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人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
1
作者
陈琦
曹慧
+3 位作者
高哓飞
张海燕
王芬
李厚达
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期445-448,共4页
目的克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株。方法RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T...
目的克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株。方法RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T,并感染L929细胞,经Zeocin筛选获得的细胞株通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光鉴定细胞中B-CAM/Lu基因mRNA的转录和蛋白表达。结果成功获得人B-CAM/Lu基因,测序正确,亚克隆至逆转录病毒载体pEGZ后,经转染筛选,获得的抗性L929细胞株通过RT-PCR和Western blot分析,检测到B-CAM/Lu mRNA的转录和目的蛋白的表达,通过间接免疫荧光确定该蛋白定位表达在L929转基因细胞膜上。结论成功克隆并构建了人B-CAM/Lu基因的重组逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu蛋白的L929细胞株,为将其作为免疫源,制备B-CAM/Lu单抗用于镰刀型红细胞病及一些肿瘤疾病的检测诊断打下了基础。
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关键词
B-CAM/Lu
L929
表达
逆转录病毒载体
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职称材料
题名
人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
1
作者
陈琦
曹慧
高哓飞
张海燕
王芬
李厚达
机构
扬州大学
医学院
生理教研室
扬州大学医学院实验动物中心
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期445-448,共4页
基金
国家科技部中小企业技术创新基金项目(04C26223200112)
文摘
目的克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株。方法RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T,并感染L929细胞,经Zeocin筛选获得的细胞株通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光鉴定细胞中B-CAM/Lu基因mRNA的转录和蛋白表达。结果成功获得人B-CAM/Lu基因,测序正确,亚克隆至逆转录病毒载体pEGZ后,经转染筛选,获得的抗性L929细胞株通过RT-PCR和Western blot分析,检测到B-CAM/Lu mRNA的转录和目的蛋白的表达,通过间接免疫荧光确定该蛋白定位表达在L929转基因细胞膜上。结论成功克隆并构建了人B-CAM/Lu基因的重组逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu蛋白的L929细胞株,为将其作为免疫源,制备B-CAM/Lu单抗用于镰刀型红细胞病及一些肿瘤疾病的检测诊断打下了基础。
关键词
B-CAM/Lu
L929
表达
逆转录病毒载体
Keywords
B-CAM/Lu
L929
Expression
Retrovirus vector
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
陈琦
曹慧
高哓飞
张海燕
王芬
李厚达
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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