组织胚胎学理论课研究性教学的实践与思考

研究性教学是一种旨在培养创新人才的新型教学模式。根据学科特点,在组织胚胎学理论课教学过程中开展了研究性教学的尝试,并对这种教学模式的效果进行了探讨。

硒对AOM所致结肠癌模型大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的影响

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致结肠癌模型大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的变化。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分4组:正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组和致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周取大鼠肾上腺,用组织化学的方法,观察大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的变化,对脂类、琥珀酸脱氢酶(SDH)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)进行染色,并图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrant crypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。组织化学显示,与正常对照组相比,实验对照组大鼠肾上腺皮质束状带细胞的SDH和3β-HSD的MOD值明显增加(P<0.05),脂类的MOD值明显减少(P<0.05);硒干预的各组与实验对照组相比,大鼠肾上腺皮质束状带细胞的SDH和3β-HSD的MOD值均有增加,脂类的MOD值减少,其中致癌剂后补硒组SDH和3β-HSD的MOD值增加有统计意义(P<0.05)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中肾上腺皮质束状带细胞的功能。

AOM所致大鼠结肠癌形成过程中脑垂体远侧部TSH阳性细胞免疫组织化学观察

目的:观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)细胞的免疫组织化学变化并初探其意义。方法:用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组和对照组。实验组用AOM(15 mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。分别于实验第10,30,34周取材,用免疫组织化学、图像分析法观察大鼠实验性结肠癌形成过程中,脑垂体远侧部TSH阳性细胞的变化。结果:亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrantcrypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。免疫组织化学显示,与同期正常对照组相比,实验组大鼠垂体远侧部TSH阳性细胞阳性反应显著性减弱(P<0.05)。结论:在大鼠实验性结肠癌形成过程中,脑垂体远侧部TSH细胞变化可能与机体肿瘤的发生有关。

从小鼠胚胎干细胞文库中筛选PIASx相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与PIASx相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了6种与PIASx相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到了6种不同的基因,其编码蛋白与PIASx相互作用,可能与小鼠胚胎干细胞的增殖与分化相关。对PIASx相互作用蛋白的筛选有助于揭示PIASx在胚胎干细胞中的作用机制。

AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞免疫组织化学观察

目的观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部ACTH细胞的免疫组织化学变化并探讨其意义。方法用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组和盐水对照组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。分别于实验第10、30、34周取材,用免疫组织化学、图像分析法观察大鼠实验性结肠癌形成过程中脑垂体远侧部ACTH阳性细胞的变化。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrant crypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。免疫组织化学显示,与同期正常对照组相比,对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞阳性反应显著性增强(P<0.01)。结论在大鼠实验性结肠癌形成过程中脑垂体远侧部ACTH细胞可能参与了机体抗肿瘤的内分泌调节。

白细胞介素-8在着床前后小鼠子宫内膜及胚胎的定位研究

目的:研究着床前后小鼠子宫内膜及胚胎白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的定位变化。方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8在妊娠4d和妊娠8d小鼠子宫内膜及胚胎的表达部位。结果:妊娠4d(着床前),IL-8主要表达在子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达。妊娠8d(着床后),子宫内膜的腔上皮IL-8表达呈阴性,腺上皮和蜕膜细胞均呈弱阳性;胚胎IL-8表达呈阴性。结论:IL-8可能参与胚泡着床的过程,但与胚胎分化、发育无密切关系。

线粒体DNA与人精子活力间的相关性分析

目的 探讨线粒体 DNA与人精子活力间的关系。 方法 用长链 PCR技术 ,对 6 0例精子活力正常和 40例精子活力异常不育患者的精子线粒体 DNA(mt DNA)进行了多重缺失的分析。 结果 两组不育患者中共有 8例具有 m t DNA的多重缺失 (其中精子活力正常不育患者 6名 ,精子活力异常不育患者 2名 ) ,但缺失型 mt D-NA(S5除外 )在总 mt DNA中所占比例很小 (0 .16 %～ 1.85 % ) ,1例精子活力正常的不育患者 (S5 )具有 2 .6 kb的缺失型 mt DNA,且缺失型 mt DNA占总 m t DNA的 91.0 2 % ,其序列分析发现 mt DNA编码区域大部分缺失。 结论 精子活力与 mt DNA的多重缺失间无相关性。

