僵蚕药材及饮片质量标准研究

目的:对不同来源僵蚕质量进行评价,完善其质量标准。方法:建立僵蚕中白僵菌素、草酸铵HPLC含量测定方法,对58批次具有代表性的不同来源僵蚕药材及饮片进行测定分析。结果:58批次僵蚕样品中,10批次未检出特征性成分白僵菌素、草酸铵,占比17.2%。白僵菌素含量分布在0.0101%~0.1192%间,草酸铵含量分布在4.71%~10.84%间,两者呈显著正相关(P<0.01)。结论:本研究建立的方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可有效评价和控制僵蚕质量。僵蚕存在较高质量风险,有待进一步完善僵蚕质量标准。

柑橘类药材中辛弗林含量研究

目的:比较柑橘类药材(陈皮、青皮、枳实、香橼等)中辛弗林含量差异,为相关药材质量评价提供参考。方法:建立了柑橘类药材中辛弗林HPLC含量测定方法;分析采用Waters SPHERISORBSCX(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.2%磷酸溶液(氨试液调pH至3.8)(35∶65)为流动相,检测波长223 nm,柱温30℃。比较了陈皮、青皮、枳实、香橼等柑橘类药材及陈皮不同栽培品种果皮中辛弗林的含量分布情况。结果:辛弗林在进样浓度2.8428~568.5606μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=1.0000);平均回收率为102.92%,RSD为1.39%(n=9)。柑橘类药材中辛弗林含量高低为青皮>枳实>陈皮(大红袍)>陈皮(茶枝柑)>橙皮>柠檬>枸橘,佛手、香橼、化橘红、柚皮、金橘中未检出。陈皮类药材不同栽培品种果皮中,大红袍陈皮中辛弗林含量最高,杂陈皮椪柑次之,杂陈皮不知火、春香中辛弗林含量最低。结论:柑橘类药材中辛弗林分布规律与其植物分类存在一定相关性,宽皮柑橘、橙这两类柑橘属药材中辛弗林含量较高,且未成熟果皮中辛弗林含量高于成熟果皮;而陈皮类药材不同栽培品种果皮中辛弗林含量也存在差异。本研究可为柑橘类药材的质量评价和应用提供一定参考和依据。

Box-Behnken响应面法优化虎杖提取工艺及其质量标准研究

目的:优化虎杖提取工艺,在此基础上建立虎杖提取物的质量标准。方法:以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素含量的综合评分(Y)为评价指标,采用Box-Behnken响应面法对虎杖提取工艺的乙醇浓度、提取时间、提取温度进行筛选。根据优化工艺制备10批来自不同产地的虎杖提取物,采用TLC建立提取物中虎杖苷、大黄素的定性鉴别方法,并计算10批提取物的含水量。运用HPLC得到10批提取物中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量,并建立提取物指纹图谱。结果:响应面法优化出的工艺为乙醇浓度60%、提取时间75 min、提取温度70℃。TLC结果显示提取物中虎杖苷、大黄素的斑点清晰,分离度好。10批提取物的水分含量范围为2.83%-5.17%。虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量范围分别为15.19-36.36 mg/g、0.95-5.71 mg/g、5.20-15.47 mg/g。10批虎杖提取物的指纹图谱中出现了11个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均高于0.90。结论:优化出的虎杖提取工艺稳定可行,在此基础上建立的虎杖提取物质量标准可重复性和稳定性良好。初步拟定虎杖提取物中水分不得过6.00%。按干燥品计算,虎杖苷、白藜芦醇、大黄素含量分别不得少于15.10、0.90、5.00 mg/g。

不同基源川贝母化学成分和药理作用研究进展

以“川贝母”“基源”“暗紫贝母”“太白贝母”“瓦布贝母”“梭砂贝母”“甘肃贝母”“化学成分”“药理作用”等作为关键词,检索并收集归纳中国知网、万方网、维普网等数据库近年相关文献,发现不同基源川贝母化学成分和药理作用具有差异。从化学成分角度看,卷叶贝母和太白贝母总生物碱含量最为丰富。从药理作用角度看,暗紫贝母和太白贝母镇咳、祛痰和平喘的作用最为突出。通过探讨、比较不同基源川贝母化学成分和药理作用的差异,为川贝母的现代应用及不同基源的选取提供参考。

