单极纺锤体1结合蛋白2基因敲除对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响

目的运用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/Cas9基因编辑技术构建敲除人单极纺锤体1结合蛋白2 (hMOB2)的肝癌SMMC-7721细胞,观察hMOB2基因敲除对其迁移的影响.方法首先将靶向hMOB2基因的导向RNA (sgRNA)的CRISPR序列克隆到慢病毒载体lentiCRISPRv2中,并将制备的慢病毒颗粒感染肝癌SMMC-7721细胞,然后使用嘌呤霉素筛选并挑取单克隆进行培养,用蛋白质印迹法(Western blot)方法检测hMOB2基因敲除效果,利用Transwell、细胞划痕迁移实验检测敲除hMOB2基因对SMMC-7721细胞迁移的影响,运用GraphPad Prism 8.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果成功构建了靶向hMOB2基因的慢病毒介导的CRISPR-Cas9编辑/敲除系统,筛选、建立了hMOB2基因稳定敲除的SMMC-7721细胞株,Transwell迁移实验显示,与对照组比较,敲除组中挑选的单克隆sgR-1细胞的迁移数为(224.3±6.3)个,sgR-2细胞的迁移数为(166.3±6.5)个,明显高于对照组[(114.3±10.5)个,t=16.680、9.714,P<0.01],细胞划痕实验结果显示,与对照组比较,sgR-1相对愈合面积为1.61±0.03(t =24.610,P<0.01),sgR-2为1.26 ±0.04(t=8.081,P<0.01).结论敲除hMOB2基因可促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移.

金雀异黄素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠血清骨保护素及核因子-κB受体活化因子配体的影响

目的：研究金雀异黄素（genistein，Gen）对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型（typeⅡ，CIA）大鼠血清骨保护素（OPG）及核因子-κB 受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法采用 SPSS 17.0软件随机抽样分为两组，编号1～10为空白对照组、11～60为造模组。造模组的50只大鼠建立CIA模型。造模成功的大鼠再按上述编号分为模型对照组、低剂量Gen组、中剂量Gen组、高剂量Gen组和甲氨蝶呤（MTX）组，于造模次日开始用药，各Gen组灌胃Gen混悬液1 ml/d；甲氨蝶呤组每周灌胃MTX 1 ml/次，浓度为0.1 mg/ml；空白组、模型对照组每天灌胃等量的生理盐水。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清RANKL及OPG的水平。结果骨代谢因子RANKL在模型对照组大鼠血清中表达量（0.328±0.044）的显著高于空白对照组（0.180±0.029）（P＜0.05）；Gen中、高剂量对RNAKL的抑制作用（分别为0.144±0.017、0.163±0.020）与甲氨蝶呤组（0.139±0.072）相当。模型对照组大鼠血清中的细胞因子OPG的表达水平（0.103±0.013）低于空白对照组（0.268±0.022）（P＜0.05）；Gen中、高剂量对OPG（分别为0.149±0.012、0.145±0.024）的上调作用与甲氨蝶呤组（0.160±0.056）相当。结论 Gen可影响 CIA 大鼠血清中 RANKL、OPG 水平，从而影响 OPG/RANKL 比值。提示 Gen 可能通过RANKL/OPG/RNAK通路抑制RA骨质破坏。