应用酵母双杂交系统筛选小鼠PIAS2相互作用蛋白

目的:应用酵母双杂交技术,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选与PIAS2(protein inhibitor of activatedSTAT2,PIAS2)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIAS2在精子发生中的作用机制,为临床男性不育症的治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-PIAS2为诱饵质粒,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选出与pGBKT7-PIAS2相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果:经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了与PIAS2相互作用的8个候选蛋白:Cyfip2、Psmb3、Nme1、nischarin、Nsun5、Ints10、Gnb2l1及Ndufaf3。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到了8个不同的基因,其编码蛋白与PIAS2相互作用,可能与男性生殖调控相关。对上述蛋白与PIAS2的相互作用研究有助于揭示PIAS2的作用机制。

小鼠Stra8相互作用蛋白的筛选

目的采用酵母双杂交法,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与Stra8(stimulated by retinoic acid8,Stra8)相互作用的蛋白。通过对相互作用蛋白的筛选和研究,探讨Stra8在胚胎干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-Stra8为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与Stra8相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了Setd6及DEK 2种与Stra8相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,筛选得到了与Stra8相互作用的蛋白Setd6及DEK,它们可能与Stra8一起调控胚胎干细胞的增殖与分化,对Stra8相互作用蛋白的筛选有助于揭示其在胚胎干细胞中的作用机制。

人RUVBL2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法:以pGADT7-RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒瞬时转染HeLa细胞系,应用荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western blot法检测RUVBL2-GFP融合蛋白的表达。结果:经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N1-RUVBL2载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的HeLa细胞中有绿色荧光蛋白的表达,Western blot法证实转染细胞中能表达RUVBL2-GFP融合蛋白。结论:pEGFP-N1-RU-VBL2表达载体构建成功,并在HeLa细胞内成功表达。

人NYD-SP28基因原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用。方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-NYD-SP28。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导原核蛋白的表达,纯化蛋白以免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体的滴度。结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,并在BL21菌中表达NYD-SP28原核蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到NYD-SP28原核蛋白。用纯化的NYD-SP28蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度达到1/10万。结论:成功构建人NYD-SP28原核表达载体,并获得了高纯度的NYD-SP28蛋白及鼠抗NYD-SP28多克隆抗体,为进一步研究NYD-SP28的功能奠定了基础。

硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促肾上腺皮质激素阳性细胞的影响

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周后取大鼠垂体,用免疫组织化学SP法,观察垂体远侧部ACTH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(AC)和异常隐窝灶(ACF)。免疫组织化学法显示,实验对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞与正常对照组比较,阳性反应显著性增强(P<0.01);硒干预的各组与实验对照组相比,ACTH阳性细胞的阳性反应进一步增强(P<0.01)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞的功能。

“病理学”线上线下混合教学模式的探讨和思考

2020年特殊时期,高校纷纷开展线上教学。“线下教学线上化”这一不得已而为之的应急举措暴露了一些问题。如何充分利用好线上教学的契机,深化“病理学”教学改革,该文在特殊时期线上教学的启示下,结合作者参与美国加州大学DAVIS分校医学基础课程的学习体会,在“病理学”教学中,实施线上线下混合教学模式,探索推进“以学生为中心”“以胜任力为导向”的“病理”教学改革,改进学生的学、教师的教和评,提升“病理学”教学质量,培养高素质医学人才。

CXCR2在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达

目的研究CXCR2在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达情况。方法应用免疫组织化学和图像分析技术,观察CXCR2在妊娠1d、4d、5d、6d小鼠子宫内膜的表达部位及蛋白水平的变化规律;HE染色后光镜下观察子宫内膜的形态学变化。结果免疫组化染色结果显示:在子宫内膜腔上皮,CXCR2于妊娠4d表达最强,妊娠5d开始逐渐下降,妊娠6d降至妊娠1d水平;在子宫内膜腺上皮和基质,CXCR2的表达水平随妊娠天数的增加而逐渐升高。HE染色可见妊娠1d子宫内膜腔上皮和基质中有大量中性粒细胞浸润;妊娠4d腔上皮中未见中性粒细胞,基质中则有大量中性粒细胞浸润;妊娠5d和妊娠6d腔上皮中未见中性粒细胞,基质中中性粒细胞数量甚少。结论CXCR2可能通过与其配体白细胞介素-8结合而参与小鼠胚泡着床过程。

