人体健康之间存在密切的关系,这些微生物可通过肠道刺激胃肠道反应或直接作用于口腔、阴道、皮肤等其他部位以调节宿主健康。因此,它们在食品、种植业、畜牧业以及医疗领域中得到广泛应用,成为改善宿主健康的有力工具。本文对乳酸菌等传统益生菌以及嗜黏蛋白阿克曼菌等下一代益生菌的功能的开发与应用进行了综述,总结了这几种益生菌在食品生产、疾病治疗以及农业生产等方面的应用潜力,展望了益生菌资源研究与应用的发展趋势,以期为研究新老益生菌功能的开发与应用提供参考。