改革生化实验教学,提高学生综合能力

实验教学是生物化学教学中的重要组成部分，随着学科知识的发展与更新，如何提高生化实验教学质量是生化教育工作者面临的重要课题。扬州大学医学院生化教研室在实验内容、开设方式、教学手段、考核方法等几方面进行了生化实验的教学改革，为提高医学院校生化实验教学质量进行了初步探索。

医学留学生生物化学的教学体会

留学生教育不仅是我国加强教育文化对外合作交流的需要，也是高等教育国际化的重要组成部分。对印度留学生的生物化学理论及实验教学进行总结，从教学前准备、课堂教学及考核等方面提出一些体会。

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯(HTG)血清致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HUVEC,终浓度为100 mg.L-1、200 mg.L-1、400 mg.L-1的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育16 h,通过检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内活性氧(ROS)水平的变化,观察SSTF的保护作用,并通过RT-PCR法检测NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA表达,Western blot法检测NOX4蛋白表达。结果各浓度组的SSTF均可明显升高HTG氧化损伤的HUVEC的SOD活性,明显降低MDA含量,减少HUVEC内ROS水平,下调NOX4mRNA表达和蛋白表达(P<0.01)。结论 SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤具有保护作用,其可能通过抑制NADPH氧化酶表达进而减少ROS的生成来发挥它的抗氧化作用。

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

胸腔积液淀粉酶及其同工酶检测在鉴别良恶性胸腔积液性质中的诊断价值

目的探讨胸腔积液淀粉酶及其同工酶含量测定在良、恶性胸腔积液鉴别中的应用价值。方法将所有病例分为良性积液组(142例)和恶性积液组(80例)。分别检测222例胸腔积液总淀粉酶及其同工酶活力并对检测结果进行统计学处理(t检验)。结果①恶性积液组胸腔积液总淀粉酶及唾液型淀粉酶(S-AMY)含量明显高于良性积液组(P<0.001),提示胸腔积液淀粉酶及其同工酶测定有利于胸腔积液性质的鉴别;②肺癌所致胸腔积液,其胸腔积液淀粉酶及唾液型淀粉酶(S-AMY)含量明显高于食管癌和其它恶性肿瘤所致胸腔积液(P<0.001),说明胸腔积液总淀粉酶及唾液型淀粉酶(S-AMY)升高主要见于肺癌胸膜腔转移;③肺癌所致胸腔积液中,胸腔积液总淀粉酶及唾液型淀粉酶(S-AMY)活力由高到低依次为腺癌、未分化癌、鳞癌。结论胸腔积液淀粉酶及其同工酶含量是判断恶性胸腔积液特别是肺癌所致胸腔积液的一个较好指标。

阳离子脂质体转染人类骨骼肌原代细胞的初步研究

探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达。将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率。结果发现,Fugene 6转染效率最高,蓝染细胞达10%,其脂质体与DNA的最佳比例为3∶2。Fugene 6可有效地将外源基因导入骨骼肌原代细胞,而且外源基因可以长效高效地表达,有望用来作为基因治疗的载体。

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(英文)

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。

过表达环状RNA泛素连接酶E3(circHERC4/hsa_circ_0007113)抑制细胞衰老的研究

目的研究泛素连接酶E3的环状RNA(circHERC4/hsa_circ_0007113)与人胚肺成纤维细胞(IMR-90)的衰老的关系。方法从circBase数据库上获得环状RNA circHERC4的全基因序列,将其克隆到环状RNA表达载体pLC5-ciR中,体外构建重组体pLC5-ciR(+)hsa_circ_0007113,经PCR、酶切、测序等对重组质粒进行鉴定。利用脂质体2000转染试剂将重组质粒转染到HEK293T和IMR90细胞中,并利用RT-PCR检测正常细胞组、空载体组及重组载体组中环状RNA circHERC4的表达情况;SA-β-gal染色检测各组细胞衰老情况;CCK-8法检测各组细胞增殖情况。结果测序正确,成功构建了环状RNA circHERC4的过表达载体,circHERC4可在HEK293T细胞中高效表达。与对照组相比,重组载体组的SA-β-gal染色阳性率降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05)。过表达circHERC4后能提高IMR90细胞的增殖,抑制细胞的衰老。结论circHERC4具有潜在的抗衰老作用,为深入研究circHERC4的功能奠定了基础。

