荷兰生物医学专业硕士研究生的培养体系——以荷兰莱顿大学为例

研究生教育在国家人才培养体系中占有十分重要的位置。笔者在荷兰莱顿大学进行了两年的生物医学硕士专业的学习,通过介绍荷兰莱顿大学的入学申请与录取、分析课程体系设置和教学形式,并结合自身的感受与体会以及国内生物医学研究生培养的现状,提出单独设置生物医学研究生专业的重要性和必要性,并为今后国内高校培养生物医学专业研究生提供可以学习和借鉴的有益经验。

留学生医学生物化学课程建设的实践

扬州大学医学院已进行多年的留学生医学生物化学的课程建设,在教学过程中逐步摸索出一整套新的教学模式和教学体系,激发留学生的学习兴趣和主动性,提高理解和分析问题的能力。文章从课程体系、教学方式和考核细则等几方面进行探讨和总结,以期进一步提高教学质量及对教学改革起到积极的促进作用。

细胞生物学和生物化学教学内容的交叉与衔接探讨

细胞生物学和生物化学都是医学基础课程,两者在内容上相互交叉,相互渗透。针对两门课程在教学内容上的交叉与衔接进行分析,并提出教师应根据课程定位、教学安排、学生的接受能力等方面选择教学内容。

碳糊电极阳极伏安法测定秋水仙碱

在００５ｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ２ＳＯ４介质中，用碳糊电极（石墨粉：液体石蜡油＝１５∶１）阳极扫描伏安法测定秋水仙碱，检测限１×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１，检测线性范围４０×１０－７～１×１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１，氧化时出现两个氧化峰，峰电位分别为１０７Ｖ和１３３ＶｖｓＳＣＥ，峰电位随ｐＨ值升高而正移。对原料和片剂进行了测定，均获得满意的结果。

高灵敏度碳糊电极电位滴定和示波电位法滴定铁(Ⅲ)

对Fe3＋有超能斯特响应的碳糊电极（试剂石墨粉与液体石腊油混合）作指示电极，在pH＝2．0的盐酸溶液中，用EDTA电位滴定或示波电位滴定Fe3＋。碳糊电极对Fe3＋的电位响应斜率为110mV／decade，检测限5×10-8mol／L，可用EDTA准确滴定2×10－5mol／LFe3＋溶液。本方法简便、准确、灵敏度高。

TLR3激动剂对B细胞功能的影响

目的观察TLR3激动剂Poly I:C对B细胞功能的影响,包括细胞增殖、共刺激分子表达、细胞因子和抗体的分泌情况。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,RT-PCR法证实其表达TLR3。体外用Poly I:C刺激B细胞一定时间后,CFSE分裂法检测B细胞增殖,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表面共刺激分子表达,CBA(cytometric bead ar-ray)法或ELISA法检测培养上清中细胞因子含量,CBA法检测B细胞分泌Ig的亚型。结果 Poly I:C可以促进B细胞增殖,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHC II类分子的表达,促进IL-6和TNF-α的高分泌,诱导IgG1κ抗体的产生。结论 Poly I:C可以通过促进增殖、细胞因子分泌,诱导抗体产生和上调共刺激分子表达等多方面调节B细胞功能。

秋水仙碱在碳糊电极上的吸附伏安行为

秋水仙碱在硫酸溶液中加热水解制得分析试液。在０．０５ ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４底液中，用碳 糊电极吸附伏安法测定秋水仙碱，阳极峰电位为０．８２ Ｖ（ｖｓ．ＳＣＥ），峰电流与秋水仙碱的浓度 在１．０×１０－７～１．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ范围内呈良好线性关系。检测下限为５．０×１０－８ｍｏｌ／Ｌ，回 收范围为９５．０％～１０３．５％，ＲＳＤ为２．８％（ｎ＝１０）。本文对反应机理进行了初步探讨。

吸附／萃取伏安法石墨浸蜡电极测定奋乃静

石墨浸蜡电极阳极溶出伏安法测定磷酸盐缓冲体系中（ＰＨ７．５）的奋乃静，氧化电流与奋乃静浓度呈线性关系，检测范围１×１０－８～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ，检测限２×１０（－９）ｍｏｌ／Ｌ，有良好的重现性，对原料和片剂中的奋乃静进行了测定，均获得满意结果。

雨课堂作为形成性评价方法的应用实践

形成性评价注重对学习过程的评价,通过及时反馈能够起到促进学习的目的。积极开发和利用科学的形成性评价方法可极大提高医学教育效果。扬州大学医学院尝试利用雨课堂软件,对学生进行形成性评价,并覆盖教学活动全过程,收到了初步成效。问卷调查结果表明,雨课堂这种教学方式作为形成性评价方法,能够激发学生的学习兴趣,可以使教师动态掌握学生的学习情况,并帮助教师和学生及时调整教学和学习进程,是一种简便、高效的形成性评价方法,可为信息化时代高校培养医学人才和改革教学方法提供借鉴。

