酶原颗粒蛋白16在消化系统中的表达部位及功能研究进展

酶原颗粒蛋白16（ZG16）是1994年在胰腺酶原颗粒中发现的一种分泌性糖蛋白,该蛋白主要位于胰腺的腺泡细胞、肝细胞以及从胃到直肠的整个消化道的杯状细胞内,且表达部位不同的蛋白发挥的功能也不同。截至目前,对该蛋白的功能认知甚少,现有的功能研究主要指向调控蛋白分选、真菌识别、离子传导。

外泌体长链非编码RNA在肿瘤转移中作用机制的研究进展

外泌体作为细胞通讯中携带重要介质的载体,通过携带多种生物活性分子参与复杂的生物学过程。长链非编码RNA(lncRNA)在转录、转录后水平调控肿瘤细胞的增殖、分化与迁移。外泌体来源的lncRNA可介导细胞间的通讯,通过参与血管生成、缺氧微环境、上皮-间充质转化及肿瘤免疫逃逸等机制在调控肿瘤转移中发挥重要作用。深入研究外泌体lncRNA在肿瘤微环境的作用机制,可为肿瘤的基础研究及临床诊断、靶向治疗提供新思路。

结直肠癌组织中KIAA1522的表达及临床意义

目的:检测KIAA1522蛋白在结直肠癌中的表达变化并评价其临床意义。方法:应用组织芯片-免疫组织化学染色技术,检测96例结直肠癌组织及其配对癌旁正常组织中KIAA1522蛋白的表达情况,并对其阳性表达率与结直肠癌临床病理指标及患者预后的关系进行统计学分析。结果:KIAA1522蛋白在癌旁正常结直肠上皮细胞中主要定位于细胞浆,阳性表达率为12.5%(12/96),而在结直肠癌组织中KIAA1522蛋白阳性表达率为81.3%(78/96),两者间差异显著(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,KIAA1522蛋白阳性表达与结直肠癌患者术后3年无瘤生存期短显著正相关(P=0.017,Log-rank检验)。多因素Cox回归分析结果表明,KIAA1522蛋白阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.020)。卡方检验的分析结果显示,KIAA1522蛋白阳性表达与肿瘤的远处转移正相关(P=0.012,Fisher精确检验)。结论:KIAA1522在结直肠癌组织中的阳性表达与肿瘤的远处转移及患者术后生存期短显著相关,可能作为预测结直肠癌患者预后及转移的潜在分子标志。

成都某地区干部保健人群新发糖尿病风险分析

回顾性分析2011-2016年有连续数据的822名干部保健者的体检资料，统计分析5年内新发糖尿病者的各项指标，以年龄、性别匹配无糖尿病的同期健康体检者为对照，采用多因素logistic回归分析新发糖尿病的相关危险因素。5年中新发糖尿病患者56例，累积患病率6．81％。多因素logistic回归分析显示基线时BMI[P=0．00，OR=1.82（95％CI：1．27～2．59）]、空腹血糖[P=0．00，OR=13．63（95％CI：2．71—68．43）]与新发糖尿病密切相关。提示BMI及空腹血糖水平是该地区干部保健人群新发糖尿病的重要危险因素。

四川地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分型与临床病理特征的相关性分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR基因突变状态及其与临床病理特征的关系。方法收集2015年1月至2017年12月成都市第三人民医院确诊的NSCLC病理标本203例,其中石蜡切片113例,新鲜组织41例,胸腔积液49例。采用突变扩增阻滞系统(ARMS)-Taqman探针法检测EGFR基因外显子突变状态,分析其与临床病理特征的关系。采用Logistic回归分析影响NSCLC患者发生EGFR突变的因素。结果 203例NSCLC患者中,有97例检测到EGFR突变(47. 8%),其中TKIs药物敏感性突变82例(L858R突变44例,19-del突变35例,G719C/G719S突变1例,L861Q/S768I突变2例),TKIs耐药性突变7例,另有8例为多位点突变。多位点突变中携带T790M突变率高(87. 5%),以男性、Ⅳ期、腺癌患者为主。EGFR突变主要发生在女性、无吸烟史、腺癌患者; 19-del和L858R突变在女性中占的比例更高,分别为57. 1%和54. 5%,而其他突变类型在男性中占的比例更高(72. 2%)。Logistic回归分析显示,无吸烟史患者的EGFR突变率更高(HR=4. 146,95%CI:1. 802～9. 536)。结论四川地区NSCLC患者EGFR基因突变以L858R和19-del突变为主,女性、无吸烟史、肺腺癌患者更易发生EGFR突变,吸烟状态是预测EGFR突变的独立因素。

中性粒细胞/淋巴细胞比值与血小板/淋巴细胞比值对肺癌和社区获得性肺炎的诊断价值探讨

目的探讨中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)对肺癌和社区获得性肺炎的诊断价值。方法分析90例不同类型肺癌患者、90例健康对照者、90例社区获得性肺炎患者血NLR和PLR值。结果三组NLR和PLR值比较,肺炎组最高,肺癌组高于对照组(P<0.05)。用NLR和PLR诊断肺癌,NLR的ROC曲线下面积(AUC)为0.807,灵敏度67.78%,特异度86.67%,最适cut-off值2.94;PLR的AUC为0.713,灵敏度72.20%,特异度62.20%,最适cutoff值135.48。将NLR和PLR指标用于诊断社区获得性肺炎,NLR的AUC为0.796,灵敏度71.11%,特异度86.67%,最适cut-off值2.94。PLR的AUC为0.712,灵敏度42.22%,特异度95.56%,最适cut-off值188。结论 NLR和PLR可辅助诊断肺癌和社区获得性肺炎,进一步联合肺癌特异性诊断标志物或其他炎症指标可增加诊断灵敏度和特异度。

粪便钙卫蛋白与肠易激综合征患者临床特征的相关性

目的探讨粪便钙卫蛋白(FC)与肠易激综合征(IBS)的临床特征之间的关系。方法收集2017年10月~12月成都市第三人民医院消化内科门诊结肠镜检查无异常且符合罗马Ⅳ诊断标准的IBS患者30例(IBS组),收集同期健康对照者30例,以酶联免疫吸附法定量检测粪便的钙卫蛋白含量,分析粪便钙卫蛋白与肠易激综合征患者临床特征的相关性。结果IBS患者粪便中钙卫蛋白含量与健康人比较无差异(P<0.05)。粪便钙卫蛋白IBS患病时间、腹痛>6个月、解稀水便有相关性(P<0.05)。与健康人群相比,IBS患病开始即出现粪便钙卫蛋白水平有显著降低(t=-2.621,P=0.012),而1~5年IBS患者粪便钙卫蛋白水平更降低(t=3.44,P=0.002)。同时,腹痛>6个月的患者FC有显著增加。结论粪便钙卫蛋白与IBS患者的患病时间、腹痛6个月以上、解稀水便等临床特征具有相关性。

分选连接蛋白及其相关细胞信号通路

分选连接蛋白(sorting nexins,SNXs)是一类包含PX(phox homology)结构域的高度保守真核生物蛋白,其功能主要是参与负载蛋白的内吞、分选和降解过程,以维持细胞信号的稳态和平衡。SNXs参与调控与肿瘤等疾病相关的重要信号通路,如SNX3介导分泌型糖蛋白Wnt受体Wntless的胞内循环;SNX1、SNX5等众多SNXs介导表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和转化因子β受体(TGF-β)等的内吞、分选和降解等过程。其中,对EGFR降解的调控研究最多,尤其是在肿瘤方面的进展令人鼓舞,可也较为复杂,仍有许多未解之谜。随着SNXs的深入研究,将对疾病的发生机制产生新的认识。

p-mTOR蛋白在结直肠癌组织中的表达及患者预后判断中的价值

目的:检测p-mTOR(Ser2448,活化形式的m TOR)蛋白在结直肠癌中的表达变化并评价其用于判断患者预后的价值。方法:采用组织芯片-免疫组织化学染色技术,检测441例结直肠癌及其配对癌旁正常组织中p-mTOR的表达,收集患者至少5年的随访信息,并分析其表达水平与临床病理指标及患者预后的相关性。结果:免疫组织化学染色结果显示p-mTOR在癌旁正常结直肠上皮细胞中阳性表达率为4%(17/441),而在结直肠癌组织中阳性表达率为58%(254/441),两者间差异显著(P<0.01)。统计分析结果显示,在结直肠癌组织中,p-mTOR的表达水平与肿瘤分级、淋巴结转移、远处转移及病理分期显著正相关(P均<0.05)。同时,p-mTOR的表达水平与结直肠癌患者的预后显著相关(P均<0.05),p-mTOR高表达患者的无病生存期和总生存期分别为52和60个月,明显短于p-mTOR低表达患者的71和70个月。Cox多因素分析结果显示p-mTOR表达水平为结直肠癌患者的独立预后因素。结论:p-mTOR在结直肠癌组织中表达上调,其高表达与结直肠癌患者预后不良相关,有可能作为预测结直肠癌患者术后死亡及复发转移风险的候选分子标志物。

人骨诱导因子和绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体的构建和鉴定及在HT-29细胞中的表达

目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒pEZ-hOGN-SV40-eGFP-IRES-Puro(pEZ-hOGN)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-PacHIVmix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的pEZ-hOGN感染HT-29细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后HT-29细胞中GFP表达情况和目的基因hOGN的表达情况。结果基因测序分析证实克隆的hOGN基因与GenBank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实OGN正确插入pEZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1×10~9TU/ml。在HT-29细胞中重组病毒感染96h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在HT-29细胞中hOGN蛋白过表达。结论成功构建携带hOGN基因的重组慢病毒载体,在HT-29细胞中有效表达。

应用生物信息学方法筛选结直肠癌关键基因

目的 采用4个芯片数据集来挖掘结直肠癌差异基因,通过基因注释和蛋白相互作用网络构建找到关键基因。方法 下载GEO芯片数据GSE4398、GSE21815、GSE32323、GSE44076,筛选结直肠癌和正常组织间差异表达的基因,采用R3.4.4软件进行数据处理和分析,通过取交集获得候选的差异基因,通过Funrich软件进行基因功能分析,通过String和Cytoscape软件进行基因编码蛋白的相互作用分析。结果 通过差异基因分析并取4个GEO数据集的交集,一共获得430个差异表达基因,其中表达上调的基因277个,表达下调的基因153个。基因富集分析发现,表达上调的基因主要位于细胞核、细胞浆、微管、中心体和细胞外;主要参与纺锤体组装;主要参与调节趋化因子活性,在细胞周期、有丝分裂G1-G1/S期、M-M/G1期、G2/M期、DNA破坏关键节点及DNA复制等信号通路中富集。153个表达下调的基因主要富集在细胞外、参与代谢过程,发挥的分子功能主要是催化活性和配体依赖性核受体活性,下调基因没有富集在某条信号通路上。通过蛋白互作网络初步鉴定了CDK1、CCNB1、TOP2A、MAD2L1、TTK、BUB1B、AURKA、RRM2、UBE2C、ASPM等结直肠癌相关的关键基因。结论 通过基因芯片结合生物信息学方法,发现了结直肠癌相关的关键基因,有助于明确结直肠癌发病的分子机制,这些关键基因也可作为结直肠癌的治疗靶点。

胸腺肽β4通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路致敏肥大细胞的研究

目的研究胸腺肽β4(Tβ4)对肥大细胞的致敏作用及可能的机制。方法将不同浓度的Tβ4作用于肥大细胞株RBL-2H3,检测肥大细胞释放的β氨基己糖苷酶。用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路特异性抑制剂10μmol·L^(-1)U0126或抗过敏剂5 mmol·L^(-1)色甘酸钠分别联合4 pmol·L^(-1)Tβ4作用于小鼠肠黏膜肥大细胞,检测是否可以阻断Tβ4对肥大细胞β氨基己糖苷酶的释放作用。结果随着Tβ4浓度的增加对肥大细胞的脱颗粒效应逐渐增加,在4 pmol·L^(-1)时达到峰值。同样,4 pmol·L^(-1)的Tβ4可显著引起肠道肥大细胞的过敏反应,U0126和色甘酸钠可以抑制Tβ4的致敏效应。结论 Tβ4可通过MAPK信号通路致敏肠黏膜肥大细胞,但可被U0126和色甘酸钠阻断。这为Tβ4的药物开发和应用提供参考依据。

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR(QNRT-PCR)检测结核分枝杆菌(MTB)DNA的临床价值。方法应用SYBR GreenⅠ建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT-PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTB DNA含量。结果以培养为金标准,QNRT-PCR敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)分别为95.83%、61.54%、69.70%和94.12%,结核性胸膜炎的阳性率为70.37%。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05),QNRT-PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义(P>0.05),QNRT-PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 QNRT-PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。

微小RNA与脂质代谢

脂质是机体的能量仓库，是细胞质和细胞膜的重要成分，也是细胞信号通路与调控的重要分子，并合成类固醇激素。脂类代谢受遗传、神经体液、激素、酶以及肝脏等组织器官的调节。脂代谢紊乱可引起高脂蛋白血症、血管硬化（心血管疾病）、脂质贮积病、肥胖症、酮症酸中毒、脂肪肝和新生儿硬肿症等多种疾病，同时其他代谢类疾病也可引起脂质代谢的紊乱，如糖尿病。

Hp感染性胃溃疡患者炎症活动度与血清TNF-α、IL-17表达水平的相关性

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染性胃溃疡患者炎症活动度与血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)表达水平的相关性。方法选取成都市第三人民医院2017年6月-2019年10月诊治的200例胃溃疡患者作为研究对象,根据尿素(13C)呼气诊断试验分为Hp(+)组(n=116)和Hp(-)组(n=84),根据组织病理学检查结果对Hp(+)患者炎症活动度进行分级,另选取同期来本院检查的健康人作为对照组(n=93),检测所有研究对象TNF-α和IL-17水平,分析炎症活动度与TNF-α、IL-17表达水平的相关性。结果三组研究对象TNF-α、IL-17水平差异有统计学意义,其中Hp(+)组患者TNF-α、IL-17水平均高于Hp(-)组和对照组,Hp(-)组TNF-α、IL-17水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同炎症活动度TNF-α、IL-17水平差异有统计学意义(P<0.05),随着炎症活动度的增加,血清TNF-α、IL-17水平逐渐升高(P<0.05)。Hp感染性胃溃疡患者炎症活动度与血清TNF-α、IL-17表达水平均呈正相关(r=0.885,P<0.05;r=0.758,P<0.05)。结论Hp感染性胃溃疡患者炎症活动度与TNF-α、IL-17表达水平均呈正相关。