实时定量PCR法在肝癌细胞β_2 M mRNA检测中的应用

目的探讨实时定量PCR法检测肝癌细胞β2微球蛋白(β2M)mRNA的应用价值。方法采用2-ΔΔCT定量PCR法检测肝癌SMMC 7721细胞株β2M mRNA表达水平。结果预实验确定目的基因(β2M)和内参基因(β-actin)的扩增效率较为一致。肝癌细胞中β2M基因表达水平明显低于正常肝细胞株L02(P<0.05)。结论2-ΔΔCT定量PCR法为定量检测肝癌细胞β2M基因的较好方法;可用于β2M在肝癌细胞中表达调控的研究。

髋关节腔、股骨颈髓腔自体骨髓移植药液灌注并中医药治疗在股骨头坏死术后的临床应用(附17例报告)

目的：髋关节腔、股骨颈髓腔自体骨髓移植药液灌注并中医药治疗在股骨头坏死术后的临床应用，探索力学刺激的影响。方法：自2005年～2011年采用开放和微创术式治疗股骨头缺血性坏死患者17例（23髋），年龄19～60岁，平均22．4岁，ARCO分期为ⅠA 期3例，ⅡA 期8例，ⅡC 期3例，ⅢA期3例。全部病例均行自体骨髓移植并药液局部灌注在血管束植入、骨移植及微创术后的应用，术后随访1～7年，根据手术前后Harris评分变化，X线影像学表现随访观察。结果：术后患者Harris评分变化均提高35．71分（平均术前56．29分，术后92分），影像学表现17例保持稳定。结论：自体骨髓移植药液局部灌注并中药治疗在股骨头缺血性坏死术后的应用，操作简单，取材方便，无排异反应。术后恢复快，力学刺激对成骨、成软骨、新生血管形成有一定促进作用。

含有成对皮质酮激素反应元件的基因在小鼠组织内的表达分析与验证

目的验证基于生物信息学的方法发现含有成对皮质酮激素反应元件(GREs)的皮质酮激素作用新基因。方法应用程序"NURD-finder2",从小鼠36 000个基因中筛选出含有成对GREs的88个基因,并选取了10个基因进行动物体内实验来验证。对小鼠(C57BL/6)的14种不同组织进行33P末端标记的原位杂交,用Image J软件分析。结果 10个所检测基因至少在一种组织中表达,而且发现脾脏对皮质酮激素急性应激有强反应;6个所测基因的mRNA水平在激素处理后有显著提高(P<0.05),其中质膜微囊蛋白家族-1(caveolin-1)在肺部有明显上调(P<0.05),生理上具有较强反应,其GRE序列与大鼠和人类的cav-1基因有较高同源性。结论验证了"NURD-finder2"发现新的含有成对GREs的皮质酮激素反应基因,这些基因具有组织特异性,可能在生理平衡的过程中具有重要作用。

葛根素对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜的保护作用及机制研究

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及可能机制。方法 40只♂SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病(DM)模型组、DM+葛根素低剂量组(Pue1组)、DM+葛根素高剂量组(Pue2组)。给药后4周,行视网膜组织病理学检查,荧光法检测视网膜晚期糖基化终末产物(ad-vanced glycation end products,AGEs)含量、Real-time PCR法、Western blot法分别检测视网膜组织晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mR-NA表达和蛋白水平。结果 DM组视网膜外核层细胞厚度明显变薄,Pue2组较DM组有所好转。DM大鼠视网膜中VEGF的mRNA和蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01);Pue1、Pue2组VEGF的mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.01)。DM大鼠视网膜内AGEs水平较正常对照组明显上调(P<0.05),高剂量葛根素能抑制AGEs形成(P<0.05)。RT-PCR与Western blot结果显示,DM大鼠视网膜中RAGE的mRNA水平和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.05),高剂量葛根素可使之下调(P<0.05)。结论葛根素可抑制DM大鼠视网膜AGEs形成及RAGE的表达,抑制视网膜VEGF的表达,起到保护糖尿病大鼠视网膜的作用。

