动态浊度法检测23价肺炎链球菌多糖疫苗细菌内毒素的方法确认和应用

目的 对动态浊度法检测23价肺炎链球菌多糖疫苗（23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23）细菌内毒素进行方法学确认并加以应用.方法 按照《中华人民共和国药典》2010版三部中的动态浊度法操作,配制系列稀释的细菌内毒素标准品,验证动态浊度法的线性、准确度、重复性和中间精密度.根据2012年和2013年连续20批PPV23成品的细菌内毒素检测结果,分析PPV23对动态浊度法的影响.结果 动态浊度法的标准曲线具有可靠性,细菌内毒素标准品的回收率为90％～129％,变异系数为6.2％～12.4％,均符合规定的标准,且操作人员（F=4.80,P=0.06）和时间（F=1.01,P=0.34）变化对检测结果没有影响.2012年和2013年各连续20批PPV23成品的细菌内毒素检测结果保持稳定,细菌内毒素均值分别为0.165和0.355 EU/ml,PPV23对动态浊度法没有影响（F=0.00,P=0.97）.结论 动态浊度法有效可行,可用于PPV23细菌内毒素检测.

植物蛋白胨在肺炎链球菌培养基中的应用

目的 用植物蛋白胨替代目前肺炎链球菌（pneumococcus,Pn）培养基中的动物蛋白胨,以保证生物制品的安全性.方法 比较大豆蛋白胨与胰蛋白胨的各种成分含量.分别以大豆蛋白胨和胰蛋白胨制备培养基进行9个型Pn大罐培养,比较两种培养基培养对Pn生长和粗制多糖含量的影响.结果 大豆蛋白胨的总氮含量、氨氮含量和消化系数与胰蛋白胨相近,但大豆蛋白胨的总碳水化合物含量（336.20 μg/g）明显高于胰蛋白胨的总碳水化合物含量（10.56 μg/g）.植物源性培养基培养获得的各型Pn浓度（t=3.851,P＜0.05）和粗制多糖含量（t=3.853,P＜0.05）明显高于动物源性培养基培养.结论 植物蛋白胨可替代动物蛋白胨来制备Pn培养基.

竞争ELISA法测定19A型肺炎链球菌发酵物中的多糖含量

目的建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法，检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法以19A型肺炎链球菌多糖为包被物，待测多糖为竞争物，建立间接竞争ELISA方法并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。结果最佳多糖包被质量浓度为10mg／L，多糖抗血清稀释度为1：4×10^4。当检测范围为39．06～5000．00μg／L时，决定系数为0．995。批内和批间相对标准差分别为5．08％～9．58％和5．28％～12．93％。培养物样品加标回收率为95．84％～110．07％。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312．17mg／L和1056．42mg／L。结论新建的方法能用予19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测，对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。

人肺炎链球菌参考血清BW09的制备及其24个血清型IgG抗体浓度的赋值

目的制备成都生物制品研究所有限责任公司人肺炎链球菌参考血清,并对24个血清型的抗荚膜多糖抗体IgG浓度进行赋值。方法用23价肺炎链球菌多糖疫苗免疫50名健康成人,采集免疫后血浆,制备人肺炎链球菌参考血清BW09。采用世界卫生组织推荐的人血清肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG定量酶联免疫吸附测定方法,以兰州生物制品研究所有限责任公司的09CS为参考血清,对24个血清型别(1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F)抗体的IgG浓度进行赋值;以赋值后的BW09为参考血清,检测09CS,比较09CS新值与原赋值之间的差异;分别以BW09和09CS为参考血清,检测质控血清QC02、QC03和8个血清样品,比较两种参考品测定抗体浓度的差异,对新制参考血清赋值的准确性进一步验证。结果制备了人肺炎链球菌参考血清BW09;确定了BW09中24个血清型IgG抗体浓度。以BW09为参考血清检测09CS的新值与原赋值比较,各血清型的误差百分率绝对值均在10%以内。分别以BW09和09CS为参考血清检测质控血清QC02、QC03和8个血清样品的24个血清型IgG抗体,测得的检测值间呈线性相关。结论成功制备了人肺炎链球菌参考血清BW09,并对其中的24个血清型抗体IgG浓度进行了准确赋值。

菌种筛选对1型肺炎链球菌产糖量的影响

目的用无动物源性培养基筛选高产糖1型肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae semtype1，PN1）。方法配制无动物源性培养基，并用此培养基进行高产糖PN1单菌落筛选。比较筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量。结果无动物源性培养基筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量分别为420和960mg／L，筛选后PN1的产糖量明显高于筛选前PN1。结论以无动物源性培养基筛选PNI可使PN1的产糖量明显提高。