温度对充血性心衰病人心房肌细胞I_(to)和I_(Kur)的影响

运用全细胞膜片钳技术研究不同温度条件下充血性心衰病人心房肌细胞瞬间外向钾电流（I_（to））和超快延迟整流钾电流（I_（Kur））的特征。结果表明：在5~9和16~20℃2种不同的温度下,I_（to）、I_（Kur）存在着明显不同的激活、失活等动力学特征。当环境温度较低时,引导出Ito、IKur所需的电压阈值较低,半数最大激活电位较低,电流-电压之间的关系较恒定,除极至＋50 mV时的电流密度较小。但Ito的电压依赖性失活过程却不受温度的影响。就时间依赖性动力学过程而言,温度较低时通道的激活时间常数和失活时间常数的数值较小,时间-电位间的关系不随电位的变化而发生明显的改变;温度较高时,激活时间常数和失活时间常数的数值较大,且随着刺激电位的增高,激活时间常数和失活时间常数变得越来越小。说明温度对充血性心衰病人Ito、IKur的大小和动力学特征具有明显影响。

淫羊藿苷对结肠癌增殖、侵袭抑制作用及机制研究

淫羊藿苷(Ica)梯度处理人结肠癌细胞HT29,采用MTT法、流式细胞术、Transwell小室检测Ica对HT29细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移的影响;蛋白组织学技术寻找Ica作用前后的差异蛋白,Western blot对部分蛋白进行验证。结果表明:Ica能够抑制HT29增殖;阻滞细胞由G0/G1期向S期的发展;诱导HT29细胞凋亡;抑制细胞侵袭和迁移;Ica干预24h后,乙醛脱氢酶2(ALDH2)和钙离子依赖性磷脂结合蛋白1(CPNE1)上调,Western blot验证结果一致。这一研究提示Ica可显著抑制HT29细胞的增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调ALDH2和CPNE1有关。

紫杉叶素通过调控Nrf2/HO-1信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

为研究紫杉叶素(TAX)对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及分子机制,将120只健康雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO/R)、20 mg·kg^(-1) TAX+MCAO/R组(20 mg·kg^(-1) TAX组)和40 mg·kg^(-1) TAX+MCAO/R组(40 mg·kg^(-1) TAX组),根据分组要求连续灌胃给药5 d后,采用线栓法构建MCAO/R模型(缺血45 min再灌注24 h)。通过神经功能评分检测神经损伤症状;TTC染色法观察脑梗死体积大小的差异;免疫组织化学染色观察神经元细胞、星形胶质细胞及小胶质细胞在MCAO/R后的变化情况;Western blot法检测Nrf2信号通路及凋亡相关蛋白表达情况。结果表明:与模型组相比,40 mg·kg^(-1) TAX组明显改善小鼠神经损伤症状、减少脑梗死体积和减少海马CA1区及皮质区神经元死亡;同时抑制星形胶质细胞及小胶质细胞的过度活化;且TAX处理组明显提高半影区Nrf2和HO-1的蛋白表达,减轻缺血再灌注损伤诱导的凋亡。这一研究提示,TAX显著激活Nrf2/HO-1信号通路,改善缺血再灌注所致的小鼠缺血性脑损伤。

MiR-133a-3p抑制人胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭研究

实时定量PCR检测miR-133a-3p在正常胃黏膜细胞GES1和不同恶性程度的胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、AGS、HGC-27、BGC-823、MKN-45的表达。miR-133a-3p稳定转染人胃癌细胞系SGC-7901,MTT检测细胞增殖情况,划痕试验观察细胞迁移能力的改变,transwell试验比较细胞侵袭能力的改变。结果表明:正常胃黏膜细胞系中miR-133a-3p的表达显著高于6种胃癌细胞(P<0.05),但其表达高低与分化程度差异不明显(P>0.05)。miR-133a-3p转染SCC-7901细胞后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结果说明胃癌的发生发展与miR-133a-3p相关,miR-133a-3p可以作为潜在的胃癌诊断标志。

淋病奈瑟菌耐药性调查及耐药基因的定位与转移研究

采用纸片琼脂扩散法检测扬州地区淋病奈瑟菌临床分离株对常用抗生素的耐药性,并研究耐药基因的定位和转移机制。对耐药菌株YZ1008分别提取染色体DNA和质粒DNA,用PCR技术检测氨苄青霉素抗性基因的定位,含抗性基因的质粒DNA转化大肠埃希菌敏感株,观察大肠埃希菌耐药性的变化。结果表明:淋病奈瑟菌扬州分离株对受试的11种抗生素具有严重的耐药性,氨苄青霉素耐药基因在染色体DNA和质粒DNA上都存在,质粒耐药基因的转移可使大肠埃希菌DH5α获得氨苄青霉素抗性。这为淋病奈瑟菌耐药性防控研究积累有益数据。

淋病奈瑟菌WHO-A株Cas蛋白的表达和多克隆抗体制备

为研究淋病奈瑟菌CRISPR系统中Cas蛋白的结构与功能,以WHO-A株基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆出CT和TM 2个Cas基因,在大肠埃希菌中进行原核表达。分别用pCold-TF表达的CT和TM重组蛋白免疫小鼠制备Cas抗体;以pGEX-6p-1表达的CT和TM重组蛋白为检测抗原测定免疫血清中特异性抗体的效价。结果表明:获得了与预期分子量大小一致的重组抗原,间接ELISA检测表明,小鼠免疫血清中CT和TM抗体的效价分别为1∶25 600、1∶12 800。结果说明为细胞外探索淋病奈瑟菌中Cas蛋白的作用机制和细胞内检测相关蛋白的含量提供了试验材料。

甘丙肽受体1正性调节胰岛素敏感性的作用

将36只大鼠分3组,高脂饮食对照组、2型糖尿病模型对照组(模型组)、2型糖尿病模型大鼠侧脑室注射甘丙肽受体1(GALR1)激动剂M617[10nmol·(kg·d)-1]组(试验组),每组12只。侧脑室注射处理20d后,采用ELISA法检测血清胰岛素抵抗分子表达指标、正糖钳试验检测葡萄糖输注速率及RT-PCR检测脂肪细胞GLUT4表达量,探讨M617通过激活GALR1能否提高糖尿病大鼠的胰岛素敏感性。结果表明:侧脑室注射M617能显著增加糖尿病模型大鼠的体重、降低血糖、抑制胰岛素分泌、抑制sCD36及CRP表达;同时,侧脑室注射M617能显著增加糖尿病模型大鼠的正糖钳的葡萄糖输注速率和脂肪细胞GLUT4mRNA表达水平。说明侧脑室注射M617通过激活GALR1可显著促进外周组织的葡萄糖摄取,增加胰岛素敏感性。

菌影作为疫苗佐剂的潜力及其机制的研究进展

细菌菌影(bacterial ghosts,BGs)是革兰阴性菌的细菌空壳,含有天然的免疫刺激剂(如脂多糖、鞭毛蛋白等),是固有免疫和适应性免疫细胞的强效激活剂。体内外试验研究表明,BGs具有免疫佐剂效应,能够诱导多种细胞产生前炎症细胞因子,后者可招募T细胞和B细胞聚集淋巴结,进而激活一系列体液免疫、细胞免疫及黏膜免疫应答。本文总结了菌影作为疫苗佐剂的广泛应用及其诱导免疫应答的机制,以期为新型疫苗制剂的研制提供思路。