中医药治疗痛风性关节炎的研究进展

痛风性关节炎是一种常见的代谢性风湿病,临床主要表现为受累关节的红肿热痛及功能障碍。现阶段中医药治疗痛风的手段众多,疗效确切且不良反应较西药少。临床中常用中药内服、中药外敷、针刺等疗法治疗痛风性关节炎,诸法联合运用疗效更好。实验研究表明,中医药治疗痛风的机制与调节嘌呤代谢、降低血尿酸、下调炎症因子水平、调控细胞凋亡及线粒体自噬、提高抗氧化应激、调节肠道菌群等密切相关。这些研究结果对深入挖掘中医药治疗痛风性关节炎的有效活性成分与分子机制具有非常重要的意义。本文从实验研究与临床应用对中医药治疗痛风性关节炎进行综述,以期进一步阐明中医药治疗痛风的作用机制,为临床诊疗应用提供新思路。

中文版逃避与限制性饮食障碍量表在炎症性肠病患者中的信效度检验

目的检验中文版逃避与限制性饮食障碍量表(NIAS)在炎症性肠病患者中的信度和效度。方法采用便利抽样的方法,选取江苏省2所三甲医院炎症性肠病诊疗中心304例患者作为研究对象,采用一般资料调查表、NIAS、与食物相关的生活满意度量表(SWFL)对患者进行调查。对量表进行项目分析(区分度分析法、相关系数法)、总量表及分量表的信度分析(Cronbach′s α系数)。采用探索性因子分析、验证性因子分析、效标关联度、聚合效度和区分效度检验量表的效度。结果中文版NIAS共9个条目,包括挑食、食欲、恐惧3个维度;验证性因素分析显示3因子模型拟合指数良好[χ^(2)/df=2.340,近似误差均方根(RMSEA)=0.078,标准化残差均方根(SRMR)=0.046,增值拟合指数(IFI)=0.969,比较拟合指数(CFI)=0.969,规范拟合指数(NFI)=0.948,拟合优度指数(GFI)=0.951,非规范拟合指数(TLI)=0.951];中文版NIAS总分和效标量表SWFL相关系数为-0.353,具有较强的关联性;量表各维度的聚合效度CR值为0.821~0.855,AVE分别为0.606(食欲)、0.621(挑食)、0.664(恐惧)。中文版NIAS总的Cronbach′sα系数为0.82,挑食、食欲、恐惧维度的Cronbach′sα系数分别为0.87、0.71、0.92,说明中文版NIAS具有较好的内部一致性和稳定性。结论中文版NIAS具有良好的信效度,可用于评估炎症性肠病(IBD)患者的逃避与限制性饮食障碍行为。

嗜氮酮类化合物Penicilone B的体外抗氧化活性研究

目的研究嗜氮酮类化合物Penicilone B的体外抗氧化活性,并采用密度泛函理论(DFT)分析其抗氧化机制。方法先采用2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力和氧自由基吸收能力(ORAC)3种体外抗氧化方法测定Penicilone B的抗氧化活性;再采用DFT进行Penicilone B的分子结构优化,并在M06-2x/6-31+G**水平从分子结构参数、酚羟基解离焓(BDE)、电离势(IP)、前线分子轨道(FMO)等方面分析Penicilone B的抗氧化机理。结果体外抗氧化实验结果显示,Penicilone B具有一定的体外抗氧化活性,在100μg/mL时,其对ABTS自由基和DPPH自由基的清除率分别为(11.62±1.19)%、(22.68±2.81)%,阳性对照维生素C(Vc)的清除率分别为(43.17±3.88)%、(58.73±4.70)%。此外,Penicilone B和Vc的ORAC值分别为(1.06±0.06)、(2.87±0.15)μmol trolox/mg。DFT计算结果表明,Penicilone B的C15位酚羟基易发生抽氢反应;Penicilone B还可能通过直接和活泼自由基结合而终止氧化的链锁反应,A环和B环是主要活性位点。结论本研究首次采用DFT研究嗜氮酮类化合物的抗氧化机理,理论计算和实验结果基本一致,可为进一步研究嗜氮酮类化合物提供理论依据。

响应面法优化杜鹃兰假鳞茎总酚提取工艺的研究

以杜鹃兰(Cremastra appendiculata)假鳞茎为原料,研究乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比4个主要影响因素对总酚得率的影响;在单因素水平试验基础上,通过Box-Behnken试验设计方案优化杜鹃兰假鳞茎总酚的提取条件。结果表明:最佳提取工艺条件为乙醇浓度57.5%、提取温度72℃、料液比1∶60(g∶mL),在此条件下,杜鹃兰总酚的实际得率为0.51mg·g-1。该研究对杜鹃兰总酚的提取有一定的指导意义。

扁蒴藤素对人结直肠癌细胞HCT116和HT29增殖、迁移和细胞周期的影响及作用机制研究

目的探讨扁蒴藤素对人结直肠癌HCT116细胞和HT29细胞增殖、迁移和细胞周期的影响,并初步探索潜在的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)实验于不同时点分别检测不同浓度扁蒴藤素对HCT116细胞和HT29细胞存活率的影响;采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)实验分别检测不同浓度扁蒴藤素对HCT116细胞和HT29细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验观察不同浓度扁蒴藤素对HCT116细胞和HT29细胞迁移能力的影响;采用流式细胞术检测扁蒴藤素对HCT116细胞和HT29细胞周期的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测扁蒴藤素对HCT116细胞与HT29细胞周期相关蛋白cyclin E1、CDK2、p53、p21、p27表达和PI3K/Akt/mTOR信号转导通路相关蛋白表达的影响。结果MTT实验结果显示,经不同浓度扁蒴藤素分别处理12、24、36、48、60 h后,HCT116细胞和HT29细胞的存活率均较对照细胞降低,且呈时间和浓度依赖性。EdU实验结果显示,经0.5、1、2μmol/L扁蒴藤素处理24 h后,HCT116细胞中阳性细胞率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);经1、2、4μmol/L扁蒴藤素处理24 h后,HT29细胞中阳性细胞率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。Transwell实验结果显示,加入0.5、1、2μmol/L扁蒴藤素作用24 h后,HCT116细胞穿透小室底膜的数量变少,且细胞迁移率低于对照细胞,差异有统计学意义(P<0.001);加入1、2、4μmol/L扁蒴藤素作用24 h后,HT29细胞穿透小室底膜的数量变少,且细胞迁移率低于对照细胞,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术结果显示,扁蒴藤素可诱导HCT116细胞和HT29细胞发生G_(0)/G_(1)期阻滞。Western blot结果显示,与对照细胞比较,HCT116细胞和HT29细胞经扁蒴藤素处理后p53、p21、p27蛋白表达量增加,cyclin E1、CDK2蛋白表达量降低,且p-PI3K、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论扁蒴藤素可抑制HCT116细胞和HT29细胞的增殖和迁移,并诱导细胞G_(0)/G_(1)期阻滞,其分子机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

微小RNA-10a-5p促进紫草素抗卵巢癌细胞的作用

目的初步探究微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)在紫草素抗卵巢癌中的作用。方法基于数据库分析miR-10a-5p在肿瘤中的表达水平;瞬时转染miR-10a-5p mimic及NC,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-10a-5p的表达水平;使用CCK-8实验检测紫草素对SKOV3细胞的半数抑制浓度(IC_(50));通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;活死细胞染色比较细胞死亡情况。结果miR-10a-5p在多种肿瘤中异常表达,与对照组相比,转染miR-10a-5p mimic后可上调SKOV3细胞中miR-10a-5p的表达水平约80倍,差异有统计学意义(P<0.0001);miR-10a-5p可促进卵巢癌细胞的凋亡,提高SKOV3细胞对紫草素的敏感性,其IC_(50)由2.45μmol/L降低至1.40μmol/L,降幅达42.9%。与NC相比,转染mimic可促进SKOV3细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与17.71%,P=0.0075)。与无紫草素相比,紫草素可显著促进卵巢癌细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与82.48%,P<0.0001);且miR-10a-5p可协同紫草素促进SKOV3的凋亡,差异有统计学意义(82.48%与96.80%,P<0.0001)。活死细胞染色结果显示,miR-10a-5p联合紫草素使更多细胞显著发生死亡(P<0.0001);miR-10a-5p联合紫草素使S期细胞占比显著增高(P<0.0001),从而抑制细胞增殖。通过Targetscan7.2预测发现,GATA6可能是miRNA-10a-5p的一个作用靶点。Kaplan-Meier Plotter数据库分析提示,GATA6的高表达与卵巢癌的不良预后相关,瞬时转染mimic后,GATA6 mRNA和其蛋白表达水平明显著下调(P<0.0001)。结论miR-10a-5p和紫草素均可促进SKOV3凋亡,有协同抗卵巢癌的作用,且miR-10a-5p可显著提高SKOV3细胞对紫草素的药物敏感性,其可能是通过靶向作用于GATA6而产生抑癌作用。

