僵蚕药材及饮片质量标准研究

目的:对不同来源僵蚕质量进行评价,完善其质量标准。方法:建立僵蚕中白僵菌素、草酸铵HPLC含量测定方法,对58批次具有代表性的不同来源僵蚕药材及饮片进行测定分析。结果:58批次僵蚕样品中,10批次未检出特征性成分白僵菌素、草酸铵,占比17.2%。白僵菌素含量分布在0.0101%~0.1192%间,草酸铵含量分布在4.71%~10.84%间,两者呈显著正相关(P<0.01)。结论:本研究建立的方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可有效评价和控制僵蚕质量。僵蚕存在较高质量风险,有待进一步完善僵蚕质量标准。

柑橘类药材中辛弗林含量研究

目的:比较柑橘类药材(陈皮、青皮、枳实、香橼等)中辛弗林含量差异,为相关药材质量评价提供参考。方法:建立了柑橘类药材中辛弗林HPLC含量测定方法;分析采用Waters SPHERISORBSCX(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.2%磷酸溶液(氨试液调pH至3.8)(35∶65)为流动相,检测波长223 nm,柱温30℃。比较了陈皮、青皮、枳实、香橼等柑橘类药材及陈皮不同栽培品种果皮中辛弗林的含量分布情况。结果:辛弗林在进样浓度2.8428~568.5606μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=1.0000);平均回收率为102.92%,RSD为1.39%(n=9)。柑橘类药材中辛弗林含量高低为青皮>枳实>陈皮(大红袍)>陈皮(茶枝柑)>橙皮>柠檬>枸橘,佛手、香橼、化橘红、柚皮、金橘中未检出。陈皮类药材不同栽培品种果皮中,大红袍陈皮中辛弗林含量最高,杂陈皮椪柑次之,杂陈皮不知火、春香中辛弗林含量最低。结论:柑橘类药材中辛弗林分布规律与其植物分类存在一定相关性,宽皮柑橘、橙这两类柑橘属药材中辛弗林含量较高,且未成熟果皮中辛弗林含量高于成熟果皮;而陈皮类药材不同栽培品种果皮中辛弗林含量也存在差异。本研究可为柑橘类药材的质量评价和应用提供一定参考和依据。

Box-Behnken响应面法优化虎杖提取工艺及其质量标准研究

目的:优化虎杖提取工艺,在此基础上建立虎杖提取物的质量标准。方法:以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素含量的综合评分(Y)为评价指标,采用Box-Behnken响应面法对虎杖提取工艺的乙醇浓度、提取时间、提取温度进行筛选。根据优化工艺制备10批来自不同产地的虎杖提取物,采用TLC建立提取物中虎杖苷、大黄素的定性鉴别方法,并计算10批提取物的含水量。运用HPLC得到10批提取物中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量,并建立提取物指纹图谱。结果:响应面法优化出的工艺为乙醇浓度60%、提取时间75 min、提取温度70℃。TLC结果显示提取物中虎杖苷、大黄素的斑点清晰,分离度好。10批提取物的水分含量范围为2.83%-5.17%。虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量范围分别为15.19-36.36 mg/g、0.95-5.71 mg/g、5.20-15.47 mg/g。10批虎杖提取物的指纹图谱中出现了11个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均高于0.90。结论:优化出的虎杖提取工艺稳定可行,在此基础上建立的虎杖提取物质量标准可重复性和稳定性良好。初步拟定虎杖提取物中水分不得过6.00%。按干燥品计算,虎杖苷、白藜芦醇、大黄素含量分别不得少于15.10、0.90、5.00 mg/g。

肤痒颗粒中9种成分含量同时测定及其化学模式识别研究

目的 同时测定肤痒颗粒中新绿原酸、咖啡酸、绿原酸、隐绿原酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A的含量,并进行化学模式识别。方法 UHPLC分析采用Waters Acquity UPLC?BEH C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm);流动相乙腈-0.01%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温35℃;检测波长278、322、325、390 nm。再进行热图聚类分析、主成分分析。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率93.89%~102.25%,RSD 0.85%~2.88%。同一企业不同批次样品整体质量一致,而不同企业样品之间整体质量差异较大。2个主成分累积贡献率大于64%。结论 该方法简便准确,可为肤痒颗粒质量评价提供参考。

附子粗多糖的结构特征及抗氧化活性研究

目的:探究附子粗多糖的结构特征及抗氧化作用。方法:采用水提醇沉、三氯甲烷脱蛋白等方法制备附子粗多糖,通过紫外-可见光谱、热重分析以及扫描电镜推测其可能存在的结构,最后测定其DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力以评估多糖的抗氧化效果。结果:紫外光谱分析附子粗多糖不含核酸、蛋白质以及多肽等物质;扫描电镜观察其呈片状不规则形态;热重数据分析附子多糖具有两个失重阶段,具有典型的多糖类失重现象;在体外抗氧化活性研究中,附子粗多糖对DPPH和羟自由基的清除率分别高达98.01%和96.08%,具有较强的体外抗氧化活性。结论:附子粗多糖热稳定较好,抗氧化能力较强,可作为潜在的抗氧化剂。