微生物作用下陈皮陈化前后化学成分及药理作用研究进展

研究陈皮表面微生物分布情况,了解微生物作用下陈皮陈化过程中化学成分与药理作用变化,为陈皮的合理临床应用提供参考依据。迄今为止,已发现16种细菌属、22种真菌对陈皮在陈化过程中的化学成分具有转化作用,其中细菌以芽孢杆菌属为主,真菌以曲霉属为主。陈化过程中,放线菌门与曲霉门对黄酮类物质影响较为显著;环碎屑菌科、假单胞菌科、黑曲霉属、芽孢杆菌属、寡养单胞菌属、嗜酸菌属、鞘氨醇单胞菌属、肠杆菌属、新衣原体属、甲基杆菌属等对挥发油类成分有影响;暹罗芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、史密氏菌、黑曲霉菌等对多糖有消耗和转化作用。陈化后陈皮多种化学成分总含量上升,药理作用较陈化前有所加强。陈皮在陈化过程中经过微生物的作用,使其黄酮类、生物碱类成分总量增多,多糖类成分水溶性提高,挥发油类成分中烃类、醛酮类和酚类变化最明显,较前新增了酯、酸、醇等成分。

肤痒颗粒中9种成分含量同时测定及其化学模式识别研究

目的 同时测定肤痒颗粒中新绿原酸、咖啡酸、绿原酸、隐绿原酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A的含量,并进行化学模式识别。方法 UHPLC分析采用Waters Acquity UPLC?BEH C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm);流动相乙腈-0.01%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温35℃;检测波长278、322、325、390 nm。再进行热图聚类分析、主成分分析。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率93.89%~102.25%,RSD 0.85%~2.88%。同一企业不同批次样品整体质量一致,而不同企业样品之间整体质量差异较大。2个主成分累积贡献率大于64%。结论 该方法简便准确,可为肤痒颗粒质量评价提供参考。

松贝中生物碱含量测定及清洗加工方式评价

目的:同时测定松贝中西贝母碱苷和西贝母碱的含量,考察不同清洗加工方式对松贝中西贝母碱苷和西贝母碱含量的影响。方法:采用UPLC-MS/MS法,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(含10 mmol/L甲酸铵)梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃,质谱采用ESI+离子源,动态多反应监测模式检测。结果:松贝中2种生物碱成分在一定浓度范围内线性关系良好,所用方法精密度、重复性、稳定性良好,平均回收率为90.48%和93.60%,RSD<3%。不同产地松贝中西贝母碱苷和西贝母碱含量差异较大;不同清洗加工方式处理后松贝中西贝母碱和西贝母碱苷的含量具有一定差异。结论:所用方法能全面、准确地测定松贝中2种生物碱成分的含量。该研究可为松贝的质量控制、临床应用和综合评价提供参考依据。

电子鼻技术应用于木香和川木香的快速鉴别研究

目的:基于超快速气相电子鼻技术建立一种快速鉴别木香与川木香的方法。方法:收集市场上不同来源的木香与川木香样品,基于HeraclesⅡ超快速气相电子鼻探索建立合适的气味分析方法,结合Kovats保留指数及Arochembase数据库对木香和川木香的气味化合物进行分析研究;针对采集的气味指纹信息,建立主成分分析(PCA)、判别因子分析(DFA)、软独立建模分析(SIMCA)和统计质量控制分析(SQCA)模型,对其气味信息进行数据处理和分析。结果:通过对比气味指纹信息发现木香与川木香存在较大差异,建立的PCA、DFA、SIMCA、SQCA模型均能实现对木香与川木香的快速识别。结论:该方法简单、快速、准确,为快速无损鉴别木香和川木香提供了新技术和新依据。

附子粗多糖的结构特征及抗氧化活性研究

目的:探究附子粗多糖的结构特征及抗氧化作用。方法:采用水提醇沉、三氯甲烷脱蛋白等方法制备附子粗多糖,通过紫外-可见光谱、热重分析以及扫描电镜推测其可能存在的结构,最后测定其DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力以评估多糖的抗氧化效果。结果:紫外光谱分析附子粗多糖不含核酸、蛋白质以及多肽等物质;扫描电镜观察其呈片状不规则形态;热重数据分析附子多糖具有两个失重阶段,具有典型的多糖类失重现象;在体外抗氧化活性研究中,附子粗多糖对DPPH和羟自由基的清除率分别高达98.01%和96.08%,具有较强的体外抗氧化活性。结论:附子粗多糖热稳定较好,抗氧化能力较强,可作为潜在的抗氧化剂。

