幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)致细胞空泡毒素抗原(Vacuolating cytotoxin antigen A,vacA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法:通过比较国内H.pylori代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物。以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因。再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定。结果:扩增的vacA DNA片段约为723bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合。构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符。测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础。

新鲜全血比对法替代现有质量控制的可行性研究

目的尝试使用正常新鲜血液标本代替质量控制品在2台仪器间进行比对监测,以此建立一套经济实用、可操作性强的多仪器间的室内质量控制系统。方法以日本希森美康公司XN-3000全血细胞分析仪为参比仪器,每天在确定仪器在控后,选取1份各项检测结果均在正常参考范围内且无任何报警信号的新鲜乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血连续测定2次并将白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板计数、红细胞平均体积(MCV)结果取平均值,2 h内在参比仪器BC-5100全血细胞分析仪(深圳迈瑞公司)再次测定2次取平均值。将此数据带入公式计算两者的变异百分率,并以最初20个质量控制批次的数据计算各项目的均值(x)和标准差(s),再以变异百分率为数据基础绘制Levey-Jennings质量控制图,并以Westgard质量控制规则对质量控制图进行判断。结果通过6个月的调查发现新鲜全血比对质量控制法在随机误差与系统误差的监控方面均优于现有配套质量控制品且能有效、灵敏的检测出系统误差。结论新鲜全血比对质量控制法能够及时检测仪器的状态,对失控的检测敏感度与现有质量控制方法相当,且能为同一实验室内多仪器结果的统一性起到积极作用,是一种经济、实用、简便、可操作性强的方法。