糖尿病大鼠视网膜氧化应激损伤及葛根素的干预作用

目的研究糖尿病大鼠视网膜氧化应激指标的变化及葛根素对其的干预作用。方法 40只清结级雄性SD大鼠,其中构建糖尿病大鼠模型30只,随机分为糖尿病模型组、葛根素低剂量组和葛根素高剂量组,每组10只;另设一正常对照组(10只鼠)。造模成功后,葛根素低剂量组与葛根素高剂量组分别给予葛根素250mg·kg-1·d-1和500mg·kg-1·d-1,正常对照组与糖尿病模型组每日给予3mL灭菌生理盐水。均经食道灌胃给药,每日1次,连续4周。4周后测定各组鼠血清及视网膜中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capability,T-AOC)的变化,免疫组织化学法检测视网膜组织8-羟-2'-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]活性,Western blot法检测p38MAPK蛋白表达。结果造模后4周,与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血清与视网膜组织中SOD活性明显下降,分别为(83.20±5.51)U·mL-1、(122.96±10.98)U·mg-1;MDA含量显著增高,分别为(29.58±0.41)μmol·L-1、(8.87±0.49)μmol·g-1;视网膜中T-AOC含量明显下降,为(1.72±0.31)U·mg-1(均为P<0.05)。gn糖尿病模型组相比,葛根素低剂量组血清SOD活性升高,为(97.80±1.75)U·mL-1(P<0.05),但其他指标变化不大(均为P>0.05)。与糖尿病模型组相比,葛根素高剂量组血清与视网膜组织中SOD活性升高,分别为(114.17±4.02)U·mL-1、(146.48±8.04)U·mg-1;视网膜TAOC含量升高,为(2.12±0.37)U·mg-1;血清和视网膜MDA含量降低,分别为(20.73±1.51)μmol·L-1、(5.73±0.76)μmol·g-1(均为P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜中8-OHdG、PARP阳性细胞极少,糖尿病模型组表达较正常对照组明显增加,葛根素干预后表达明显减弱,葛根素高剂量组作用更显著。Western blot结果显示:各组大鼠视网膜中总p38MAPK表达无明显差异(P>0.05),但糖尿病模型组视网膜p38MAPK的磷酸化程度较正常对照组显著增强,高剂量葛根素干预后p38MAPK的磷酸化程度明显下降(P<0.05)。结论糖尿病大鼠存在视网膜的氧化应激损伤,葛根素可减轻该损伤作用,其机制可能与p38MAPK信号途径有关。

硬膜外阻滞治愈截瘫致剧烈下肢疼痛一例

目的探讨硬膜外阻滞治疗截瘫致剧烈下肢疼痛的可行性。方法患者5年前因车祸致腰痛,后逐渐出现右下肢麻木、疼痛、时有抽动。继而出现双下肢无力、活动受限、知觉减退、大小便失禁。双下肢阵发肌力0级,肌张力消失,肌萎缩,双趾关节呈屈曲畸形,双膝关节呈过伸畸形,双下肢腱反射消失,轻微刺激即出现右下肢阵发性抽动、剧痛,持续约30 s。影像学检查见腰段脊柱前后内固定物,行硬膜外置管阻滞术。结果硬膜外置管阻滞术后患者完全控制右下肢抽动、疼痛,精神明显好转出院。随访42个月,未复发。结论硬膜外阻滞镇痛是镇痛技术的一大进步,对解决某些棘手疼痛问题有独到之处,不仅简便、经济、实用,还十分安全。

多发性胸腰椎结核术后不全瘫一例

1病例资料男,44岁。因胸背部疼痛1年,跛行、双腿麻木2个月,加重20 d入院。患者1年前因乘摩托车摔伤后出现胸背部疼痛,并逐渐出现驼背、咳嗽,无咳痰、咯血,时有午后及夜间潮热盗汗,曾在多家医院就诊(具体诊治不详),未好转。入院前2个月出现跛行、双腿麻木并逐渐加重,扶双拐行走。

4种带蒂组织瓣移植术在髋部疾患中的应用

目的观察4种带蒂组织瓣移植术治疗髋部疾患的疗效。方法自2000-02-2011-12对23例股骨头缺血性坏死(ANFH),12例青壮年股骨颈骨折,2例髋臼发育不良,2例髋关节结核伴感染,1例化脓性髂骨骨髓炎,采用带缝匠肌蒂髂骨瓣+带旋髂深血管束或加带蒂旋股外侧动脉升支血管束植入治疗,或采用阔筋膜张肌胫骨骨膜逆行翻转包绕行病灶清除后重建头臼功能;应用带缝匠肌蒂髂骨瓣移位术修复化脓性髂骨骨髓炎清除后的骨缺失。结果 ANFH 23例术后经14~93个月的随访,Harris评分从术前的50.3分上升到术后的95.0分,术后优良率为95.6%。功能恢复正常,生活自理,参加日常活动。股骨颈骨折12例术后获得随访,随访的4~10年未发生ANFH,功能正常。其余患者恢复尚可。结论缝匠肌蒂髂骨瓣移植,带旋髂深血管束或带蒂股外侧动脉升支血管束植入,阔筋膜张肌胫骨骨膜逆行移植重建头臼术在治疗ANFH、青壮年股骨颈骨折、髋部的结核及化脓性疾病中能有效改善股骨头血运,促进新骨形成,骨膜、筋膜的软骨样化生重建头臼功能,防止或延缓股骨头塌陷,控制结核复发及化脓感染病灶,获满意疗效。