四川地区结核分枝杆菌喹诺酮耐药基因突变研究

目的 研究结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制 ,探索四川地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床分离株的耐药基因突变特征。方法 采用绝对浓度法检测结核分枝杆菌临床分离株的最小抑菌浓度 (MIC) ,再通过聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR- SSCP)和直接测序检测结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物临床分离株 gyr A耐药决定区 (QRDR)突变 ,并和标准株 H 37Rv比较。结果 6 8株临床分离株中 ,14株喹诺酮药物敏感株和 8株低耐药株未发现 gyr A耐药决定区基因突变 ,2 5株高耐药株、11株低耐药株和 10株药物敏感株检测到 gyr A基因突变 ,高耐药株突变率为 10 0 % ,低耐药株突变率为 5 8% ,敏感株突变率为 4 2 % ,总的突变率为 6 8%。根据 SSCP条带 ,gyr A突变可分成 4种类型 ,测序发现分别为 Ser95 Thr、Asp94 Gly、Ala90 Val、Ala83Val突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与 gyr A基因突变密切相关 ,gyr A基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制。

汉、藏族肺结核患者血清差异蛋白质的质谱分析

目的用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术比较汉、藏族肺结核患者之间及其与相应的非结核对照者之间的血清差异蛋白,以寻找各自的质谱诊断模型并比较两个民族肺结核的蛋白质差异。方法收集2008年6月至2009年3月四川大学华西医院呼吸科结核病区、西藏自治区驻成都办事处医院内科、成都市传染病医院和成都市结核病防治研究院内科住院患者及门诊健康体检者共154份血清样本,其中87例活动性肺结核患者(汉族38例,藏族49例),67例非结核对照(汉族36例,藏族31例)。SELDI-TOF MS质谱分析分为训练组和测试组:训练组包含53例肺结核(汉族23例,藏族30例)和42例非结核对照(汉族20例,藏族22例),所获得的血清质谱用决策树的学习算法来进行分析,得到的诊断模型再用另一个独立的测试组来进行准确性验证,测试组包含59份血清样本:34例肺结核(汉族15例,藏族19例),25例非结核对照(汉族16例,藏族9例)。结果训练组中得到的诊断模型质荷比(m/z)为3193.61、4592.11可以诊断出20/23例汉族肺结核和17/20例汉族对照,准确度86.04%(敏感性为86.95%,特异性为85.00%),模型m/z为4821.45能够诊断出28/30例藏族肺结核和19/22例藏族对照,准确度90.38%(敏感性93.33%,特异性86.36%),而模型m/z为4091.98、3398.27、7970.44、4965.51、7970.44则能够将藏族肺结核从汉族患者中区分出来(准确度92.45%)。在相应的验证组中,3个诊断模型的准确度分别为70.96%、71.42%和67.92%。同时发现藏、汉族肺结核之间有16个差异蛋白峰。结论SELDI-TOF MS对汉、藏族肺结核的诊断均具有较高价值,两个民族的肺结核患者存在一定的蛋白质表达差异。