基于波长切换技术的风热感冒颗粒UPLC指纹图谱研究

目的:建立风热感冒颗粒的UPLC指纹图谱。方法:采用UPLC法,色谱柱为Waters Acquity UPLC Hss T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.01%磷酸(梯度洗脱),流速为0.5 ml·min^(-1),检测波长切换测定,柱温为30℃,进样量为1μl。以牛蒡苷为参照,测定15批风热感冒颗粒的UPLC图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)进行共有峰指认和相似度评价。结果:建立了风热感冒颗粒的UPLC指纹图谱,确认了19个共有峰,指认了14个成分,15批制剂的相似度为0.92~0.98。结论:该研究所建UPLC指纹图谱可为风热感冒颗粒的质量评价提供参考。

不同产地续断HPLC指纹图谱研究

目的建立并比较续断不同产地、不同部位、伪品的HPLC指纹图谱,提高续断的质量控制水平。方法采用Diamonsil C_(18)(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长218 nm,柱温35℃。结果32批续断HPLC指纹图谱共标记了28个共有峰,并指认出川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、川续断皂苷乙、马钱苷、当药苷、异绿原酸A、咖啡酸、马钱苷酸、异绿原酸C、续断苷A、异绿原酸B、续断苷B 12个成分,不同产地续断指纹图谱相似度极高;续断不同部位和伪品指纹图谱相似度差异较大。结论建立的续断指纹图谱测定方法准确可靠,专属性较强,可用于续断的快速鉴别,为续断复方制剂的质量控制提供有效手段。

智能感官技术在中药领域的应用研究进展

目的:分析总结近年来智能感官技术在中药领域的应用情况及存在的问题。方法:调研相关文献结合工作体会,进行归纳和总结。结果:对常用智能感官技术的原理、优点和使用范围进行概述;整理智能感官技术应用于中药质量控制的相关研究,以及不同产地、不同部位、不同采收期和不同储藏期中药材及饮片鉴别,中药炮制和中药制剂矫味等方面的应用研究现状;讨论智能感官技术应用于中药领域的局限性及未来的发展方向。结论:智能感官技术具备独特的应用优势并被初步探索应用于中药领域的多个方面,但想要应用于中药领域的生产实际仍需更深入的研究。

DART-MS法快速检测姜黄属中药中姜黄素类化合物的适用性研究

目的建立实时直接分析质谱(direct analysis in real-time-mass spectrometer,DART-MS)法检测姜黄属中药中姜黄素类化合物的分析方法,并探究该方法在中药领域应用的可行性。方法利用DART-MS技术,通过单因素实验,优化进样速度、格栅电压、提取溶剂等实验参数条件,获得最佳检测限。与采用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(ultra performance liquid chromatography-electric spray ion source-mass spectrometer,UPLC-ESI-MS)技术检测的结果作比较,并进行方法学验证,以此评价采用DART-MS技术进行快速检测姜黄素类化合物的可行性。结果优化后的DART检测条件:电离源气体温度300℃,格栅电压(grid voltage,GV)100 V,进样速度0.2 mm/s,并以60%丙酮水溶液作为提取剂,以获得最佳信号强度。结果表明,在负离子模式下,姜黄素(curcumin,CUR)、去甲氧基姜黄素(demethoxycurcumin,DMC)、双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)的标准曲线呈现良好线性关系,检测限分别为0.08、0.10、0.07 ng/mL,定量限分别为0.22、0.34、0.19 ng/mL,3种化合物的平均回收率处于98.75%~100.61%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于5%。采用DART-MS和UPLC-ESI-MS对3种姜黄素检测的结果一致。结论该方法精确度高、准确度高、重复性好,能快速、准确、有效地检测姜黄属中药中姜黄素类化合物,在中药等领域具有潜在的应用价值。