僵蚕中非法添加硼砂检测

目的:建立僵蚕中非法添加物硼砂的定性、定量检测方法,对市售僵蚕药材中非法添加硼砂情况进行筛查,以保障临床用药安全。方法:硼砂在酸性条件下转化为硼酸,与姜黄素结合生成有色的络合物,颜色深浅与硼酸含量成正比。采用改良姜黄试纸法对僵蚕中硼砂进行快速定性筛查,紫外-可见分光光度法准确测定硼砂含量。结果:改良的姜黄试纸灵敏度与《中华人民共和国药典》方法制备的姜黄试纸相当,且高于市售试纸;其制备以姜黄素代替姜黄粉末,操作更简便,并大幅缩短制备时间。硼砂在2.53259~12.66295μg/mL范围内,与吸光度呈良好线性关系(r=0.9997),平均加样回收率为101.20%,RSD为2.37%(n=9)。对31批市售僵蚕药材中硼砂进行定性、定量检测,结果7批检出硼砂,硼砂含量分布在0.03%~5.63%之间。结论:目前市场上僵蚕存在违法添加硼砂现象,需加强宣传及监管力度来遏制此类违法现象。

基于波长切换技术的风热感冒颗粒UPLC指纹图谱研究

目的:建立风热感冒颗粒的UPLC指纹图谱。方法:采用UPLC法,色谱柱为Waters Acquity UPLC Hss T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.01%磷酸(梯度洗脱),流速为0.5 ml·min^(-1),检测波长切换测定,柱温为30℃,进样量为1μl。以牛蒡苷为参照,测定15批风热感冒颗粒的UPLC图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)进行共有峰指认和相似度评价。结果:建立了风热感冒颗粒的UPLC指纹图谱,确认了19个共有峰,指认了14个成分,15批制剂的相似度为0.92~0.98。结论:该研究所建UPLC指纹图谱可为风热感冒颗粒的质量评价提供参考。

不同产地续断HPLC指纹图谱研究

目的建立并比较续断不同产地、不同部位、伪品的HPLC指纹图谱,提高续断的质量控制水平。方法采用Diamonsil C_(18)(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长218 nm,柱温35℃。结果32批续断HPLC指纹图谱共标记了28个共有峰,并指认出川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、川续断皂苷乙、马钱苷、当药苷、异绿原酸A、咖啡酸、马钱苷酸、异绿原酸C、续断苷A、异绿原酸B、续断苷B 12个成分,不同产地续断指纹图谱相似度极高;续断不同部位和伪品指纹图谱相似度差异较大。结论建立的续断指纹图谱测定方法准确可靠,专属性较强,可用于续断的快速鉴别,为续断复方制剂的质量控制提供有效手段。

川产陈皮(“大红袍”)的数字化及其应用

目的:以川产陈皮为例,探讨中药材数字化思路。方法:以实地调研、文献查阅与试验研究相结合,利用数字化工具记录和分析。结果:建立了川产陈皮的数字化示范模式,包含本草文献、法定标准、化学成分、药理作用、基原及药材鉴定、种植及采收加工、品质及商品规格等内容。结论:本数字化研究内容示范性及实用性强,可用于指导栽培、产地加工、企业生产、检验及科研等,可推广应用。

