人脐带间充质干细胞对大鼠重症急性胰腺炎的保护作用

目的研究人脐带间充质干细胞(ucMSCs)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的保护作用。方法 135只雄性SD大鼠随机分成对照组(Sham组),SAP组和SAP+ucMSCs组,每组45只。采用5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)逆行胰管注射的方法制作大鼠SAP模型,SAP+ucMSCs组通过尾静脉注射CM-Di I标记的ucMSCs(1×10~7个/kg)。各组于术后12、24、72h处死取材,统计大鼠死亡率,HE染色观察各组胰腺组织病理学改变并评分,荧光显微镜观察ucMSCs定植情况,ELISA法测定大鼠血清淀粉酶和脂肪酶、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素4(IL-4)和白介素10(IL-10)的表达情况。结果 ucMSCs可定植在胰腺组织的损伤区域,可降低72h SAP大鼠的死亡率(SAP组为66.7%,SAP+ucMSCs组为20.0%)。ucMSCs移植后大鼠各时间点血清淀粉酶和脂肪酶水平明显降低(P<0.01),胰腺组织病理学评分、炎性因子TNF-α、IL-1β水平明显降低,抗炎因子IL-4、IL-10水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论人脐带间充质干细胞移植治疗可减轻重症急性胰腺炎的胰腺组织损伤和炎症程度。

不同来源血液NK细胞大体系培养质量统计分析

目的分离外周血、脐血中的单个核细胞,经过体外大体系培养扩增其中的NK细胞,对比两种来源的NK细胞在扩增倍数、数量、比例上的差异。方法收集外周血和脐血,通过同样的培养方法扩增NK细胞,检测起始细胞数、细胞总数、增殖倍数并通过流式方法检测其中CD3^-CD56^+细胞的比例。结果同样体积的外周血中分离的单核细胞(起始细胞)数量比脐血中的单核细胞数量多,差异有统计学意义(P<0.05)。经过同样大体系方法培养后,脐血来源扩增的细胞总数多于外周血来源扩增的细胞总数(P<0.01);脐血来源NK细胞扩增倍数、CD3^-CD56^+细胞比例高于外周血来源,但两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论同样的大体系细胞培养方案既可以扩增培养外周血来源NK细胞,也可以扩增培养脐血来源的NK细胞;培养后的NK细胞总数有差异,造成差异的主要原因是起始细胞数量的不同。

细胞因子预处理对体外扩增NK细胞活性的影响

目的采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血单个核细胞(PBMCs)进行自然杀伤细胞(NK)的扩增培养,培养过程中白细胞介素IL-2、IL-12、IL-15、IL-18以不同组合及不同方式添加,探究体外培养NK细胞的细胞因子最佳组合和添加方式。方法根据细胞因子组合及添加方式的不同,将NK培养分为3组。A组:IL-2+IL-15组,B组:IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组,C组:IL-12+IL-15+IL-18预处理/IL-2组。培养过程中第7天和第14天分别取样统计各组细胞因子培养后的细胞数量,并使用流式细胞仪检测NK细胞表面分子表达;将NK细胞与K562细胞共培养,然后ELISA测定NK细胞的IFNγ释放量,CSFE/7-AAD法检测NK细胞的杀伤活性。结果 3组不同的培养方式所得细胞的扩增倍数差异无统计学意义,随着培养时间的增加,NK细胞的比例也逐渐上升,3组间NK细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。NK细胞表面CD25(IL-2Rα)的表达情况比较,差异有统计学意义(P <0.05),C组的阳性率高于A和B组。IFN-γ的释放量和NK细胞的体外杀伤活性一致,均为C组高于A和B组。对肿瘤患者的NK细胞,C组的细胞因子添加方式也能很好的进行扩增(CD3-CD56+细胞比例大于50%)。结论 C组中的细胞因子预处理方式能够高效扩增NK细胞,与A或B组联合添加的方式比较,该方式能显著激活NK细胞的杀伤活性。