微小RNA-595在人晶状体上皮细胞凋亡中的调控作用

目的探讨微小RNA-595(miR-595)在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与机制。方法收集年龄相关性白内障病人晶状体前囊膜组织(白内障组)及正常供体眼球晶状体前囊膜组织(健康组)标本,以H_(2)O_(2)诱导构建人晶状体上皮细胞SRA01/04凋亡模型(H_(2)O_(2)组),并以正常培养的SRA01/04细胞作为对照(对照组),采用实时荧光定量PCR检测miR-595的表达改变。将体外培养的SRA01/04细胞分为mimics-NC组、miR-595 mimics组、inhibitorNC组和miR-595 inhibitor组,将miR-595 mimics/inhibitor及其阴性对照mimics/inhibitor-NC转染至SRA01/04细胞后,采用实时荧光定量PCR检测检测各组细胞中miR-595的表达情况;转染48 h后暴露于200µmol/L H_(2)O_(2)1 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-595和Bcl2的靶向关系。结果与健康组相比,白内障组中miR-595表达水平明显升高[(5.52±1.64)比(1.00±0.00),P<0.05];同时,H2O_(2)组细胞中miR-595表达水平明显高于对照组[(3.86±1.12)比(1.00±0.00),P<0.05]。与mimics-NC组比较,miR-595 mimics组细胞中miR-595表达水平[(4.16±0.78)比(1.00±0.00)]、细胞凋亡率[(17.52±3.05)%比(8.86±1.21)%]明显升高,而Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);但miR-595 inhibitor组细胞中miR-595表达水平、细胞凋亡率明显低于inhibitor-NC组,而Bcl-2蛋白的表达水平明显高于inhibitor-NC组(P<0.05)。Bcl-2是miR-595的靶基因。结论miR-595在年龄相关性白内障晶状体组织中高表达,并靶向调控Bcl-2表达促进人晶状体上皮细胞凋亡。