乙型脑炎减毒活疫苗不同生产工艺硫酸庆大霉素残留量对比

目的对比乙型脑炎减毒活疫苗(乙脑活疫苗)在不同生产工艺下,产品硫酸庆大霉素残留量。方法采集不同生产工艺下乙脑活疫苗各阶段样品,检测硫酸庆大霉素残留量,并对结果进行统计分析对比。结果转瓶生产工艺中,病毒液硫酸庆大霉素残留量均在企业内控标准200ng/mL以下,成品硫酸庆大霉素残留量均低于法规要求50ng/剂;细胞工厂生产工艺中,病毒液硫酸庆大霉素残留量均在企业内控标准200ng/mL以下。结论在降低产品硫酸庆大霉素残留方面,细胞工厂生产工艺优于转瓶生产工艺。

乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液在2～8℃条件下储存的稳定性研究

目的 考察在现行工艺规定的2～8 ℃储存条件下，乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑活疫苗）单一病毒收获液病毒滴度的稳定性。方法 取常规生产中收获的高、中、低滴度的单一病毒收获液各6批，按正常生产程序和工艺条件储存于2～8 ℃，自第5天起每隔1 d无菌取样，进行病毒滴定，采用极差控制图、线性回归、单因素方差分析等方法对收获液的病毒滴度结果进行统计分析。结果 常规生产中高、中、低滴度段的单一病毒收获液在2～8 ℃储存21 d，各单一病毒收获液的病毒滴度均呈下降趋势，并且不同滴度段病毒收获液间的日均下降滴度差异无统计学意义（F=1.67，P=0.222），总体日均下降滴度为0.036 lg蚀斑形成单位/ml。结论 掌握了单一病毒收获液在工艺规定储存条件下的滴度下降趋势及日均下降水平，为乙脑活疫苗半成品的点配制及其病毒滴度的一致性控制提供了数据支持。

重组人巨细胞病毒疫苗研究进展

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）能感染全球大多数人群,并持续存在于被感染宿主细胞中.虽然HCMV感染健康成年人后很少表现出严重急性临床症状,但该病毒是先天性疾病和移植手术并发症的常见感染原因.因此,迫切需要开发疫苗预防这些人群的HCMV感染.此文阐述近年来HCMV候选疫苗抗原的研究进展,讨论最近四种已公布临床试验数据的HCMV候选疫苗的临床可行性,并探讨下一代候选疫苗的改进余地.

乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液冻融条件研究

目的摸索乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。方法将单次病毒收获液于不同温度中冻存不同时间后,在不同条件下融解,用噬斑法检测收获液病毒滴度,通过单因素方差分析确定最适冻融方法。调整冻存袋内冻存病毒液的体积,确定冻存量对冻融效果的影响。结果在-70℃冻存(F=0.735)、27℃水浴中解冻(F=0.327)为最适条件,冻融前后单次病毒收获液滴度的差异无统计学意义(P值均>0.05),可冻存14 L病毒液6个月。结论确定了乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。

乙型脑炎减毒活疫苗生物学关键质量指标警戒限和行动限的建立与应用

目的：建立适用于乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）生物学关键质量指标（critical quality attribution ，CQA）的警戒限和行动限范围，开展趋势分析以及时发现异常趋势，指导疫苗生产。方法根据CQA的数据分布及特点，采用休哈特控制图法及阈值法建立限度范围，比较两种方法的结果，并采用适宜的限度范围对近3年的数据进行统计分析。结果乙脑疫苗的病毒滴度等生物学CQA数据为非正态分布，采用休哈特控制图建立的行动限范围有超出法规限的情况；而采用阈值法建立的行动限范围则均在法规限以内。采用阈值法建立的限度分析近3年乙脑疫苗各生产阶段生物学指标的状态，各指标超出行动限的点数均小于总点数的1％，表明乙脑疫苗各生产阶段处于稳定状态。结论阈值法为建立限度范围的适用方法；趋势分析中应结合数据本身特性与分布，选用适合的方法来建立限度标准，才能更为科学地将趋势分析工具用于指导实际生产。

