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病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响 被引量:6
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作者 陈智 孙艳 +4 位作者 牟建超 刘莉娜 刘宇 刘辉 刘杰 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期30-33,共4页
目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒... 目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化;培养3-5d后,第一次收获病毒液;更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高(〉5.0 lgLD50/mL),且灭活后病毒液的效价较高(〉4.0IU/mL)。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。 展开更多
关键词 狂犬病毒(PM株) 2BS细胞 感染复数 病毒滴度 效价
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应用中国仓鼠卵巢细胞法检测百日咳毒素毒性方法的建立及初步验证 被引量:3
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作者 潘海龙 刘杰 +4 位作者 罗世东 吴杰 刘少祥 秦敏 李炯 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第6期284-287,共4页
目的 建立用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)毒性的方法,并对其适用性进行初步验证.方法 根据PT能特异地使CHO细胞簇集的特性,以国家PT标准品为参考品,取多批脱毒后PT进行检测,摸... 目的 建立用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)毒性的方法,并对其适用性进行初步验证.方法 根据PT能特异地使CHO细胞簇集的特性,以国家PT标准品为参考品,取多批脱毒后PT进行检测,摸索适宜的孵育时间、细胞悬液浓度等实验条件,建立PT毒性的体外检测方法.对PT参考品进行倍比系列稀释,确定本法的检测限.对5批脱毒后PT进行重复检测,验证本法的重复性.结果 利用不同浓度CHO细胞对脱毒PT进行测定,确定最佳细胞浓度为5×104/ml,并通过最佳浓度细胞确定簇集结果的最佳判定时间为PT接种后48 h.本法对PT标准品的检测限定为125.0~ 500.0 pg/ml.用本法重复测定5批脱毒PT的残余毒性,变异系数为0.0%~34.6%,说明该法重复性良好.结论 建立的CHO细胞检测法快捷、简便,能灵敏、准确地检测脱毒PT的残余毒性,可用于相关疫苗产品的质量控制. 展开更多
关键词 百日咳毒素 百日咳菌苗 中国仓鼠卵巢细胞 验证
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乙型脑炎病毒E315回复突变对小鼠神经毒力的影响
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作者 范凤鸣 付茵 +7 位作者 刘莉娜 杨欢 谢安平 石晓玲 刘杰 曾献武 李玉华 杨会强 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第4期184-188,共5页
目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获... 目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获得回复突变株M315.通过比较SA14-14-2与突变株的噬斑大小和一步生长曲线,分析M315的增殖特征.采用小鼠模型测定该突变株的脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力和乳鼠传代返祖能力,分析疫苗株E315位点回复突变后毒力的变化.结果成功构建了回复突变株M315,其噬斑大小和增殖特征与疫苗株相似.M315对17~19日龄小鼠无皮下或腹腔感染入脑神经毒力,鼠脑病毒有很低但可检测的脑内神经毒力〔小于3.0 lg噬斑形成单位(plaque forming unit,PFU)/0.03 ml〕,皮下注射不致病.3~5日龄乳鼠脑内接种后发病,但脑内病毒毒力低于3.0 lgPFU/0.03 ml.结论在分子水平证明了E315位点是影响乙型脑炎疫苗安全性的关键位点之一,但影响较小.E315位点的回复突变虽使SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力和乳鼠传代返祖能力增强,但没有超出中国药典规定的毒力范围. 展开更多
关键词 脑炎病毒 日本 疫苗 减毒 回复突变 神经毒力 神经侵袭力
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