蓬莪术醋制前后改善斑马鱼急性肝损伤的作用机制研究

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad3信号通路探讨醋制前后蓬莪术改善硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导斑马鱼急性肝损伤的作用机制。方法以醋制前后的蓬莪术为研究对象,建立TAA诱导斑马鱼急性肝损伤模型,将醋制前后蓬莪术水煎液分别设置高、中、低剂量(8、4、2 mg/mL)组,以异甘草酸镁为阳性对照药物组,斑马鱼培养水为对照组,给药72 h后观察斑马鱼幼鱼肝脏形态,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;采用试剂盒检测斑马鱼幼鱼中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;利用qRT-PCR检测斑马鱼幼鱼Nrf2、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、Smad3和Smad7基因表达;Western blotting测定斑马鱼幼鱼Nrf2/HO-1和TGF-β/Smad3信号通路相关蛋白表达。结果醋制前后蓬莪术对TAA导致的肝组织细胞形态损伤具有保护作用。生化结果表明,与模型组比较,醋制前后蓬莪术水煎液组ALT、AST活性及GSH水平均显著升高(P<0.05、0.01、0.001),MDA水平均显著降低(P<0.001)。qRT-PCR结果表明,与模型组比较,醋制前后蓬莪术水煎液组Nrf2、IL-10、Smad7 m RNA表达水平显著升高(P<0.05、0.01、0.001),醋蓬莪术水煎液高剂量组Smad3 m RNA表达水平显著降低(P<0.001);其中,与等剂量蓬莪术组相比,醋蓬莪术高剂量组显著抑制Nrf2、Smad3的m RNA表达(P<0.05、0.001),且醋蓬莪术具有促进IL-10和Smad7 m RNA表达的趋势,但没有显著性差异。Western blotting结果表明,与模型组比较,蓬莪术水煎液高、中剂量组和醋蓬莪术水煎液各剂量组Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.001),蓬莪术高剂量组和醋蓬莪术各剂量组Smad3蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01、0.001),蓬莪术水煎液高剂量组和醋蓬莪术水煎液高、中剂量组TGF-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01、0.001);其中,与等剂量蓬莪术组相比,醋蓬莪术各剂量组Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.001),且醋蓬莪术具有抑制Smad3和TGF-β蛋白表达的趋势,但没有显著性差异。结论醋制前后的蓬莪术可以不同程度地改善TAA诱发的急性肝损伤,其作用机制可能与调控Nrf2/HO-1和TGF-β/Smad3信号通路有关。

UPLC法同时测定风热感冒颗粒中13种成分

目的建立UPLC法同时测定风热感冒颗粒(板蓝根、连翘、菊花等)中(R,S)-告依春、连翘酯苷A、连翘酯苷I、连翘苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、苦杏仁苷、牛蒡苷、牛蒡苷元的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Waters Acquity UPLC Hss T3色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相乙腈-0.01%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;检测波长207、227、240、327 nm。结果13种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9995),平均加样回收率95.42%~103.52%,RSD 1.41%~2.89%。结论该方法灵敏简便,重复性好,可用于风热感冒颗粒的质量控制。

基于Copula函数研究莪术-三棱药对治疗“气滞血瘀”证的方剂剂量耦合效应

目的构建Copula函数,研究莪术Curcuma Rhizoma-三棱Sparganii Rhizoma药对治疗“气滞血瘀”证的方剂剂量耦合效应。方法从自建方剂数据库中收集治疗“气滞血瘀”证并含莪术-三棱药对的中医方剂,对其中莪术剂量和三棱剂量进行数据处理和检验,从阿基米德Copula函数族、椭圆Copula函数族中选择出最佳的Copula函数建立数学模型,描绘联合分布函数图,测算Kendall秩相关系数和Spearman秩相关系数,监测莪术剂量和三棱剂量数据间的相关性。结果整理归纳出505首方剂。Gaussian Copula函数模型能较好地反映莪术剂量和三棱剂量之间的相关性,莪术剂量和三棱剂量的Kendall秩相关系数为0.2256,Spearman秩相关系数为0.3330,说明莪术剂量和三棱剂量之间具有较强的非线性关系,且呈正相关,当剂量增加时,两者之间的耦合效应会增强。结论基于Copula函数模型,研究莪术-三棱药对在中医方剂配伍中的剂量相关性,从数据挖掘和数理统计角度为传统经典药对相须为用提供依据,为研究中药药对在中医药方剂配伍中的剂量关系提供新思路。

基于熵权-TOPSIS模型优选三棱醋制方法

目的 构建熵权-逼近理想解排序法(technique for order preferenceby similarity to ideal solution,TOPSIS)模型,通过多指标成分含量测定的分析比较,为优选三棱Sparganii Rhizoma醋制方法提供科学依据。方法 采用醋炙法、醋烤法、醋蒸法、醋煮法4种不同醋制方法对三棱进行炮制加工,HPLC法测定对羟基苯甲酸、香草酸、香兰素、对羟基苯甲醛、阿魏酸5种成分含量变化,并以上述5种成分的含量作为评价指标,利用熵权法测定不同评价指标的信息熵以确定各评价指标权重,利用熵权法加权生成的数据进行TOPSIS模型分析,通过讨论正理想解和负理想解,对三棱醋制方法进行综合分析评价,进而优选三棱最佳醋制方法。结果 不同方法醋制的三棱成分含量差异较大,醋炙法炮制后,对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香兰素成分含量显著增加;醋煮法炮制后,阿魏酸、香兰素成分含量显著降低,其他无显著变化。经熵权-TOPSIS模型测算,三棱的生品、醋炙品、醋蒸品、醋烤品、醋煮品的相对接近度分别为0.193、0.932、0.227、0.523、0.082,可知三棱不同醋制方法中醋炙法最佳,醋烤法与醋蒸法次之,醋煮法最差。结论 基于熵权-TOPSIS模型优选出三棱最佳醋制方法为醋炙法,为中药炮制工艺的选择与临床炮制品的合理使用提供科学依据。