膜型IL-15联合RAE-1ε增强小鼠NK细胞的杀伤活性

目的:探讨视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE-1ε)和膜型IL-15对小鼠NK细胞杀伤功能的影响。方法:前期研究以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础构建了3株BaF3工程细胞株,即表达膜型IL-15的BaF3/mb15细胞、表达RAE-1ε的BaF3/RAE细胞和同时表达膜型IL-15和RAE-1ε的BaF3/mb15/RAE细胞。将γ射线灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别刺激小鼠NK细胞。流式细胞术检测刺激后NK细胞表面分子的表达,胞内染色法检测NK细胞穿孔素和颗粒酶B的分泌,流式细胞术检测NK细胞对小鼠淋巴瘤YAC1细胞的杀伤活性。结果:与BaF3/mb15和BaF3/RAE细胞相比,BaF3/mb15/RAE细胞可有效上调NK细胞表面CD25、CD44、FasL和CD107a的表达,但对穿孔素和颗粒酶B的分泌没有明显刺激作用。当效靶比为20:1时,BaF3/mb15、BaF3/RAE和BaF3/mb15/RAE细胞刺激后NK细胞对靶细胞YAC1的杀伤率分别为(39.7±2.9)%、(45.3±2.3)%和(59.0±6.9)%,均高于BaF3组的(28.3±1.5)%(P<0.01),且BaF3/mb15/RAE组高于BaF3/mb15和BaF3/RAE组(P<0.05)。结论:膜型IL-15联合RAE-1ε可促进NK细胞活化并增强NK细胞的杀伤活性。

反义RNA与肝癌的研究进展

反义RNA是一类能与特异性mRNA互补并从翻译、转录或转录后水平上高度特异地抑制靶基因表达的RNA分子。肝癌是全球最常见且致命的恶性肿瘤。肝癌组织的无限增殖、侵袭转移、放化疗耐受等能力成为其无法治愈并不断恶化的重要原因。反义RNA在肝癌肿瘤中异常表达,肿瘤的恶性表型维持需要众多反义RNA的参与。近年来,利用反义RNA技术治疗恶性肿瘤已经成为了一个新的研究方向,本文对这一技术治疗肝癌进行了综述。

秀丽线虫野生株系N2缺氧的荧光定量蛋白质组学研究

目的研究秀丽线虫野生株系N2缺氧时的差异蛋白质,为进行线虫在缺氧环境下的应答机制研究奠定基础。方法同步化培养N2株系的线虫,培养至L4期时物理缺氧10 h(0.2%O2)后,提取总蛋白,采用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)分离和串联质谱分析,搜索线虫数据库,鉴定蛋白种类并进行分析。并采用突变株系(prdx-2,prdx-3)进行了4、6、8、10、12 h的缺氧实验研究。结果质谱成功鉴定了其中的5个与对照有显著差异的蛋白质(ratio>2.0,P<0.05),包括2个上调(PRDX-2、PRDX-3)和3个(RPL-7、H28O16.1、VHA-12)下调的蛋白。突变株系的缺氧存活率实验进一步验证了蛋白质组学的结果,也显示了PRDX-2和PRDX-3在抗缺氧中起重要作用。结论蛋白质组学的方法为线虫缺氧的研究提供了有参考价值的数据,缺氧10 h后,线虫中变化的蛋白质与能量、翻译和抗氧化有关,为进一步研究缺氧时的应答机制奠定了基础。

医学生物化学实验教学改革探析

实验教学对学生能力和素质的培养有着关键的作用,为了培养新一代创新型医学人才,医学生化实验教学必须根据时代的发展不断地进行改革。结合本院生化实验教学实际,从更新教学内容、改进教学手段,引进虚拟实验和提高实验人员素质等方面进行初步探讨,提高实验教学水平与质量。

非能斯特响应离子选择电极示波电位法滴定Cu^(2+)

在0．1mol／LHac-NaAc-1．0mol／LNaClpH＝4．80缓冲体系中，用对Cu2＋具有非能斯特响应（响应斜率61mV／decade）的高选择性碳糊电极（不含电活性物质）作指示电极，EDTA为滴定剂，以示波电位法滴定Cu2＋。滴定曲线的理论值与实际值相符。等当点突跃大，电极制作简便，方法直观、准确。

mytoxin B和myrothecine A抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的分子机制

目的探讨mytoxin B和myrothecine A对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用及分子机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测细胞周期负调控蛋白p27蛋白的表达水平及细胞转染pSi-p27-469质粒(pSi-p27),以观察mytoxin B和myrothecine A是否通过调节p27蛋白表达影响SMMC-7721细胞的增殖。结果 mytoxin B和myrothecine A对SMMC-7721细胞增殖皆有较强的抑制作用,且myrothecine A呈现出明显的剂量依赖性;其增殖抑制作用与S期细胞周期阻滞有关。进一步研究发现,mytoxin B和myrothecine A皆可导致p27蛋白表达明显增加;而SMMC-7721细胞在转染pSip27 48 h后,p27蛋白的表达明显减少;同时,myrothecine A所致的细胞增殖抑制完全被阻断,而mytoxin B所致的细胞增殖抑制部分被逆转。结论 myrothecine A主要通过增加p27蛋白的表达而抑制SMMC-7721细胞增殖,而mytoxin B对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用除与上调p27蛋白表达有关外,可能还有其他相关作用机制。

整合蛋白β_1 shRNA表达质粒的构建及其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

目的应用RNAi技术,构建整合蛋白β1 shRNA表达质粒,诱导肝癌细胞中整合蛋白β1基因沉默,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。方法设计整合蛋白β1 shRNA序列,与载体pSilencer 2.0连接,构建整合蛋白β1 shRNA表达质粒。经测序鉴定后,转染肝癌细胞SMMC-7721,Western blot检测整合蛋白β1及p27的蛋白表达,MTT方法测定转染后细胞的增殖能力。结果成功构建了整合蛋白β1 shRNA表达质粒,转染肝癌细胞SMMC-7721后,整合蛋白β1的蛋白表达被明显抑制,p27的蛋白表达也随之减少。MTT实验结果发现转染细胞的增殖能力明显提高。结论应用RNAi技术,可特异性阻断整合蛋白β1的蛋白表达。整合蛋白β1可调节肝癌细胞的增殖,并可能与p27的表达相关。

人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定

构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性。根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长c DNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性。通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1;质粒和Lipo2000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加。本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑。