荣保灵芝1号多糖的分离纯化与化学结构初步研究

目的:分离纯化荣保灵芝1号经2种不同培养方式所得子实体、发酵液、菌丝体多糖,并对其结构进行初步表征。方法:采用碱提醇沉工艺,经除蛋白、除色素得到子实体多糖、胞外多糖、胞内多糖;再经DEAE纤维素DE-52柱、Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对3种多糖进行分级精制,得到GLP-1-2、ExP-1-2、InP-1-2;采用高效凝胶过滤色谱测定3种精制多糖的相对分子质量;以三氟乙酸(TFA)水解GLP-1-2、ExP-1-2、InP-1-2,PMP柱前衍生HPLC分析3种精制多糖的单糖组成,进一步通过红外、核磁共振技术对3种精制多糖结构进行表征。结果:GLP-1-2、ExP-1-2、InP-1-2相对分子质量分别为26401、5043 u和5325 u。GLP-1-2由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,摩尔比为0.4027:1:0.3878:0.3843:0.3559;Ex P-1-2由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,摩尔比为0.0174:0.0237:1:0.0386:0.0385:0.0272;InP-1-2由含甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,摩尔比为0.0117:1:0.0735:0.3237:0.1779,3种精制多糖的红外、核磁共振图谱显示多糖的特征峰。结论:GLP-1-2、ExP-1-2、InP-1-2均为低分子量的多糖,可以通过液体深层发酵技术获取荣保灵芝1号多糖。

不同菌种灵芝药材中三萜类成分的对比研究

目的 研究不同菌种灵芝药材中三萜类成分的差异,比较三萜化学成分基于菌种的区别。方法 选定5个西南地区大面积培育的灵芝菌种,在相同条件下培育成灵芝药材;建立灵芝三萜类化学成分的HPLC指纹图谱,运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件评价不同菌种灵芝中的三萜成分,结合SPSS软件对共有峰的峰面积进行主成分分析,并采用紫外分光光度法测定不同菌种灵芝子实体中总三萜的含量,综合评价灵芝药材的质量。结果 不同菌种灵芝栽培过程中菌盖发育良好,生长稳定,灵芝总三萜含量为0.99%-2.35%,其中,荣保灵芝1号菌种中灵芝总三萜的含量最高;建立了灵芝三萜类化学成分的HPLC指纹图谱,标定了22个共有色谱峰,采用对照品指认了10个主要色谱峰,不同菌种灵芝间的图谱差异明显,相似度较低,以荣保灵芝为对照品的相似度为0.742-0.779;不同菌种灵芝共有峰的峰面积主成分分析,提取了3个主成分,累计贡献率98.05%,荣保灵芝1号菌种灵芝的综合得分最高。结论 菌种的差异性直接影响灵芝中三萜类成分的种类及含量,菌种的优选对保证灵芝的品质至关重要。

灵芝醇提取物的抗肿瘤活性研究

目的 探究灵芝醇提取物在体内外的抗肿瘤活性。方法 用灵芝醇提取物处理6种人肿瘤细胞系（表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620）,观察细胞的生长形态、绘制生长曲线、进行MTT实验及平板集落形成实验。分别ig给予胃癌BGC823裸鼠50、100、150 mg·kg^（-1）灵芝乙醇提取物,计算瘤体积、抑瘤率及脏器系数。结果 体外实验中,灵芝提取物对表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620细胞的半数抑制浓度分别85.86、193.43、51.32、168.72、82.61、212.98μg·m L^（-1）。体内实验中,灵芝提取物50、100、150 mg·kg^（-1）的抑瘤率分别为32.6%、43.5%、47.2%。结论 灵芝提取物抑制表皮癌A431、直肠癌Caco2、肺癌NCI-H460细胞的增殖作用较强,且浓度大于40μg·mL^（-1）时,抑制增殖的作用较明显,体外还能抑制胃癌BGC823的生长。

灵芝乙醇提取物抗肿瘤活性研究

目的:探究灵芝乙醇提取物体内外抗肿瘤的活性。方法:体外实验:采用6种人肿瘤细胞系(胰腺癌SW1990、肺癌A549、宫颈癌Hela、肝癌Hep G2、胃癌MKN45、乳腺癌MCF-7),用灵芝乙醇提取物处理肿瘤细胞,观察细胞生长形态、绘制生长曲线、进行MTT实验及平板集落形成实验。体内实验:采用裸鼠胰腺癌SW1990移植瘤模型,以灵芝乙醇提取物50、100、150mg/kg剂量灌胃,计算瘤体积、抑瘤率及脏器系数。结果:体外实验:灵芝乙醇提取物对胰腺癌SW1990、肺癌A549、宫颈癌Hela、肝癌Hep G2、胃癌MKN45、乳腺癌MCF-7细胞的半数抑制率分别为96.62、44.21、78.66、117.60、44.34、73.28μg/ml。体内实验:70%灵芝提取物50、100、150mg/kg剂量组抑瘤率分别为37.2%、39.2%、43.9%。结论:体外实验表明灵芝乙醇提取物对上述6种肿瘤细胞均具有抑制增殖的作用,且浓度在40μg/ml以上时抑制增殖的作用较强。体内实验表明灵芝乙醇提取物能抑制胰腺癌SW1990生长。

灵芝乙醇提取物对肺癌细胞增殖抑制的作用及分子机制

目的探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制的作用及分子机制。方法建立A549肺癌荷瘤鼠模型,每日ig给予荷瘤鼠50、100、150 mg·kg^(-1)的GLEE,计算抑瘤率、肿瘤体积及脏器系数;用Western blot法分析GLEE对A549细胞中相关蛋白表达的影响;用RNA-seq分析GLEE对A549细胞中基因表达的影响。结果实验的第16~20天,50、100、150 mg·kg^(-1) GLEE显著抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为24.52%、40.69%、51.35%;在蛋白水平,GLEE通过下调Bcl-2,上调Bax和激活Caspase-3诱导细胞凋亡;火山图显示:A549细胞中4572个基因上调,4464个基因下调。结论GLEE对非小细胞肺癌A549细胞增殖具有显著抑制作用,其诱导细胞的凋亡可能是通过线粒体途径。