“学院办大学”背景下校企合作人才培养新模式的探索

从现实条件来看,高校的各类专业建设是以学院为基础的,学院在专业课程建设中发挥着主体地位,因此专业人才的培养也应以学院为主。就人才的培养来说,每门学科对学生提出的要求都不尽相同,所以在学生的招收和培养方面,学院有一定的发言权。在当前“学院办大学”的背景下,如何进一步加强校企合作,做好人才培养工作,是高校需要深入研究的问题。

植物源大蒜菌质活素粉对扬州鹅生产性能和激素分泌的影响

本研究旨在日粮中添加4种不同剂量植物源大蒜菌质活素粉(Botanical activity flour of garlic bacterium substance,GBS)研究其对扬州鹅生产性能和激素分泌的影响,为其开发利用提供理论依据和应用参考。选择1日龄扬州鹅240只,公母各半。随机分成5组:对照组使用基础日粮,试验1、2、3、4组分别在基础日粮中添加GBS0.25、0.50、1.00、2.00 g.kg-1配合料。结果表明:与对照组相比,总体1～60日龄,试验各组体增质量(BWG)分别提高5.91%(P<0.05)、8.18%(P<0.01)、13.64%(P<0.01)、13.64%(P<0.01);试验4组采食量(FI)提高8.79%(P<0.01);试验2、3组饲料转化率(FCR)分别降低7.55%(P<0.05)、9.37%(P<0.01)。试验2、4组胸肌粗蛋白质含量分别提高22.88%(P<0.05)、17.81%(P<0.05);试验各组胸肌粗脂肪含量分别降低22.82%(P<0.05)、31.21%(P<0.05)、44.63%(P<0.05)、33.22%(P<0.05)。试验3、4组T3水平分别提高11.76%(P<0.01)、14.38%(P<0.01);试验各组T4水平分别提高7.75%(P<0.01)、14.06%(P<0.01)、14.30%(P<0.01)、66.52%(P<0.01)。试验1、3、4组胰高血糖素(Glu)水平分别降低14.78%(P<0.01)、14.45%(P<0.01)、16.05%(P<0.01)。试验2、3、4组采食后3 h血清胰岛素(Ins)平均水平分别提高14.85%(P<0.01)、12.54%(P<0.01)、23.27%(P<0.01);试验1、3、4组血糖平均水平分别降低7.96%(P<0.01)、6.80%(P<0.01)、11.30%(P<0.01)。结果提示,扬州鹅日粮中添加一定剂量的GBS对其生产性能和激素分泌有促进作用,且在本试验的4个剂量中,以添加GBS 2.00 g.kg-1配合料组效果最佳。

鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察

将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGAM59联免组的ACI值(141.62)接近于rEtGAM59单免组,rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(115.46)小于rEtGAM56单免组。各免疫组血清抗体水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。rEnApiAP2对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护效果,与rEtGAM联免可提高对毒害艾美耳球虫的免疫保护力。本研究结果为鸡球虫病重组亚单位疫苗研制奠定了基础。

免疫增强剂三七茎叶皂苷口服液的质量控制研究

本研究从性状、pH、相对密度、装量差异、微生物限度、鉴别、含量测定等方面对三七茎叶皂苷口服液(Oral liquid of saponins of stems and leaves of Panax notoginseng,LSPN)进行质量控制研究。利用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)法,鉴定其主要成分;利用高效液相色谱-蒸发光散射(high-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)法,建立LSPN中人参皂苷Rb1和Rb3含量的同步分析方法。HPLC-ELSD的色谱条件:色谱柱为GL,InertSustain C18柱(5μm,250×4.6 mm Column);流动相为乙腈(A)-水(B),采用梯度洗脱;进样量:10 L;人参皂苷Rb1和Rb3保留时间分别为13.264 min和15.415 min。ELSD运行参数:氮气流速为1.64 slpm,气化温度为48℃,蒸发温度为80℃。结果表明,LSPN为黄绿色的澄清液体,味苦,pH、相对密度和微生物限度均符合标准要求。人参皂苷Rb1和Rb3的检出限(limit of detection,LOD)均为10 g/mL,定量限(limit of quantitation,LOQ)均为20 g/mL,均在20~500 g/mL内线性关系良好;回归方程分别为Y=1.58X+1.72(r=0.999904)和Y=1.60X+1.64(r=0.999628)。人参皂苷Rb1和Rb3的平均加样回收率分别为101.25%和100.42%,RSD分别为2.71%和1.12%。该法准确,精密度、重现性好,可用于LSPN中人参皂苷Rb1和Rb3的含量测定。