基于15种成分定量结合化学模式识别及TOPSIS分析的三黄片质量评价

目的建立三黄片(Sanhuang Tablets)UPLC多组分定量分析方法,联合化学模式识别分析及优劣解距离法(technique for order preference by similarity to an ideal solution,TOPSIS)分析,对不同厂家的三黄片质量进行综合评价,为三黄片的品质评价和质量控制提供参考依据。方法以Waters Acquity UPLC Hss T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm)柱为色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为254、276 nm,UPLC同时检测芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、没食子酸14种成分及盐酸小檗碱的含量,对抽样于7个厂家的52批次三黄片进行含量测定;利用SIMCA 14.1和SPSS 25.0软件对上述15种成分含量检测结果进行层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),挖掘影响三黄片质量的关键成分;运用TOPSIS对7个厂家三黄片质量的优劣排序,建立三黄片质量综合评价方法。结果三黄片中UPLC定量分析方法学考察均符合《中国药典》2020年版规定要求,精密度、稳定性、重复性及准确度的RSD值均小于3.0%。HCA和PCA结果均显示52批次三黄片聚为3类;PCA共提取到4个主成分,累积方差贡献率为91.309%;OPLS-DA筛选出变量重要性投影(variable importance in projection,VIP)值>1.0的6个差异性标志物大黄素甲醚、没食子酸、盐酸小檗碱、大黄酚、黄芩苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷,可能是影响三黄片质量的主要成分;TOPSIS欧氏贴近度在0.1849~0.5566,表明不同厂家间三黄片质量差异较大,其中厂家A、B的排名靠前。结论建立的多成分定量检测方法操作便捷,能准确可靠的测定三黄片中15种化学成分含量;HCA、PCA和OPLS-DA可有效筛选出影响三黄片质量的差异性标志物,联合TOPSIS法可用于综合评价三黄片质量。

僵蚕中非法添加硼砂检测

目的:建立僵蚕中非法添加物硼砂的定性、定量检测方法,对市售僵蚕药材中非法添加硼砂情况进行筛查,以保障临床用药安全。方法:硼砂在酸性条件下转化为硼酸,与姜黄素结合生成有色的络合物,颜色深浅与硼酸含量成正比。采用改良姜黄试纸法对僵蚕中硼砂进行快速定性筛查,紫外-可见分光光度法准确测定硼砂含量。结果:改良的姜黄试纸灵敏度与《中华人民共和国药典》方法制备的姜黄试纸相当,且高于市售试纸;其制备以姜黄素代替姜黄粉末,操作更简便,并大幅缩短制备时间。硼砂在2.53259~12.66295μg/mL范围内,与吸光度呈良好线性关系(r=0.9997),平均加样回收率为101.20%,RSD为2.37%(n=9)。对31批市售僵蚕药材中硼砂进行定性、定量检测,结果7批检出硼砂,硼砂含量分布在0.03%~5.63%之间。结论:目前市场上僵蚕存在违法添加硼砂现象,需加强宣传及监管力度来遏制此类违法现象。

14种化学药物UPLC-Q-Orbitrap快速筛查方法的建立及其在感冒类中成药中的应用

使用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Orbitrap)建立14种化学药物快速筛查方法。样品以50%甲醇超声提取后可上机测定,结果表明14种化学药物在各自范围内线性关系良好(r≥0.995),平均回收率为90.8%~105.4%,RSD为0.52%~5.82%。该方法操作简单,灵敏度高,分析速度快,可为感冒类中成药中化学药物测定提供参考。

