基于顶空固相微萃取-气相色谱-三重四极杆质谱联用技术的余甘子挥发性成分分析及抗仓储害虫作用研究

目的:对余甘子挥发性成分进行富集分析,并评价其抗虫作用。方法:采用CO_(2)超临界流体萃取法制备余甘子精油,采用顶空固相微萃取-气相色谱-三重四极杆质谱联用(HS-SPMEGC-QQQ-MSMS)技术构建了余甘子气味成分谱(OCS)和气味强度特征谱(OICS),对比余甘子药材粉末与精油的挥发性物质组成差异。在封闭空间内研究余甘子药材及精油对药材甲、咖啡豆象、米象、印度谷蛾等仓储害虫死亡率、进食率和趋避作用的影响。结果:药材和精油成分基本一致,但药材中小分子酸类等成分含量更高。余甘子药材与精油均对进食率影响不大,但能提高昆虫死亡率,趋避作用明显,且余甘子精油驱虫效果更强。结论:余甘子药材和精油具有一定的驱虫作用,乙酸乙酯、芳樟醇、α-松油醇等可能是其抗虫主要物质基础。本文首次报道了余甘子的抗虫作用,为余甘子精油的综合开发提供参考。

煎煮时间对三果汤化学成分及抗疲劳作用的影响

探究煎煮时间对三果汤成分转化及抗疲劳作用的影响。采用HPLC法跟踪煎煮过程中三果汤的成分变化,通过偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)筛选出12个差异成分,其中已鉴定的有7个,它们在煎煮过程中的含量变化为:没食子酸、诃子次酸增加,诃子酸、诃黎勒酸、没食子酸乙酯、鞣花酸降低,柯里拉京先增加后降低。抗疲劳评价实验中,小鼠游泳时间及11种疲劳相关指标测定结果显示,煎煮时间越长,三果汤抗疲劳能力越强。差异化合物中与抗疲劳药效相关性最大的为没食子酸和诃子次酸。说明煎煮会促使三果汤大分子鞣质水解成没食子酸和诃子次酸,且这种水解有利于抗疲劳作用的发挥。

基于UPLC-Q-TOF-MS^E技术的三勒浆口服液上清液及沉淀部分化学成分分析

目的:分析三勒浆口服液上清液和沉淀部分的主要化学成分,为建立其质量标准与沉淀控制技术提供依据。方法:使用UPLC-Q-TOF-MSE技术分别对分离后的上清液及沉淀部分化学成分进行定性分析,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相选择0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~1 min,2%B;1~2 min,2%~5%B;2~4 min,5%~7%B;4~6 min,7%~24%B;6~10 min,24%~42%B;10~12 min,42%~54%B;12~15 min,54%~76%B;15~18 min,76%~100%B),流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,进样量2μL。质谱分析采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式下使用时间依赖型MSE方式采集样品质谱数据,采集范围m/z 50~1200(上清液)和m/z 50~3000(沉淀),通过对采集数据的保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片进行比对后鉴定化学成分。结果:在三勒浆口服液上清液中共鉴定了61个化合物,包括鞣质类、酚酸类、黄酮类、氨基酸类、有机酸类、脂肪酸类等;沉淀中共鉴定了15个化合物,包括鞣质类、酚酸类、黄酮类、脂肪酸类等。结论:三勒浆口服液的水解鞣质可能是该制剂潜在的沉淀物质基础,其沉淀物很可能是以鞣花酸和鞣红为主构成的复杂沉淀。建立的UPLC-Q-TOF-MSE可快速、全面地分析三勒浆口服液的化学成分,可为其物质基础、沉淀机制及质量控制等研究提供科学依据。

余甘子加工沉淀固废物中活性成分鉴定与提取工艺优化

目的:研究余甘子鲜汁沉淀物的化学组成与资源化物质鞣花酸的提取纯化工艺。方法:收集余甘子鲜汁沉淀物,采用能谱仪、傅里叶变换红外光谱仪和超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)分析余甘子鲜汁沉淀物的化学成分;以鞣花酸含量为指标,分别采用醇提法、酶提法、碱溶酸沉法对鞣花酸进行提取纯化,且通过单因素实验优化筛选提取工艺。结果:红外分析表明,余甘子鲜汁沉淀物具有C、O元素,苯环、酚羟基等基本结构;UPLC-Q-TOF-MS结果表明,沉淀物的主要成分为鞣花酸、邻苯二甲酸二丁酯等,且鞣花酸占比最高,为39.91%;提取工艺优化结果显示,碱溶酸沉法为较优工艺,进一步优化后得到最佳工艺参数为料液比1∶40、NaOH浓度2%、超声提取时间20 min,该条件下得到的提取物中鞣花酸含量为47.38%,纯度为94.22%。扫描电镜观察表明,鞣花酸提取物粉末中有大量柱状结晶,推测为鞣花酸分子平面聚合形成。结论:余甘子鲜汁沉淀物中鞣花酸天然丰度高,可作为鞣花酸天然来源途径之一。所得到的鞣花酸提取纯化工艺步骤简单、可操作性强、成本较低、含量及纯度较高,适宜用于余甘子鲜汁固废物中鞣花酸的富集。