深切缅怀李厚达教授

2022年12月30日,敬爱的长者、慈爱的老师、杰出的实验动物科学家及教育家李厚达教授永远离开了我们。2023年12月16日,在先生仙逝一周年之际,扬州大学兽医学院举办了实验动物学专业人才发展暨科技创新论坛,并隆重开展了“致敬李厚达教授”的追思活动。来自全国各地的200余名知名学者、扬州大学实验动物专业的毕业生及李厚达教授的挚友齐聚扬州,深切缅怀李厚达教授积极进取、艰苦创业、成果卓著的精彩人生。

毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析

旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。

34株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及部分耐药基因调查分析

为更好的指导养殖场鸭疫里默氏杆菌病临床用药以及探究该菌多重耐药机制,本研究对安徽地区患病鸭采样、细菌分离鉴定后,进行生化鉴定、药敏试验,再根据药敏结果进行氨基糖苷类耐药基因以及Ⅰ类整合子鉴定。药敏试验结果表明该地区34株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢拉定、头孢曲松、氟苯尼考、大观霉素、磺胺异恶唑等抗生素较敏感,对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、链霉素、阿奇霉素等抗生素均有较强的耐药性;其中有97%的菌株存在多重耐药现象,最高可耐19种抗生素。15种氨基糖苷类耐药基因鉴定结果表明aac(6')Ⅰb基因、aac(6')Ⅱ基因、rmtC基因、aph(3')Ⅱa基因检出率分别为94.1%(32/34)、82.4%(28/34)、73.5%(25/34)、70.6%(24/34),其余基因均未检测到;同时34株分离株均携带Ⅰ类整合子,大小为1 kb,其基因盒种类为aadA1(链霉素耐药基因);其氨基糖苷类耐药表型和耐药基因符合率大于69%。因此,安徽地区鸭疫里默氏杆菌分离株多重耐药性严重,需加强对抗生素的用药规范性,特别要注意氨基糖苷类药物使用。

肉鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】对江苏某大型白羽肉鸡场疑似产气荚膜梭菌感染造成大规模死亡的病例进行确诊。【方法】无菌采集病死鸡肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肠道等病变组织,通过厌氧培养进行细菌分离和纯化,革兰染色镜检对分离菌株进行初步鉴定,通过16S rRNA基因序列分析确定属和演化关系,通过PCR扩增毒素基因确定分离株毒素型,通过动物致病性试验和药敏试验,确定其致病性和耐药表型并检测耐药基因。【结果】从4只病死鸡不同脏器中分离到了9株疑似菌,分离菌在产气荚膜梭菌鉴定培养基上呈黑色,16S rRNA分析得出9株分离菌与产气荚膜梭菌相似性最高可达99.60%。16S rRNA基因系统进化树显示,4株分离株与巴基斯坦鸡源产气荚膜梭菌(GenBank登录号:MN365136.1)具有较近的亲缘性,5株分离株与南非鸡源产气荚膜梭菌(GenBank登录号:OR494055)具有较近的亲缘性。毒素分型结果显示,5株为A型,2株为F型,2株为E型。致病性试验结果显示,小鼠全部死亡,表明该菌具有致死性。药敏试验结果显示,9株分离株均对头孢类抗生素敏感,耐药基因分析表明大环内酯类erm(B)(77.8%)和四环素类tetA(P)(55.6%)、tetB(P)(66.7%)为主要耐药基因。【结论】本研究从同一只病死鸡中分离到不同毒素型产气荚膜梭菌,且分离菌耐药情况较严重。研究结果为兽医临床鸡产气荚膜梭菌病防治提供了新的思路。

新城疫病毒Mukteswar株感染鸡巨噬细胞入胞及胞内转运途径研究

新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处理细胞,然后感染NDV Mukteswar株,通过Westem blot和IFA检测NDV NP蛋白的表达变化。结果显示Dynasore、MβCD和Baf A1处理后NP的表达水平降低,表明NDV入侵HD11细胞是利用小窝蛋白介导的内吞途径,且依赖动力蛋白、胆固醇和pH。通过过表达和干扰试验检测调节不同内体囊泡类型运输的Rab蛋白(Rab5、Rab7、Rab11)对NDV感染HD11细胞的影响,结果发现Rab7的表达对NDV感染无影响,而过表达Rab5和Rab11促进NDV感染,表明是由Rab5、Rab11而不是Rab7调节NDV的转运。本研究丰富了NDV入侵宿主免疫细胞的途径及胞内转运的研究,并为全面阐明NDV感染机制提供了理论基础。

