沙利度胺对类风湿关节炎模型大鼠炎症及血管新生相关因子的影响

目的探讨沙利度胺(thalidomide,Thd)对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)模型大鼠的治疗作用,并探讨其可能的作用机制。方法将雌性Sprague-Dawley大鼠30只随机分为空白组、模型组和Thd治疗组各10只。模型组和Thd治疗组采用Ⅱ型胶原制备CIA模型。造模次日开始,Thd治疗组灌胃给予Thd150mg.kg-1.d-1,空白组及模型组灌胃给予0.9%氯化钠溶液15mL.kg-1,均给药6周。治疗过程中对大鼠的关节炎症程度进行评分,治疗后对大鼠右后足进行放射学评分,免疫组化方法检测3组大鼠滑膜组织微血管密度(MVD),WesternBlot法检测大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-1,2,3,9活性。结果与空白组比较,模型组大鼠血清VEGF、MMP-1,2,3,9活性表达均明显升高。与模型组比较,Thd治疗组大鼠关节炎症指数、放射学和滑膜组织MVD均明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论Thd能改善CIA大鼠关节炎症症状和放射学改变,并可能通过降低大鼠血清VEGF、MMP-1,2,3,9表达而发挥抑制关节滑膜血管新生作用。

沙利度胺联合地塞米松对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用

为了探讨沙利度胺(thalidomide,THD)联合地塞米松(Dx)对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验(MTT法)观察不同浓度、不同作用时间的THD或THD+地塞米松(Dx)作用于KM3细胞后细胞的抑制率,以选取最佳药物干预条件。使用该条件处理KM3细胞,并采用间接ELISA法检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮抑素(ES)、凋亡抑制蛋白survivin的表达。结果表明:随着THD浓度的加大、作用时间的延长,KM3细胞生长的抑制也呈增强的趋势,同时THD与Dx联用可显著提高药物对KM3细胞的生长抑制作用。80μg/ml或100μg/mlTHD联合Dx(4μg/ml)可使KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin表达下降,ES表达增加,而对VEGF的表达无影响。结论:THD联合Dx对KM3细胞有协同抑制作用,THD联合Dx可能通过下调KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin的表达,上调ES的表达而发挥抗多发性骨髓瘤的作用。

rhTNFR:Fc治疗炎症性关节病的护理

促炎症因子TNF-α是炎症性关节病炎症反应过程中的关键细胞因子。近年来，针对TNF-α等炎性因子的生物制剂在炎症性关节病治疗中的作用已被大量研究证明。注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc．益赛普）是一种TNF—α拈抗剂的代表药。笔者所在科2008—01～2008—12应用益赛普治疗炎症性关节病31例。现就护理体会报告如下。

益赛普(rhTNFR:Fc)治疗强直性脊柱炎的护理

强直性脊柱炎（AS）是一种慢性炎症性疾病,主要侵犯骶髂关节、脊柱及外周关节。疾病晚期可发生脊柱强直,畸形以致严重功能受损。AS的病因未明,遗传、环境和免疫因素共同发挥作用。迄今为止,AS缺乏有效治疗药物。近年来除了非甾体类抗炎药及改善病程药物治疗AS外,肿瘤坏死因子的抑制剂用于AS的治疗取得了显著疗效。近年来,

金雀异黄素抗Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠滑膜血管新生的研究

目的:研究金雀异黄素(genistein,Gen)对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen-induced arthritis,CIA)大鼠关节滑膜血管新生的影响。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、Gen治疗组、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗组和Gen+MTX治疗组,每组8只。除空白对照组外,各组大鼠用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导CIA建立大鼠模型。Gen治疗组造模次日开始用药,每天胃内灌注Gen混悬液1mL,剂量为30mg/(kg.d);MTX治疗组造模后用药,每周胃内灌注0.2mg/kg;Gen+MTX治疗组两种药物联合应用;空白对照组和模型对照组每天灌注等量的生理盐水。造模后第6周,取膝关节用免疫组织化学法检测其滑膜的微血管密度,并取血清用Westernblotting检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase,MMP)-1、2、9的表达并计算其相对含量。结果:CIA大鼠模型关节炎指数评分、后肢容积及关节滑膜组织病理情况与正常大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05),提示造模成功。Gen可使CIA大鼠关节滑膜新生血管数目明显减少,且滑膜炎症较模型对照组轻,同时还能降低血清中VEGF和MMP-1、2、9蛋白的表达。结论:Gen可能通过抑制VEGF和MMP-1、2、9的表达而发挥抗滑膜血管新生的作用,从而延缓病情的发展。Gen联合MTX治疗效果可能更强。