余甘子果渣抑菌免洗凝胶的制备工艺研究

目的:测定余甘子果渣中的化学成分,优选提取工艺与免洗凝胶的制剂处方,开发余甘子果渣抑菌免洗凝胶。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定余甘子果渣与余甘子药材中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸与鞣花酸的含量;通过抑菌圈筛选余甘子果渣中主要抑菌活性成分筛选;采用单因素实验设计优化余甘子果渣的提取工艺;以感官评价及凝胶理化性质为指标,采用Box-Behnken响应面法优选余甘子果渣抑菌免洗凝胶处方。结果:余甘子果渣与余甘子药材的成分基本相同,没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸与鞣花酸在果渣的含量中约为药材中含量的21.99%~67.63%、0.52%~4.79%、7.38%~8.79%、10.15%~16.10%。诃黎勒酸、柯里拉京、没食子酸对白念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)均低于10μg/mL,而鞣花酸的MIC为16.38~32.75μg/mL。以没食子酸、柯里拉京与诃黎勒酸为评价指标,得到最优提取工艺为取余甘子果渣,加入10倍体积的70%乙醇,回流2 h,提取1次。通过Box-Behnken响应面法,得到最优凝胶基质配方为30%余甘子果渣提取液、0.4%卡波姆U20、3%甘油、4%的95%乙醇、三乙醇胺调pH值到5~6,其余为纯化水。结论:余甘子果渣具有较好的开发价值,抑菌免洗凝胶的制备工艺可行,为中药固废物的综合开发利用提供了技术路径。

基于多酚质量传递规律视角下的余甘子质量标准研究思路

余甘子是我国西南地区特色药食同源品种。目前,余甘子质控标准国际上可参考的主要有《英国药典》《印度药典》《香港中药材标准》和《中华人民共和国药典》,主要以没食子酸和鞣花酸为评价指标。然而,作为余甘子重要药效物质基础的多酚(鞣质)在贮藏和加工过程中具有特殊的转化与传递规律。现有质量评价方法仅以没食子酸和鞣花酸作为评价指标,难以合理有效评价余甘子的质量。为此,本文基于余甘子多酚成分转化传递规律,结合余甘子应用现状及现有余甘子药典标准,对余甘子质量标准研究思路与制定进行探讨。

基于pH调控多酚-唾液蛋白结合作用的三果汤含片涩味掩蔽方法研究

目的通过多酚-唾液蛋白络合作用的涩味形成关键机制,建立pH调控两者结合能力的三果汤含片涩味掩蔽新方法。方法采用荧光淬灭光谱法测定不同pH条件(2.5、3.5、4.5、5.5、6.5)下三果汤提取物与β-酪蛋白的相互作用。调节三果汤提取物pH至最佳条件,制备三果汤掩味含片。以电子舌涩味量化方法和志愿者视觉模拟量表法(visualanalogue scale,VAS)评价掩味效果。采用DPPH自由基清除能力、纸片扩散法评价含片的抗氧化活性和抑菌活性。结果荧光淬灭光谱测得三果汤提取物在pH 4.5时与β-酪蛋白的结合能力最弱,调节提取物pH至4.5制备三果汤掩味含片。掩味含片的涩度明显弱于原片;没食子酸的溶出度与原片基本一致;掩味含片的抗氧化活性和抑菌活性仅受到轻微影响。结论基于pH调控的多酚涩味掩蔽方法可行,解决了三果汤含片涩味突出的品质缺陷,对于多酚类中药口含片的涩味掩蔽提供了可行的技术方案。

抗疲劳高频药物保健作用的精准定位与分析

疲劳是一种广泛存在的复杂的生理现象。长期疲劳可诱发心血管功能障碍、精神障碍等严重病理反应。因此,如何精准、有效地缓解疲劳是新时代践行"健康中国"理念的重要命题。中药保健食品作为中药大健康产业的重要组成部分近年来蓬勃发展。目前,我国已有1157个抗疲劳保健食品上市销售,其中大部分为中药单品及其复方,但其功能项下均笼统标注为"抗疲劳",功能定位宽泛而不明确。随着对疲劳分型及其生理病理基础认识的不断深化,亟需结合现代化学与药理学研究进展,对中药抗疲劳保健作用进行功效分化与精准定位。为此,该文综述了疲劳的分类,并从能量代谢、代谢产物堆积、氧化应激、炎症、下丘脑-垂体-肾上腺轴等角度阐释了疲劳产生的机制,筛选出抗疲劳保健食品处方中使用频率最高的10味中药,分析其抗疲劳的作用机制,归纳抗疲劳的最佳类型,以期推动抗疲劳保健食品产业的科学发展,扩大抗疲劳保健食品的应用范围,更好地响应健康中国的建设,服务人民健康。