16株新型H3N3亚型禽流感病毒的遗传变异分析

为了解新出现的H3N3亚型禽流感病毒(AIV)的遗传变异特征,对2022—2023年分离鉴定的H3亚型AIV进行了全基因组测序分析,并对代表株进行了抗原差异分析。结果共分离鉴定出15株家禽源和1株野鸟源H3N3亚型AIV。全基因遗传演化分析结果显示,16株分离株均属于欧亚分支,其HA基因均源自H3N8亚型AIV,与人源H3N8亚型AIV的核苷酸相似性为97.3%~99.2%;NA基因均源自H10N3亚型AIV,与人源H10N3亚型毒株的核苷酸相似性为98.1%~98.4%;内部基因片段均来自H9N2亚型AIV。分离株HA基因裂解位点均符合低致病性AIV的分子特征。分离毒株存在多个能增强病毒对哺乳动物适应性及致病性的突变位点,如PB2蛋白的A588V和E627V突变、PB1蛋白的I368V和S375N突变等。抗原差异性分析结果表明,分离株与华东地区早期流行株的HI抗体滴度相差1 log2~3 log2。因此,本研究分离的16株H3N3亚型AIV均为三源重组病毒,由H9N2亚型AIV提供全部内部基因,毒株存在多个哺乳动物适应性及致病性增强的突变,并已传播给野禽。本研究揭示了新型H3N3亚型AIV的遗传特征、变异和多宿主分布情况,为禽流感的防控提供理论支持。

2020年江苏地区鸭圆环病毒分子流行病学调查及分离方法的初步研究

为了解2020年江苏地区鸭圆环病毒(DuCV)的流行情况、分子特性及探索其分离方法,通过采集江苏部分地区疑似患鸭圆环病的病、死鸭脏器组织,研磨后提取DNA,运用PCR技术扩增该病毒全基因组并测序,分析其分子流行病学特征,确定遗传谱系。将PCR检测阳性的组织病料上清经绒毛尿囊膜接种9日龄SPF鸭胚,分别收集鸭胚绒毛尿囊膜和尿囊液,以相同的方法将PCR检测阳性的尿囊膜/尿囊液进行鸭胚传代,尝试探索分离DuCV的方法。采集的23份样品中共检测出阳性样本10份。病毒基因组序列分析结果表明10株分离株均属于DuCV 1型的分支,传代结果表明多数样本在第1代绒毛尿囊膜和尿囊液样品中可检出DuCV,仅有部分样本在第2、3代的绒毛尿囊膜PCR检测结果呈阳性,传至第4代次时就检测不到病毒核酸。检测的结果一定程度上也表明绒毛尿囊膜检出率高于尿囊液。该结果为江苏地区该病的防控提供了一定的参考价值。

桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用

[目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。

一种新兽用止泻中药复方制剂对大鼠的急性及亚慢性毒性试验

为了解一种新兽用止泻复方制剂的安全性,本试验对该复方制剂进行了经口急性毒性和亚慢性毒性研究。急性毒性试验采用最大给药剂量法对20只Wistar大鼠进行经口灌服制剂。亚慢性毒性试验将80只Wistar大鼠随机分为4组,每组20只,经口染毒剂量分别为3 000、1 500、750和0g/kg体重,连续染毒30d。试验期间观察一般临床状况,每周测量大鼠体重并据此调整染毒剂量。试验结束后测定试验动物血液学、血清生化指标,并进行大体解剖学观察,称取各组主要脏器并计算脏器系数,对高剂量组和对照组大鼠的主要脏器进行组织病理学观察。急性毒性试验结果显示,该制剂经口染毒LD50均大于5g/kg体重时,所有大鼠均存活。亚慢性毒性剖检发现,高剂量组除个别大鼠心脏、肺脏、睾丸(♂)出现轻度淤血外,其他各剂量组的实质器官均未发现异常变化;血液学指标中除高剂量组的单核细胞比率、红细胞压积水平显著下降(P<0.05)外,其余各组各项指标均在正常范围内,与对照组无显著差异。结果表明,在本试验条件下,根据WTO有关外源性化学物急性毒性分级标准,该制剂属实际无毒物质;亚慢性毒性试验也未发现该制剂对大鼠的生长发育产生影响,短期重复应用至少在1 500mg/kg饲喂条件下无亚慢性毒性。