蓬莪术醋制前后改善斑马鱼急性肝损伤的作用机制研究

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad3信号通路探讨醋制前后蓬莪术改善硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导斑马鱼急性肝损伤的作用机制。方法以醋制前后的蓬莪术为研究对象,建立TAA诱导斑马鱼急性肝损伤模型,将醋制前后蓬莪术水煎液分别设置高、中、低剂量(8、4、2 mg/mL)组,以异甘草酸镁为阳性对照药物组,斑马鱼培养水为对照组,给药72 h后观察斑马鱼幼鱼肝脏形态,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;采用试剂盒检测斑马鱼幼鱼中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;利用qRT-PCR检测斑马鱼幼鱼Nrf2、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、Smad3和Smad7基因表达;Western blotting测定斑马鱼幼鱼Nrf2/HO-1和TGF-β/Smad3信号通路相关蛋白表达。结果醋制前后蓬莪术对TAA导致的肝组织细胞形态损伤具有保护作用。生化结果表明,与模型组比较,醋制前后蓬莪术水煎液组ALT、AST活性及GSH水平均显著升高(P<0.05、0.01、0.001),MDA水平均显著降低(P<0.001)。qRT-PCR结果表明,与模型组比较,醋制前后蓬莪术水煎液组Nrf2、IL-10、Smad7 m RNA表达水平显著升高(P<0.05、0.01、0.001),醋蓬莪术水煎液高剂量组Smad3 m RNA表达水平显著降低(P<0.001);其中,与等剂量蓬莪术组相比,醋蓬莪术高剂量组显著抑制Nrf2、Smad3的m RNA表达(P<0.05、0.001),且醋蓬莪术具有促进IL-10和Smad7 m RNA表达的趋势,但没有显著性差异。Western blotting结果表明,与模型组比较,蓬莪术水煎液高、中剂量组和醋蓬莪术水煎液各剂量组Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.001),蓬莪术高剂量组和醋蓬莪术各剂量组Smad3蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01、0.001),蓬莪术水煎液高剂量组和醋蓬莪术水煎液高、中剂量组TGF-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01、0.001);其中,与等剂量蓬莪术组相比,醋蓬莪术各剂量组Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.001),且醋蓬莪术具有抑制Smad3和TGF-β蛋白表达的趋势,但没有显著性差异。结论醋制前后的蓬莪术可以不同程度地改善TAA诱发的急性肝损伤,其作用机制可能与调控Nrf2/HO-1和TGF-β/Smad3信号通路有关。

川产陈皮(“大红袍”)的数字化及其应用

目的:以川产陈皮为例,探讨中药材数字化思路。方法:以实地调研、文献查阅与试验研究相结合,利用数字化工具记录和分析。结果:建立了川产陈皮的数字化示范模式,包含本草文献、法定标准、化学成分、药理作用、基原及药材鉴定、种植及采收加工、品质及商品规格等内容。结论:本数字化研究内容示范性及实用性强,可用于指导栽培、产地加工、企业生产、检验及科研等,可推广应用。

基于网络药理学和实验验证探究青龙白虎汤改善急性咽炎的作用机制

目的基于网络药理学和实验验证探究青龙白虎汤改善急性咽炎的作用机制。方法通过网络药理学预测青龙白虎汤改善急性咽炎的生物调控过程和信号通路,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络和“成分-通路”网络。建立氨水诱导的急性咽炎大鼠模型,给予青龙白虎汤干预后,测定大鼠体质量、咽喉组织指数和肺指数;采用苏木素-伊红(HE)染色观察咽喉组织病理变化;采用试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平以及血清和咽喉组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;采用Western blotting检测咽喉组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)信号通路相关蛋白表达。结果共获得青龙白虎汤中26个活性成分,86个活性成分与疾病的交集靶点,其中核心靶点34个。网络药理学分析结果显示,青龙白虎汤可以调节TNF-α、IL-1β、IL-6等核心靶点,调节抗氧化等生物过程,调控NF-κB信号通路,从而治疗急性咽炎。体内实验结果显示,青龙白虎汤能够改善急性咽炎大鼠咽部组织损伤,显著抑制血清中炎症因子水平(P<0.05、0.01、0.001),调控血清和咽喉组织中的氧化应激水平(P<0.05、0.01、0.001),显著下调TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001),显著上调Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白表达(P<0.05、0.001)。结论青龙白虎汤能够通过抑制TLR4/NF-κB信号通路并激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制炎症反应,调控氧化应激,从而改善急性咽炎。

UPLC法同时测定风热感冒颗粒中13种成分

目的建立UPLC法同时测定风热感冒颗粒(板蓝根、连翘、菊花等)中(R,S)-告依春、连翘酯苷A、连翘酯苷I、连翘苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、苦杏仁苷、牛蒡苷、牛蒡苷元的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Waters Acquity UPLC Hss T3色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相乙腈-0.01%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;检测波长207、227、240、327 nm。结果13种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9995),平均加样回收率95.42%~103.52%,RSD 1.41%~2.89%。结论该方法灵敏简便,重复性好,可用于风热感冒颗粒的质量控制。