中药口服液中鞣花酸分子稳定储存的制剂学机制与调控策略

鞣花酸普遍存在于植物中,被认为是具有开发潜力的抗氧化与抗肿瘤候选药物。但鞣花酸极易沉淀,如何提高其生物利用度一直是制药行业关注的问题。本课题组偶然发现,三勒浆口服液在低温条件下储存稳定性非常优异,鞣花酸呈现"低温易溶"的反常现象。为揭示其科学原理,讨论相应的调控策略,本文将该口服液分别在高、中和低3种温度下储存3个月,采用沉淀量、上清液-沉淀HPLC化学轮廓、沉淀形貌和物理相态综合表征等分析方法系统追踪调查存放过程中口服液成分与相态的变化规律。结果显示,低温下的沉淀量仅为室温1/3,温度升高,沉淀量急剧增加。上清液-沉淀物HPLC分析发现鞣花酸沉淀来源于化学降解与物理沉降两条途径。化学降解与诃黎勒酸、柯里拉京等水解鞣质酸性条件下水解产生鞣花酸有关。物理沉降与升温后多酚胶体缔合度与黏度降低有关。该研究阐释了中药液体制剂中鞣花酸稳定机制,为含鞣花酸制剂的高效利用及澄清度改善提供了理论依据。

药食同源品种余甘子综合开发利用策略与思路

余甘子是极具特色的传统药材及药食同源品种,具有丰富的品种资源和较高的开发价值,是目前我国扶贫重点品种。随着近年余甘子加工产业的逐渐兴盛,为充分开发和利用余甘子资源、促进产业升级,该文系统介绍了余甘子综合开发利用现状,探讨了余甘子产业目前面临的突出问题,并从栽培选育、等级划分、品质评价到废弃物再生利用等方面提出了余甘子综合开发利用策略及产业模式,为推动我国余甘子产业的高质量发展提供一定参考。

基于专利视角的余甘子全产业链开发现状分析与评述

余甘子为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica的干燥成熟果实,是颇具特色的中藏药特色药材、药食同源品种,具有大品种培育潜力与开发价值。我国余甘子专利数量多,近年来申请活跃,在食品与饮品方面占有优势,下游产品开发较为丰富,但产业链上游专利保护薄弱,专利转化率低且专利申请基础研究薄弱。因此,应加强产业链上、中游的技术突破与技术保护,同时提高专利质量,提升余甘子品种地位,产学研协同,加强基础与应用基础研究。基于Incopat全球专利数据库,运用专利分析方法与SWOT分析方法相结合模型,分析余甘子产业链国内外专利申请现状与发展趋势,以期为余甘子在新时代的开发利用、产业链专利布局及相关产业国际竞争力的提升提供参考。

多酚类液体制剂精细制造关键:多元沉淀形成原理与稳态重构

植物多酚具有广泛的药理活性与应用前景,是天然产物研究热点之一。然而,多酚液体制剂具有特殊的物理相态与复杂的化学组成,在研制、生产及上市后均存在稳定性差、易产生沉淀的共性问题,是制约多酚液体制剂发展的瓶颈问题。本文以植物多酚液体制剂多元沉淀机制研究为例,探讨了多酚类液体制剂沉淀物是什么、沉淀如何形成、沉淀能否控制,以及三条沉淀途径的相互作用规律,并提出了鞣质酸水解与儿茶素类非酶氧化聚合反复诱导缔合胶体聚沉的不稳定机制模型。科学阐释了多酚溶液体系中的复杂理化变化过程及其诱导体系不稳定的微观机制,提出了多酚液体制剂稳态重构的工艺思路,有利于形成多酚液体制剂沉淀机制及控制方法的共性规律,这对于促进多酚类液体制剂的精细制造与高质量、高水平发展具有一定科学意义。