乙型脑炎减毒活疫苗外源病毒因子检查法阳性对照的选择

目的 选择合适的阳性对照供乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗外源病毒因子检查法（细胞培养法）使用.方法 细胞病变试验中,将乙脑病毒稀释成不同浓度,分别接种3种细胞,培养2～3 d,观察培养期末细胞病变.病变较典型时对应的病毒浓度即为本试验细胞病变阳性对照浓度.血吸附试验中,将植物血凝素经0.5％鸡、豚鼠红细胞悬液稀释成不同浓度,分别加入3种细胞中,置2～8℃或20～25℃0.5h,观察血吸附情况.血吸附较典型的植物血凝素浓度即为本试验血吸附阳性对照浓度.结果 乙脑病毒浓度为3～4 lg噬斑形成单位/ml时可引起20％～50％细胞病变,植物血凝素浓度为30～40 mg/L时可导致20％～50％细胞血吸附.结论 适当浓度的乙脑病毒和植物血凝素可作为外源病毒因子检查法的试验阳性对照.

过氧化氢干雾灭菌器用于GMP车间的空间消毒效果研究

目的观察过氧化氢空间喷雾消毒技术用于GMP车间的空间消毒效果,为评估该方法在车间日常清洁消毒中的实际运用提供依据。方法选择GMP车间中空间体积和空间布局均有较大差异的3个洁净区域D、E和F,同时采用化学指示卡和生物指示剂判定法,分别观察过氧化氢干雾灭菌器采用不同消毒剂剂量在各个区域的空间消毒效果。结果D区为直线型人物流通道,仅一侧分布功能性房间,最佳消毒剂剂量为6 ml/m^(3);E区为含少量拐弯的直线型人物流通道,两侧均分布功能性房间,最佳消毒剂剂量为8 ml/m^(3);F区为L型人物流通道,两侧均分布功能性房间,最佳消毒剂剂量为10 ml/m^(3)。结论过氧化氢干雾灭菌器的空间消毒效果能够达到中国药典2020年版四部规定的灭菌标准。其实际消毒效果与车间空间布局复杂程度呈负相关,与消毒剂的剂量呈正相关,即布局复杂的车间,通过适当增加消毒剂用量可提高空间消毒效果。

过滤工艺对乙型脑炎减毒活疫苗产品质量的影响

目的研究澄清过滤和除菌过滤工艺对乙型脑炎减毒活疫苗半成品和成品质量的影响。方法制备12批乙型脑炎减毒活疫苗半成品,6批不经过任何过滤操作,另外6批经澄清过滤、除菌过滤制备。观察过滤前、后半成品的澄清度,并取样检测过滤前、后半成品的病毒滴度。分别用过滤和非过滤的半成品各制备6批疫苗成品,并进行基础滴度、37 ℃热稳定性、牛血清白蛋白残留、抗生素残留、pH值、渗透压、无菌检查,并对结果进行比较。结果半成品过滤前浑浊,过滤后澄清透明。过滤和非过滤产品的质量均符合企业注册标准的要求。过滤前、后半成品病毒滴度均在6.8~7.4 lgPFU/ml范围内。过滤和非过滤工艺成品的基础滴度均在5.7~7.1 lgPFU/ml范围内,37 ℃热稳定性滴度均不低于5.7 lgPFU/ml。过滤与非过滤成品比较,基础滴度、37 ℃热稳定性、牛血清白蛋白残留、抗生素残留、pH值、渗透压间差异均无统计学意义。结论增加过滤工艺可以显著提高制品的纯度,且对制品质量没有产生不良影响。