沙利度胺及氨甲蝶呤抗CIA大鼠滑膜血管新生及其作用机制的研究

目的研究沙利度胺、氨甲蝶呤对大鼠Ⅱ型胶原诱导型关节炎血管新生的影响及相关的机制。方法建立类风湿性关节炎大鼠模型.自造模次日治疗组分别给予沙利度胺、甲氨蝶呤和沙利度胺联合甲氨蝶呤治疗,在第6周取膝关节应用免疫组化检测其滑膜的微血管密度(MVD),取血清进行Western Blot检测大鼠体内血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-1、2、3、9的表达并计算相对含量。结果①免疫组织化学染色显示沙利度胺、氨甲蝶呤和沙利度胺联合氨甲蝶呤治疗模型大鼠可使关节滑膜中新生血管数量明显减少.微血管密度(MVD)明显降低(P<0.05).以沙利度胺联合氨甲蝶呤组作用最强。②沙利度胺、氨甲蝶呤和沙利度胺联合氨甲蝶呤可抑制VEGF、MMP-1、2、3、9表达(P均<0.05)。结论沙利度胺和氨甲蝶呤可能通过抑制VEGF,MMP-1、2、3、9的表达而发挥抗滑膜血管新生的作用,且两者有协同作用。

金雀异黄素对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的影响

目的:观察金雀异黄素(genistein,Gen)对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)分泌炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法:采用Ⅱ型胶原注射建立CIA动物模型,用关节炎指数(arthritis index,AI)分析法评估CIA模型是否建立成功。胶原酶消化法分离培养原代FLS,用流式法检测滑膜细胞血管细胞黏附分子-1(vascular cell ad-hension molecule-1,VCAM-1)的表达。在FLS培养液中加入不同浓度的Gen,用酶联免疫吸附测定法检测FLS培养上清中IL-1β和TNF-α的含量。结果:Ⅱ型胶原致敏后3d,大鼠开始出现关节肿胀,AI逐渐增高,至造模后第3周最为明显,与空白对照组比较差异有统计学意义。大鼠滑膜细胞培养至第4代,检测其VCAM-1的表达高达85.5%,提示所培养的细胞为FLS,即B型滑膜细胞。不同浓度的Gen(100、200、400μmol/L)作用于FLS细胞后,细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的分泌不同程度地受到抑制,且抑制作用呈剂量依赖性。结论:金雀异黄素能抑制FLS分泌TNF-α和IL-1β,且抑制作用呈剂量依赖性,这可能是其抗CIA大鼠滑膜炎的作用机制之一。

金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素(genistein,gen)对氯化钴(CoCl2)诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为:①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现:CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系(p<0.01);而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响(p>0.05);gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达(p<0.01),对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响(p>0.05)。结论:CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。

多发性骨髓瘤DT方案化疗的护理

多发性骨髓瘤（MM）是由于单克隆的浆细胞异常增生，导致血清中出现大量的单克隆免疫球蛋白并产生溶骨性损害的恶性肿瘤。临床表现为骨质破坏、贫血、肾功能损害和免疫功能异常等。MM约占血液系统恶性肿瘤的10％，约70％患者化疗有效，但多次化疗易产生耐药，骨髓移植后易复发。近年来研究发现．由于多发性骨髓瘤细胞分子遗传学的某些变化，易对标准剂量化疗耐药。笔者所在科于2007-02～2008-08对收治的MM16例采用DT方案化疗。相关护理体会如下。

