扬州地区应用串联质谱技术进行新生儿遗传代谢病筛查的临床价值

目的探讨串联质谱技术在扬州地区新生儿遗传代谢病筛查中的临床意义。方法采用串联质谱技术对扬州地区2017年7月—2019年12月的新生儿进行遗传代谢病筛查,并对筛查结果为可疑阳性的新生儿进行基因检测。结果共纳入新生儿25771例。其中,初筛阳性435例,召回394例,确诊17例。在17例确诊患儿中,氨基酸代谢病10例、有机酸代谢病3例及脂肪酸氧化代谢病4例,死亡3例。结论串联质谱技术在新生儿氨基酸代谢病、有机酸代谢病及脂肪酸氧化代谢病筛查中的广泛应用,对新生儿遗传代谢病的早期筛查、诊断及治疗具有重要意义。

10313例新生儿听力与耳聋易感基因联合筛查结果分析

目的 对扬州地区10 313例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查,探讨该地区常见耳聋基因突变位点分布及联合筛查的意义。方法 对2018年3月至2020年12月在扬州市妇幼保健院出生的10 313例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查。听力筛查包括耳声发射和自动听性脑干反应;耳聋易感基因检测采用PCR导流杂交法,检测4个常见耳聋易感基因的13个位点,包括GJB2基因(c.35delG,c.176del16,c.235delC,c.299delAT,c.155delTCTG),SLC26A4基因(c.2168A>G,c.919-2A>G,c.1229C>T),GJB3基因(c.538C>T),线粒体12SrRNA(m.1555A>G,m.1494C>T)和线粒体tRNA(m.7445A>G,m.12201T>C)。应用Sanger测序对单个位点基因筛查阳性的听力损失患儿进行验证。结果 10 313例新生儿中听力初筛通过率为87.26%,复筛为81.61%,检出听力损失者38例。共检出耳聋基因突变577例,携带率为5.59%,GJB2、SLC26A4、GJB3和12SrRNA基因的检出率分别为3.03%、1.89%、0.24%和0.32%。联合筛查发现耳聋易感基因突变组听力损失发生率(2.77%)明显高于阴性组(0.23%)。结论 突变位点GJB2 c.235delC和SLC26A4 c.919-2A>G是扬州地区新生儿耳聋易感基因的主要突变类型。大规模开展听力与耳聋易感基因联合筛查提高了新生儿聋病或高危聋儿的检出率,有利于聋病的防治和干预。

扬州地区1876例孕妇羊水细胞染色体核型分析

目的分析妊娠中期不同产前诊断指征与胎儿染色体异常的关系,探讨羊水细胞染色体在产前诊断中的作用。方法选取2015年1月-2016年12月扬州大学医学院附属医院收治的1 876例具有不同产前诊断指征的孕妇为研究对象,对其进行羊膜腔穿刺术,抽取20 ml羊水进行细胞培养,采用细胞遗传学方法对羊水细胞G显带进行染色体核型分析。结果 1 876例羊水标本中,培养成功1 872例,成功率为99.79%;检出染色体异常核型86例,异常率为4.59%。异常核型中,常染色体异常54例(62.79%),性染色体异常8例(9.30%),其他结构异常24例(27.91%)。结论对具有不同产前诊断指征的孕妇,进行羊膜腔穿刺术和羊水细胞染色体核型分析是产前诊断的重要手段,可以有效地降低缺陷儿的出生,对于优生优育具有重要的意义。

1个X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系的TRAPPC2基因突变分析

目的确定1个迟发性脊椎骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDT)家系的致病基因。方法收集先证者及家系的临床资料,提取先证者及亲属外周血DNA,用高通量测序技术对先证者的COL2A1、COL1A1、MATN3、TRAPPC2、FGFR3等189个骨骼相关基因的外显子编码区测序,对发现的致病突变进行Sanger测序验证,并对家系其他成员进行该突变的检测。结果在先证者TRAPPC2基因第5外显子上发现了1个移码突变c.271_275del CAAGA半合子缺失,为X-SEDT的致病性突变,同时发现患者母亲为该突变的携带者,而患者父亲和妹妹未检测到该突变。结论用靶向二代测序和Sanger测序结合的方法确定了1个X-SEDT家系的移码突变c.271_275del CAAGA半合子缺失,为临床遗传咨询提供了分子依据。

产前超声表现与胎儿染色体异常的关系分析

目的探讨产前超声表现与胎儿染色体异常的关系,并根据超声检查结果为合理实施侵袭性产前诊断技术提供依据。方法回顾性分析进行羊水细胞染色体检查的7908例孕妇的产前超声表现,其中292例羊水细胞染色体检查异常,了解其超声征象与染色体疾病类型的关系。结果292例羊水细胞染色体检查异常患者中,同时存在产前超声异常82例(28.08%),其中超声软指标异常59例(20.21%),结构畸形12例(4.11%),合并指征11例(3.77%)。结论超声检查的软指标和结构异常可为羊水染色体检查提供有力证据,提高产前侵入性诊断的准确性,减少和避免漏诊。

一个先天性手足裂畸形家系的遗传学分析

目的对1个先天性手足裂畸形家系进行遗传学分析,以鉴定致病性变异。方法提取先证者及家系中其他患者的基因组DNA,应用染色体微阵列技术对患者进行全基因组拷贝数变异分析。结果染色体微阵列分析显示先证者和另外3例患者存在染色体10q24.31-q24.32区域约400 kb的片段重复变异,该重复区域包含完整的LBX1、BTRC、POLL及DPCD基因,并含有FBXW4基因的部分外显子。结论染色体10q24.31-q24.32区域的重复与该家系患者疾病表型共分离,基因组拷贝数变异为患者的致病原因。

眼皮肤白化病一家系基因突变分析

目的 利用靶向二代测序技术对1个眼皮肤白化病家系进行基因突变分析。方法 收集1个眼皮肤白化病家系的临床资料，提取先证者及其父母外周血DNA。通过高通量测序技术，对先证者TYR、OCA2、TYRP1、SLC45A2等29个基因的外显子编码区进行直接测序，寻找可能存在的基因突变。以Sanger测序技术检测先证者父母的相应基因位点。结果 先证者TYR基因检测到2个杂合突变，分别是c.534G 〉 C（p.Trp178Cys）和c.1147G 〉 A（p.Asp383Asn）。其中c.534G 〉 C突变为新发突变，c.1147G 〉 A突变为已知致病突变。先证者父母TYR基因突变检测结果证实，先证者的c.534G 〉 C突变来自父亲，c.1147G 〉 A突变来自母亲。结论 应用靶向二代测序技术为一个眼皮肤白化病家系确定了TYR基因致病性新突变c.534G 〉 C。

一个迟发性耳聋家系的DFNA5基因变异分析

目的确定1个常染色体显性遗传性迟发性非综合征性耳聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)家系的致病变异。方法收集先证者及其家系成员的临床资料,采集其外周血样,提取基因组DNA,应用核心家系全外显子组测序对先证者及其父母19396个基因的编码区及侧翼序列进行测序,寻找可能的致病变异。用Sanger测序法验证候选变异并对家系其他成员进行检测。结果发现先证者DFNA5基因第8内含子存在1个单碱基缺失杂合变异(c.1183+1delG p.?),该变异为父源性。结论应用核心家系全外显子组测序确定了1个迟发性NSHL家系的致病变异,为遗传咨询提供了依据。

荧光定量聚合酶链式反应在羊水快速产前诊断中的应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链式反应(QF-PCR)在快速产前诊断中的临床应用价值.方法 应用QF-PCR技术对2018年5月7日至2019年5月7日于扬州市妇幼保健院产前诊断中心行产前诊断的1 190例产前羊水样本进行13、18、21、X及Y的非整倍体产前诊断并与核型分析结果对比.结果 1 190例羊水QF-PCR共诊断出33例各种染色体异常,包括21-三体20例;18-三体4例及性染色体异常9例.结论 作为常见的快速诊断方法,QF-PCR诊断结果快速、准确,但还不能完全代替传统的核型分析.

一个无先证者标本的Lesch-Nyhan综合征家系的HPRT1基因变异分析及产前诊断

目的分析一个无先证者标本的Lesch-Nyhan综合征(Lesch-Nyhan syndrome,LNS)家系的HPRT1基因变异为其提供产前诊断。方法该家系中所有的男性患儿均于童年夭折,无法获得任何生物学标本。根据患儿典型的神经系统功能障碍和自残倾向,推断其患有LNS。用Sanger测序对家系中的女性成员进行HPRT1基因变异分析。针对该致病变异位点,对高危胎儿进行产前基因诊断。结果先证者母亲及其他3位女性成员均携带HPRT1基因的c.500_501delGGinsC(p.Arg167fs*23)杂合致病变异,既往未见报道。产前诊断结果显示胎儿为男性,并携带上述致病变异。结论通过Sanger测序确定了一个无先证者标本的LNS家系的HPRT1基因致病变异,为其遗传咨询和产前诊断提供了依据。

基于高通量测序的无创产前诊断研究

目的应用高通量测序技术对胎儿染色体非整倍体进行无创产前诊断。方法对2014年8月~2015年5月之间在扬州市妇幼保健医院产前诊断中心就诊的2124例孕妇外周血浆中的游离胎儿DNA进行Hiseq 2000测序,对检测结果为染色体非整倍体高风险的,用羊水细胞染色体核型分析验证。对无创产前染色体非整倍体诊断进行敏感性和特异性分析,对年龄与染色体非整倍体发生与孕妇年龄的关系进行logistic回归分析。结果共检出染色体异常16例,其中21-三体7例,18-三体1例,XO型1例,XXX 2例,XXY 3例,XYY 2例。羊水细胞核型分析验证9例,其中21-三体5例,18-三体1例,XO型1例,XXX 0例,XXY 2例,XYY 0例;高通量测序无创产前诊断染色体非整倍体的敏感性为100%,特异性为99.34%;logistic回归结果显示孕妇年龄与胎儿染色体非整倍体发生率的关系不显著(P >0.05),T21,T18,XO,XXY发病率与产妇年龄逻辑回归P值均大于0.05。结论基于高通量测序和母体血浆游离胎儿DNA进行无创产前然色体非整倍体检测具有无创性、敏感性高、特异性高的特点,具有较高的临床应用价值。Logistic回归分析显示,孕妇年龄与胎儿非整倍体发生率并无显著性关系。