细胞工厂在乙型脑炎减毒活疫苗生产中的应用

目的采用40层细胞工厂(CF40)替代15 L转瓶工艺制备乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗。方法分别采用CF40和15 L转瓶工艺制备乙脑减毒活疫苗.通过显微镜观察和细胞计数来考察细胞质量。病毒收获时观察细胞病变情况,并对2种工艺制备的原液、半成品以及成品进行病毒滴度检测对比,成品37℃放置7d考察成品热稳定性。结果两种工艺相比,CF40细胞密度高于15L转瓶,差异有统计学意义(F=10.60,P<0.05),生长一致性和单只地鼠制备的细胞数量也均优于15L转瓶;CF40和15 L转瓶制备的单一病毒收获液平均滴度分别为7.59和7.56 lg噬斑形成单位/ml,差异无统计学意义(F=0.63,P>0.05),但CF40单一病毒收获液收率一致性更好;两种工艺制备的原液、半成品、成品滴度以及7 d后37℃热稳定性均符合企业注册标准规定。结论使用CF40制备乙脑减毒活疫苗是可行的,并且在产品收率和一致性方面优于15 L转瓶工艺。

乙型脑炎减毒活疫苗生产工艺液体质量验证

目的 对乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗生产过程中使用的工艺液体进行系统验证,确保其配制过程和储存过程的一致性.方法 根据工艺液体在生产中是否接触或进入产品,确定验证主要针对8种关键工艺液体.针对制备和储存过程中影响液体质量的变量建立工艺参数,并根据液体在生产中的用途建立能反映工艺液体质量的标准.通过系统性实验收集数据来证明液体制备和储存过程工艺参数的可行性.结果 在对8种关键工艺液体每种各3次的混合均一性验证中,每次9个样品的相对标准差均＜5％,并且8种液体每种各3批在经过最长可能储存时间后,样品检定结果均符合可接受标准.结论 验证证明了采用乙脑活疫苗关键工艺液体的制备程序能配制出均一并符合工艺要求的液体,且每种工艺液体均能在规定的储存条件下在最长储存时间内维持质量稳定,从而为质量、安全性和有效性都符合中国药典及WHO标准的乙脑活疫苗生产提供了保障.

抗CD22单克隆抗体治疗自身免疫病进展

CD22是特异性表达于B淋巴细胞上的Ⅰ型跨膜糖蛋白,为免疫球蛋白超家族中唾液酸黏附素家族成员,其作为抑制性辅助受体在B细胞的调节与体液免疫中发挥重要作用。自身免疫病是由自身免疫失调所致,B细胞异常激活以及致病性自身抗体的生成是自身免疫病的重要特征之一。通过抗CD22单克隆抗体治疗B细胞异常增殖活化介导为主的自身免疫病,如系统性红斑狼疮和类风湿关节炎等已引起关注。此文就CD22的分子特征、功能以及靶向CD22治疗自身免疫相关性疾病的研究进展进行综述。

细胞工厂培养原代地鼠肾细胞工艺的建立及优化

目的采用40层细胞工厂(40-layer cell factory,CF40)工艺培养原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞,优化乙脑减毒活疫苗的生产工艺。方法用不同浓度新生牛血清培养不同接种密度PHK细胞,比较各组PHK细胞数量,确定CF40工艺的PHK细胞接种密度和新生牛血清浓度。通过对比CF40和15 L转瓶采用不同新生牛血清的PHK细胞培养情况,比较两种工艺对新生牛血清的选择性。对4个厂家CF40培养的PHK细胞数量进行单因素方差分析,判定对CF40的选择性。结果CF40工艺的最优条件为PHK细胞接种密度6.1×10^(5)ml^(-1)、新生牛血清浓度6%。CF40工艺对新生牛血清的选择性较低,能比转瓶工艺更稳定地培养更多的PHK细胞。4个厂家CF40培养的PHK细胞数量之间的差异无统计学意义(F=0.23,P>0.05),对CF40选择性低。结论采用CF40可以制备出满足乙脑减毒活疫苗生产要求的PHK细胞。