京尼平交联人胎儿血红蛋白的实验研究

目的采用京尼平(Genipin,Gnp)对人胎儿血红蛋白(hemoglobin isolated from fetal,HbF)交联反应,预期目标为有效聚合率≥70%(分子量在64~600 KD)和平均分子量100~300 KD。方法以HbF为原料,Gnp为交联剂。选择血红蛋白浓度(HbC)、Gnp与HbF的摩尔比、反应时间和反应pH进行四因素三水平正交试验(n=3),确定较佳匹配条件。制备三批次京尼平交联人胎儿血红蛋白(Gnp-HbF)样品,检查有效聚合率、二聚体、平均分子量、高铁血红蛋白(MetHb)含量及P50。结果正交试验得出Gnp-HbF较佳匹配条件:HbC为80g/L、Gnp与HbF摩尔比为7∶1、反应时间18h和反应pH为8.5。本条件下Gnp-HbF样品有效聚合率为(73.03±2.03)%,二聚体为(26.97±2.03)%,平均分子量为(167.70±28.40)KD,高铁血红蛋白占比(2.60±0.17)%,P50为(13.13±1.02)mmHg。结论Gnp能很好地交联HbF,所得到的Gnp-HbF制品各项关键指标符合要求,为后续工艺降低了制备难度。

戊二醛为交联剂制备聚合碳氧血红蛋白的实验研究

目的探讨常温、无需隔氧环境下的血红蛋白类氧载体(HBOC)制备条件及其产物聚合碳氧血红蛋白(poly-COHb)的质量。方法以人脐带血血红蛋白为原料,戊二醛为交联剂,实验组选择血红蛋白浓度、戊二醛与COHb摩尔比、反应时间和反应温度做四因素三水平正交试验(n=3),确定最佳匹配条件并制备3批poly-COHb;对照组在低温、全程隔氧条件下制备3批聚合血红蛋白(poly-Hb)。比较2组交联制品的超大分子含量、聚合度、平均分子量、高铁血红蛋白(MetHb)及P_(50)。结果按本四因素正交试验求出的poly-COHb最佳匹配条件:[Hb]70 g/L,戊二醛与COHb摩尔比为11∶1,反应时间60 min,反应温度25℃;poly-COHb与poly-Hb比较:超大分子含量(%)为0.67±0.51 vs 0.60±0.01(P>0.05),聚合度(%)与平均分子量(kD)分别为84.25±0.99 vs 54.16±5.12,235.27±13.50 vs 97.62±6.57(P<0.05),MetHb占比(%)为2.40±0.66 vs 2.47±0.46(P>0.05),P_(50)(mmHg)为6.37±0.30 vs 14.20±1.09(P<0.05)。结论在常温、无需隔氧条件下以戊二醛为交联剂制备的poly-COHb与poly-Hb相比,聚合度、平均分子量提高,大大减小制备难度。