非人灵长类多能干细胞体外培养和诱导分化的研究进展

干细胞在疾病发生、细胞治疗、药物筛选和临床应用等方面具有巨大价值。自日本科学家Shinya Yamanaka发现诱导多能干细胞以来,相关的研究立即成为研究热点并持续至今。小鼠干细胞的研究为其它动物的相关研究开辟了道路,但在药物筛选和疾病治疗等方面有很大局限性。非人灵长类与人类具有更高的基因同源性,在生理、病理、生殖、药理、神经等多方面与人类高度相似,是研究人类疾病和开发人用药物的理想动物模型。非人灵长类研究也是新药在进入临床实验前必须的一个环节。非人灵长类干细胞的研究在疾病的机理研究和药物开发中越发重要,同时避免了伦理问题。本文从体外培养系统的优化和诱导分化的方法两个方面对非人灵长类多能干细胞的相关研究进行了综述,以期为非人灵长类干细胞进一步深入研究提供参考。

鸭疫里默氏杆菌Ⅸ型分泌系统分泌蛋白AS87_RS03090的原核表达及其突变株构建

研究发现细菌Ⅸ型分泌系统(T9SS)效应分子的生物学功能具有多样性,它们参与细菌自身的生命活动或与细菌的致病性密切相关。在前期研究中我们发现鸭疫里默氏杆菌T9SS的效应分子大多具有酶活性,可能参与其生命活动或与致病性相关。为探索鸭疫里默氏杆菌T9SS分泌蛋白AS87_RS03090的功能及其与细菌毒力的关系,本研究根据鸭疫里默氏杆菌AS87_RS03090基因序列设计了特异性引物,并在其上、下游引物中分别添加BamHⅠ和SalⅠ酶切位点,将其克隆到pCold TF载体上构建原核表达载体,诱导表达和纯化出鸭疫里默氏杆菌AS87_RS03090重组蛋白(rAS87_RS03090);本研究还利用自然转化的方式成功构建了AS87_RS03090基因突变株Yb2Δ03090。研究结果将有助于进一步鉴定鸭疫里默氏杆菌T9SS在其致病过程中发挥的作用。

热应激对鸡生产性能、血清生化和肠道微生物影响研究进展

热应激是全球鸡生产面临的重要环境应激挑战之一,它是动物受到外界环境影响时所做出的一系列的非特异性应激反应的总和。热应激会导致鸡的采食量减少、生长性能下降、血液生化指标改变和肠道微生物菌群紊乱,严重影响鸡的生产力。热应激还能够降低鸡的防御机制和免疫功能,增加炎症因子表达,引起机体抗氧化指标升高,并显著影响鸡肠道菌群组成和多样性,其中大肠杆菌和甲烷芽孢杆菌为重要的预测因子,起到重要的预见作用。鸡在热应激环境下的生理调节包括心率增加、呼吸急促及体内氧化代谢增强等症状。在实际生产过程中,通过加强饲养管理、改善饲养环境和添加抗应激物,如微量元素锌及各种维生素,可有效缓解热应激带来的危害。作者综述了热应激对鸡生产性能、血清生化、抗氧化及肠道菌群结构组成等相关指标的具体影响,为鸡饲养管理过程中热应激预防提供一定的理论依据。

小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定

本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础。首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L。通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlap-PCR连接并克隆至转录载体pOL-TV5中构建微型基因组。将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染。经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达。本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础。

动物实验与诺贝尔生理或医学奖

本刊新增实验动物科普栏目，希望全国各地专家学者踊跃投稿。诺贝尔奖举世闻名，其中获得生理或医学奖的工作与动物实验密不可分。下文简单介绍部分获奖者的主要工作，看看两者的密切关系。