余甘子回流过程中鞣质转化及药典含量测定方法合理性探讨

目的揭示2015年版《中国药典》中余甘子加热回流提取供试品制备过程中成分转化现象,研究其转化机制,提出新的供试品制备方法并进行提取工艺参数优化。方法采用高效液相指纹图谱对回流过程中余甘子中多种鞣质成分变化进行跟踪,并制备模型溶液揭示其转化机制,使用2015年版《中国药典》一部余甘子项下方法跟踪余甘子提取过程没食子酸含量变化,采用超声提取作为新的提取方法并进行方法学优化。结果指纹图谱结果显示,回流过程中诃黎勒酸、柯里拉京、没食子儿茶素等呈明显下降趋势,没食子酸、诃子次酸与鞣花酸则有明显上升趋势;模型溶液结果显示,在水解过程中,柯里拉京水解生成没食子酸和鞣花酸,而诃黎勒酸首先产生1分子柯里拉京和1分子的诃子次酸,柯里拉京则继续水解生成鞣花酸和没食子酸;药典回流提取法跟踪调查显示,随回流时间增加,没食子含量不断增加。超声提取的最佳优化结果为提取时间20min,提取功率300 W,溶媒用量30 m L,提取次数1次。结论余甘子加热回流过程中所含的水解鞣质如诃黎勒酸、柯里拉京等受热水解会导致所检测的没食子酸含量偏高,影响检测结果准确性,采用超声提取可抑制鞣质的水解,保证测定结果的准确性。

去核对余甘子药材质量的影响

目的:通过化学分析和体外试验考察余甘子果核、果肉间化学成分和药理活性的差异,探究果核对余甘子药材质量的影响。方法:基于现有数据库对余甘子与去核余甘子(余甘子肉)进行文献、药材标准、市场调研;应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术对果核、果肉进行化学成分鉴定,流动相选择0.1%甲酸水溶液(A)和甲醇(B)梯度洗脱(0~25 min,5%B;25~30 min,5%~95%B;30~35 min,95%~5%B),流速0.2 mL·min-1;选择加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式检测,扫描范围m/z 100~1500。利用高效液相色谱法(HPLC)测定余甘子果核、果肉中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸和鞣花酸的含量,流动相甲醇(A)-0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~6 min,5%A;6~15 min,5%~7%A;15~20 min,7%~15%A;20~25 min,15%~21%A;25~31 min,21%~22%A;31~41 min,22%A;41~47 min,22%~28%A;47~51 min,28%~32%A;51~57 min,32%~38%A;57~70 min,38%~45%A;70~80 min,45%~65%A;80~85 min,65%~5%A),检测波长270 nm。通过滤纸片法考察余甘子果核、果肉对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌的抗菌作用,运用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除试验比较余甘子果核、果肉的抗氧化活性。结果:从余甘子果核、果肉中共鉴定出了47种化合物,主要包括鞣质类、黄酮类、酚酸类、脂肪酸类、氨基酸类、有机酸类、糖及糖苷类化合物,大部分有效成分主要集中在果肉,果核中脂肪酸类成分占比较高。HPLC含量测定结果显示20批余甘子药材果肉中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸、鞣花酸等多酚类化合物含量远远高于果核;抗菌试验结果显示不同浓度余甘子果核均不具有抗菌作用;DPPH自由基清除试验结果表明果核[半抑制浓度(IC50)=199.632 mg·L^(-1)]的抗氧化作用远小于果肉(IC50=12.688 mg·L^(-1))。结论:从多酚含量与抗菌、抗氧化活性来看,古代和现今采用余甘子肉具有一定的科学性,这可能是为了去除余甘子质次部分,以增强临床治疗效果。同时,鉴于余甘子果核占比较大,且含有较高的脂肪酸等成分,在实际临床应用中是否去核使用还有待于深入研究确认。

余甘子药材表面白霜的化学成分及“析霜”科学内涵初探

目的研究余甘子Phyllanthus emblica药材表面白霜的化学组成及析霜对其生津作用的影响,以期为余甘子“析霜者佳”的传统认知提供科学依据。方法收集余甘子药材表面形成的白霜,采用扫描电镜、能谱仪、傅里叶变换红外光谱仪和UPLC-Q-TOF-MS分析余甘子药材在贮藏过程中表面形成的白霜的化学成分;采用电子舌(E-tongue)结合志愿者的感官评定,研究药材表面析霜前后生津作用的变化;采用质谱成像技术对余甘子中化合物的含量和空间分布信息进行研究,分析其“析霜”代谢物的可能变化规律。结果扫描电镜观察表明余甘子药材表面析出白霜主要由细小的团簇晶体结构组成,能谱仪分析表明白霜主要为有机物组成,主要含有R-COOH、C-C、C-O等官能团;UPLC-Q-TOF-MS研究发现,白霜的主要成分是小分子有机酸和多酚,如粘酸、柠檬酸、DL-(+)-苹果酸和没食子酸等。感官评价及E-tongue研究发现,表面析霜后,余甘子药材滤液的酸味、涩味和苦味均不同程度增加,生津作用更加明显;质谱成像结果发现随着余甘子的干燥,其内部的DL-(+)苹果酸、没食子酸等成分会发生表面迁移。结论余甘子药材表面白霜主要是小分子有机酸及多酚类物质,“析霜”后酸味、涩味和苦味有所增强,有效成分含量增加,生津与健胃消食作用增强。