沙利度胺联合地塞米松治疗多发性骨髓瘤的实验及临床研究

目的 探讨沙利度胺（THD）联合地塞米松（Dex）对多发性骨髓瘤（MM）KM3细胞的作用及其可能的机制,进一步用THD联合Dex治疗初治MM患者,观察治疗前、治疗后患者血清IL-6、TNNF-α、VEGF、ES、Survivin的表达水平.方法 采用细胞毒性试验（MTt法）,确定最佳药物干预条件,使用该条件药物对KM3细胞进行处理.并采用间接ELISA法检测KM3细胞上清和初治MM患者TD方案治疗前后血清中IL-6、TNF-α、VEGF、ES、Survivin的表达水平.结果 THD 80 μg/ml和100 μg/ml联合Dex（4 μg/m1）可使KM3细胞IL-6、Survivin表达下降,Es表达增加（P〈0.05）;而对VEGF、TNF-α的表达无影响.MM患者经TD方案治疗后血清IL-6、TNF-α、Survivin表达下降（P〈0.01）,ES表达升高（P〈0.01）.动态观察2例MM患者治疗前、治疗后1、2、4个月,血清IL-6、TNF-α、VEGF、Survivin表达呈下降趋势.而ES表达呈上升趋势.结论 THD联合Dex可能通过下调IL-6、TNF-α、Survivin的表达,上调Es的表达而发挥抗MM的作用.

凋亡调节蛋白Survivin与类风湿关节炎

凋亡调节蛋白（Survivin）是最近新发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAP）家族的新成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡的重要因子。类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜浸润性增生为主要病理改变的自身免疫疾病。研究表明，滑膜细胞周期失调及凋亡异常可导致关节滑膜组织过度增生、肥厚，从而促进RA发生。这些异常的凋亡与凋亡相关基因Fas、Bcl-2、p53、survivin等表达异常有关。本文就Survivin与RA之间的关系综述如下。

金属蛋白酶组织抑制因子1抗关节炎大鼠滑膜炎症及血管新生的研究

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性的以关节症状为主的全身性的自身免疫性疾病．目前的研究表明炎症滑膜所分泌的许多细胞因子促进关节滑膜新生血管形成是RA病理过程的中心环节。新生血管形成（angiogenesis）是一个涉及内皮细胞、细胞外基质、可溶性细胞因子的复杂的、多步骤的、协调的连续过程．受多种因素调控．主要取决于血管生成促进因子和血管生成抑制因子之间的平衡。金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1 ，TIMP1）是近年来发现的MMPs的天然抑制剂。是相对分子质量为285000的糖蛋白。TIMPs在多个环节抑制MMPs的活性．亦可抑制新生血管形成．如阻碍MMPs介导的内皮细胞移动。抑制基质中促血管生成因子的释放，

金雀异黄素对胶原诱导性大鼠成纤维样滑膜细胞分泌的血管新生相关因子的影响

目的观察金雀异黄素（genistein）对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节成纤维样滑膜细胞（FLS）分泌的血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶（MMP）-1、2、3、9的影响。方法采用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂（CFA）建立CIA大鼠模型；每周进行一次关节炎指数（AI）评分；于造模第6周摄取关节X线片，选取大鼠关节进行关节滑膜组织病理检测；取出关节滑膜组织，用胶原酶消化法分离培养原代成纤维样滑膜细胞；流式法检测滑膜细胞血管细胞黏附分子（VCAM）-1的表达；在FLS培养中加入用不同浓度的金雀异黄素（100，200，400μmol／L），间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测FLS培养上清中VEGF及MMP-1、2、3、9的表达。结果Ⅱ型胶原和CFA共同致敏后3d，大鼠开始出现关节肿胀，AI逐渐增高，于第3周时最明显，观察AI评分、关节X线以及关节滑膜组织病理发现，造模组与空白对照组比较差异有统计学意义。大鼠滑膜细胞培养至第4代，检测其VCAM-1的表达高达85．5％，提示所培养的细胞即为FLS。不同浓度的金雀异黄素（100，200，400μmol／L）和甲氨蝶呤（MTX，1mg／L）作用于FLS后，FLS培养上清中VEGF和MMP-1、2、3、9的分泌受到抑制，且抑制作用强度与药物的浓度有关。结论本实验使用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂成功构建了CIA大鼠模型，用胶原酶消化法成功地分离并培养了原代大鼠成纤维样滑膜细胞。一定浓度的金雀异黄素能抑制CIA大鼠FLS分泌的VEGF和MMP-1、2、3、9，且抑制作用呈浓度依赖性。