饲粮锌对高温应激雪山草鸡生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响

【目的】评估不同形态和剂量的锌对高温应激环境中雪山草鸡生长性能、表观消化率和血清生化指标的影响,以期为高温环境下雪山草鸡的锌营养提供参考。【方法】试验采用2(锌源)×2(锌添加水平)两因子完全随机设计,2种锌源分别为无机硫酸锌和中等螯合强度蛋白锌,2种锌添加水平分别为30和60 mg/kg,共4个试验组;另设1个满足肉鸡锌需要量的对照组。选取320只61日龄雪山草鸡,随机分配到5个组中,每个处理8个重复,每个重复8只鸡。预试期7 d,正试期28 d,均在高温应激条件下进行。分别在试验第14(75日龄)和28(89日龄)天时采集饲料样、粪样和血样,用于测定肉鸡的生长性能、养分表观消化率和血清生化指标。【结果】①锌源、锌添加水平及两因子互作对高温应激肉鸡的生长性能均无显著影响(P>0.05)。②与对照组相比,饲粮中添加锌显著提高了肉鸡粗蛋白质和粗脂肪的表观消化率(P<0.05)。锌源对干物质的消化率有显著影响,在锌源主效应上,与饲粮中添加无机硫酸锌相比,添加中等螯合强度蛋白锌显著降低了高温应激肉鸡的干物质表观消化率(P<0.05)。③与对照组相比,饲粮中添加锌显著提高了试验第14天时肉鸡血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量(P<0.05),以及显著提高了试验第28天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量(P<0.05)。锌源对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量有显著影响(P<0.05);锌水平对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量,以及试验第28天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量有显著影响(P<0.05);锌源×锌水平交互对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白含量和试验第28天时肉鸡血清中白蛋白含量均有显著影响(P<0.05),其中饲粮中添加60 mg/kg中等螯合强度蛋白锌作用效果最佳。④在锌源、锌水平和锌源×锌水平互作效应上,饲粮中添加锌对高温应激肉鸡血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均无显著影响(P>0.05)。⑤与对照组相比,饲粮中添加锌显著提高了试验第14天时肉鸡血清中总胆固醇和高密度胆固醇含量,显著降低了试验第28天时肉鸡血清中总胆固醇和低密度胆固醇含量(P<0.05)。锌水平对肉鸡血清中总胆固醇、高密度胆固醇和低密度胆固醇含量均有显著影响(P<0.05)。【结论】在高温应激条件下,饲粮中添加锌虽然没有显著改善肉鸡的生长性能,但对肉鸡粗蛋白质和粗脂肪的表观消化率产生了显著影响,并对高温应激肉鸡血清蛋白质和脂代谢指标产生有益影响,有助于维持肉鸡生理功能的稳定性。

鸡DCAF1生物信息学分析及对J亚群禽白血病病毒复制的影响

【目的】为分析鸡损伤特异性DNA结合蛋白和泛素连接酶复合物骨架蛋白库林4相关因子1(DDB1and CUL4associatedfactor1,DCAF1)蛋白的生物学特性,构建DCAF1基因的真核表达载体,并初步探究其对J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的影响。【方法】在NCBI中下载相关物种DCAF1蛋白氨基酸序列,采用Mega11.0软件构建系统进化树;利用ProtParam、ProtScale、TMHMM等在线程序分析鸡DCAF1蛋白的氨基酸序列,预测其理化性质、保守结构域及二、三级结构和互作蛋白等生物信息;构建鸡DCAF1基因重组真核表达载体,通过实时荧光定量PCR和Westernblotting技术检测ALV-J感染对DCAF1mRNA和ALV-JEnv蛋白表达水平的影响及过表达DCAF1对ALV-J复制的影响。【结果】鸡DCAF1蛋白由1496个氨基酸组成,其分子质量约为170ku;系统进化树结果表明,鸡与红鸭亲缘关系最近,与斑马鱼亲缘关系最远。生物信息学预测结果表明,鸡DCAF1蛋白无跨膜结构域,无信号肽表达,包含ARM折叠、LisH和WD40重复3个主要结构域与末尾1个酸性结构域,其互作蛋白为DDB1、CUL4A、SAMHD1等。鸡DCAF1蛋白二级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋组成,分别占比44.85%和41.18%,延伸链和β-折叠占比次之,分别是9.76%和4.21%。三级结构与二级结构基本一致,建模一致性为93.79%。ALV-J感染24、48h后,DCAF1基因和蛋白表达水平均极显著高于感染0h时(P<0.01);过表达DCAF1后,与感染对照组相比,ALV-JEnv蛋白显著升高(P<0.05)。【结论】鸡DCAF1蛋白由1496个氨基酸组成,分子质量约170ku,属于稳定的亲水蛋白,不含跨膜结构域。本研究成功构建了DCAF1基因真核表达载体。在ALV-J感染的细胞中,DCAF1蛋白和基因表达水平极显著升高,而过表达DCAF1则显著促进ALV-J复制。研究结果为进一步阐明鸡DCAF1的生物学功能及其与ALV-J互作的分子机制奠定了基础。