PIAS-NY酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活活性分析

目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。

活化的蛋白激酶C受体1真核表达载体的构建与鉴定

目的:构建活化的激酶C受体1(RACK1)WD1-4真核表达载体,通过细胞转染和Western blot鉴定其是否在细胞中表达。方法:应用PCR法扩增RACK1蛋白中第1～4个WD40区域的片段,将其与PGEM-T载体连接,测序后再将其克隆至pEGFP-N1中。采用脂质体法将重组质粒转染至293T细胞中,观察其在真核细胞中的表达,并用Western blot法进行鉴定。结果:pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒经酶切鉴定及测序证实,目的基因的序列完全正确。荧光显微镜观察发现,转染了重组质粒的细胞株可见绿色荧光融合蛋白的表达,Western blot结果进一步证实了上述结果。结论:成功构建pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒且进行了真核表达,为下一步研究RACK1蛋白的功能奠定了基础。

硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促甲状腺激素阳性细胞的影响

目的:观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部促甲状腺激素(TSH)阳性细胞的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照、实验对照、致癌剂前补硒和致癌剂后补硒组。34周取垂体,用免疫组织化学SP法和SAP法,观察其远侧部TSH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果:亚甲蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝和异常隐窝灶。免疫组织化学显示,与正常对照组相比,实验对照组TSH阳性细胞反应显著减弱;硒干预各组与实验对照组相比,TSH阳性细胞的阳性反应进一步减弱。结论:硒参与了AOM所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部TSH阳性细胞功能变化的调节。

人睾丸酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

目的:构建应用于酵母双杂交系统的人睾丸组织cDNA文库。方法:从正常人睾丸组织总RNA中纯化出mRNA,以SMARTШTM和CDSШ为引物,合成两端具有同源臂的双链cDNA,后者与线性质粒pGADT7-Rec共转化入感受态酵母细胞Y187,两者在酵母细胞中同源重组成环形的cDNA文库质粒,收集在营养缺陷培养板上筛选出的所有克隆,即为人睾丸酵母双杂交cDNA文库。结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人睾丸cDNA文库,共获得2×106个转化子,插入的双链cDNA片段的长度在0.3～4.0 kb之间。结论:利用ClontechSMART技术,成功构建了应用于酵母双杂交的人睾丸组织cDNA文库,为探讨人精子发生的分子机制奠定了基础。

Stra8酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活活性分析

目的构建小鼠Stra8的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与Stra8相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR扩增Stra8编码序列的不同长度片段,将其先克隆入pGBKT7载体内,经序列测定确认无误后,将构建好的系列诱饵载体pGBKT7-Stra8转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了Stra8的诱饵载体共8种,经过自激活活性的分析发现,其中7种诱饵载体均具有自激活活性,仅有一种诱饵载体没有自激活活性,可用于后续的酵母双杂交筛选实验。结论成功构建了Stra8的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供实验基础。

着床前小鼠子宫内膜及胚泡中IL-8RB蛋白的定位表达及意义

目的:研究着床前小鼠子宫内膜及胚泡中白细胞介素-8B型受体(Interleukin-8 receptor B,IL-8RB)的 表达情况。方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8RB蛋白在妊娠4d小鼠子宫内膜及胚泡的表达部位;HE染色后光 镜下观察子宫内膜的形态结构特点。结果:IL-8RB表达于妊娠4d小鼠子宫内膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质中; 胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达。HE染色可见妊娠4d基质中有大量中性粒细胞浸润,而腔上皮中未见中 性粒细胞。结论:IL-8RB可能通过与其配体IL-8结合而参与胚泡滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞之间的相互作用。