食管鳞状细胞癌piRNA-19166的表达及其临床病理意义

目的检测食管鳞状细胞癌中piRNA-19166的表达水平,分析其临床病理意义。方法应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测piRNA-19166在96例食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中的表达,并分析其与食管鳞状细胞癌患者病理资料的关系。应用qRT-PCR检测piRNA-19166在3种食管癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达。结果 96例食管鳞状细胞癌组织中,71例piRNA-19166表达下降,25例表达正常或升高;与癌旁正常食管组织相比,piRNA-19166在食管癌细胞株EC9706、TE-1、ECa10中均呈低表达,其中ECa10细胞、EC9706细胞中piRNA-19166低表达差异有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。本研究结果显示,piRNA-19166低表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有显著相关性(P <0.01)。结论 PiRNA-19166可能是一种新的食管癌肿瘤抑制基因,低表达的piRNA-19166促进了食管癌的发生、发展和转移。

大肠腺癌组织中环状核糖核酸92400的表达及临床病理意义

目的探讨环状核糖核酸92400(circ-92400)在大肠腺癌组织中的表达及临床病理意义。方法收集102例大肠腺癌组织标本及癌旁正常肠组织标本,应用RNA原位杂交技术检测circ-92400表达情况,并分析其与病理参数的关系。结果circ-92400在大肠腺癌组织中呈阳性表达,阳性率为77.45%(79/102)。circ-92400阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度有相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。circ-92400在大肠腺癌组织中的阳性细胞百分比为(58.00±13.00)%,高于癌旁正常肠组织的(11.00±3.00)%,差异有统计学意义(t=5.84,P<0.05)。结论大肠腺癌组织中circ-92400呈阳性表达,其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度密切相关,circ-92400或可作为大肠腺癌的新的肿瘤标志物。

肠炎沙门菌菌影的制备及其作为疫苗载体的特性分析

目的制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究。方法以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负载沙门菌菌影后转染小鼠巨噬细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测GFP的表达情况;用负载重组质粒pVAX1-NspA的沙门菌菌影经口灌胃免疫BALB/c小鼠,ELISA检测诱导抗体产生情况。结果重组菌诱导后的裂解效率达99%。沙门菌菌影负载pEGFP-N1转染小鼠巨噬细胞后可检测到GFP的表达。3次免疫两周后,负载重组质粒pVAX1-NspA沙门菌菌影免疫小鼠特异性血清IgG水平和黏膜IgA水平(A_(450)值)分别为0.60±0.05和0.53±0.06,负载pVAX1沙门菌菌影免疫组分别为0.32±0.07和0.22±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。结论制备的肠炎沙门菌菌影免疫能诱导特异性IgG和IgA抗体产生,可作为疫苗载体介导抗原的表达。

新型肠炎沙门菌菌影候选疫苗在小鼠免疫应答和保护功效的评估

目的比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法用SE-ghost接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平;流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌;三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs),流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC-MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC-CD86、PE-CD80表达量;双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。结果与PBS组相比,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高;脾脏CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后,SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比,BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ,高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。结论通过肌肉注射SE-ghost进行免疫,可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答,以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗。