紫云英苷对SD大鼠心肌细胞瞬时外向钾通道电流的影响

为探究紫云英苷(astragalin,AG)对心肌细胞瞬时外向钾通道电流Ito的作用,用langendorff主动脉逆向灌流法急性分离出单个SD大鼠心肌细胞,进行全细胞膜片钳试验,记录给药前后Ito的变化及激活、失活和复活过程中的动力学特征。结果表明:不同浓度的AG均表现出对Ito的抑制作用,在50、100、200μmol·L^(-1)浓度范围内,随着药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强。以给药前Ito幅值为参照,给予各浓度AG后,电流分别降至原来的(84.06±2.75)%、(66.09±4.65)%、(48.79±5.96)%,后2个浓度的效应与给药前相比具有统计学意义。在动力学特征方面,50、100、200μmol·L^(-1)浓度的AG使瞬时外向钾通道激活阈值上升,失活加速,从失活状态到活化状态的转换延长。综上,AG对SD大鼠心肌细胞上的Ito有抑制作用,此效应的产生与通道的激活、失活和失活后恢复动力学过程改变有关。

转录因子Pax5可不依赖与启动子结合促进B细胞淋巴瘤生长

目的:研究B淋巴细胞转录因子Pax5是否可以经过不依赖与启动子直接结合方式控制B细胞淋巴瘤的生长。方法:将可以产生各种突变型pax5并带GFP荧光的逆转录病毒感染小鼠淋巴瘤细胞系myc3和38B9,48 h后应用流式细胞术检测GFP+淋巴瘤细胞的比例,然后将GFP+和GFP-淋巴瘤细胞一起继续培养或皮下移植至小鼠体内生长,体外每隔3 d或体内成瘤后重新检测GFP+细胞比例并确定其细胞周期参数和凋亡细胞的数量。结果:与正常对照组(migR-GFP,空载体)相比,突变型Pax5 mt 1-357及缺乏DNA结合功能的突变型Pax5 mt 304-358和野生型Pax5一样均能明显增加GFP+细胞比例(P<0.01),且S及G2/M期GFP+肿瘤细胞明显增多(P<0.01),但只有DNA结合功能的Pax5 mt 1-143与空载体对照一样无法使GFP+细胞比例增加(P>0.05),细胞周期也无明显改变(P>0.05)。结论:Pax5可以经过不依赖与起动子直接结合方式促进B细胞淋巴瘤在体内体外的生长,其主要功能是加速肿瘤细胞分裂而不是降低细胞凋亡。本研究为以Pax5蛋白特定区域作为治疗B细胞淋巴瘤新靶点提供了理论依据。

钙掺杂调节四氧化三铁纳米酶活性及其抗病毒作用

目的探讨钙掺杂对四氧化三铁(Fe_3O_4)纳米酶活性的影响。方法通过水热合成反应将钙掺杂到Fe_3O_4纳米酶中,系统表征和分析钙掺杂对Fe_3O_4纳米酶形貌和催化活性的影响。结果尽管钙掺杂原子比例较低,但会导致纳米颗粒表面更加粗糙且带有正电荷,其中过氧化物酶活性降低,而过氧化氢酶活性增强。钙掺杂Fe_3O_4纳米酶具有抗流感病毒作用。结论钙掺杂不仅可以调节Fe_3O_4纳米酶的活性,还在抗病毒方面具有潜在的应用价值。

KCTD7基因在肝细胞癌中的表达和作用机制

目的运用癌症基因组图谱(TCGA)测序数据研究钾离子通道四聚体结构域7(KCTD7)基因在肝细胞癌(HCC)中的表达、作用机制及其临床意义。方法TCGA数据库中下载HCC患者的RNA测序数据及临床信息。单因素和多因素Cox回归分析探究KCTD7基因在HCC中的表达水平与患者临床信息和预后的相关性。基因富集分析(GSEA)预测KCTD7基因在HCC中可能调控的通路。单样本GSEA(ssGSEA)比较KCTD7高表达组与低表达组患者间的免疫浸润情况。HCC细胞系中敲低KCTD7研究其调控细胞增殖、周期及凋亡的功能和可能机制。结果与正常组织相比,KCTD7基因在肝癌组织中高表达(P<0.01)。KCTD7基因高表达组HCC患者总生存率更差(P<0.05)。KCTD7基因的表达水平是影响HCC患者总生存期的独立危险因素。GSEA结果显示,KCTD7基因与细胞周期信号通路相关。在肿瘤微环境中,KCTD7基因的高表达与活化的CD4^(+)T细胞、中央记忆CD4^(+)T细胞及自然杀伤细胞等呈正相关。HCC细胞系中敲低KCTD7的表达能够抑制细胞增殖,影响细胞周期分布,并促进凋亡。结论KCTD7基因在HCC中高表达且影响HCC患者的预后生存。敲低KCTD7基因能够通过影响细胞周期而抑制HCC细胞生长并促进其凋亡。

神经菌毛素1 b结构域的克隆及表达

目的:制备重组人神经菌毛素1(NRP1)b结构域蛋白。方法:采用PCR技术,从p GEM-NRP1克隆载体中扩增人NRP1 b结构域(HuNRP1~b)cDNA,并将其克隆入pCold TF,构建重组原核表达质粒pCold-HuNRP1~b并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,制备重组大肠杆菌BL21(DE3)(pCold-HuNRP1~b),低温条件下用IPTG诱导重组菌的表达,制备重组蛋白TF-HuNRP1~b。结果:酶切、测序结果表明pCold-HuNRP1~b构建成功,经SDS-PAGE分析,重组质粒转化表达菌后重组蛋白TF-HuNRP1b获得表达,融合蛋白相对分子质量约90×10~3。结论:获得原核表达的重组HuNRP1~b蛋白,为该蛋白的规模化生产及其单克隆抗体的制备提供了有效的生物材料。

鼠神经菌毛素1蛋白的真核表达及其鉴定

目的制备重组鼠神经菌毛素1(mNRP1)蛋白。方法将表达载体pCMV3-mNRP1-flag(pCMV-mNRP1)转化大肠杆菌DH5α感受态,扩增重组质粒;随后将pCMV-mNRP1转染哺乳动物细胞株HEK293,间接免疫荧光法(IFA)及western blot法鉴定重组蛋白mNRP1(flag-mNRP1)的表达。结果 IFA及western blot结果显示重组质粒转染HEK293后,flag-mNRP1获得有效表达,融合蛋白相对分子质量约为120 000。结论重组蛋白mNRP1在真核表达系统中获得成功表达,该蛋白的获得为进一步研究NRP1的生物学功能提供有效的生物材料。