禽源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位蛋白的功能与基因控制

禽源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛是禽大肠杆菌病的一种重要的致病因子，为一种蛋白质突起，具有良好的免疫原性。与人畜致病性大肠杆菌粘附素菌毛相比，禽源性大肠杆菌的菌毛研究起步稍晚，尤其对其亚单位（ＦｉｍＢ、ＦｉｍＥ、ＦｉｍＡ、ＦｉｍＩ、ＦｉｍＣ、ＦｉｍＤ、ＦｉｍＦ、ＦｉｍＧ、ＦｉｍＨ等）的功能及基因控制报道尚少，直到近年来，随着分子生物学等技术的发展和应用，人们对此才有较多的了解。近年研究表明，ＦｉｍＡ是Ⅰ型菌毛的主要结构蛋白，ＦｉｍＡ的表达受到一个“相变开关”的控制。ＦｉｍＢ蛋白可控制’相变开关”的“开”和“关”，ＦｉｍＥ只控制“相变开关”的“关”，二者的共同作用决定了ＦｉｍＡ的表达与否。ＦｉｍＤ是菌毛在菌体上定位所必需的。ＦｉｍＣ则与ＦｉｍＡ的生物合成有关。ＦｉｍＥ、ＦｉｍＦ、ＦｉｍＨ与菌毛的粘附特性有关，并且可能是控制菌毛长度和数量的调控因子。为了对Ⅰ型菌毛的进一步研究提供依据，作者对与禽源致病性大肠杆菌有关的Ⅰ型菌毛亚单位的功能与基因控制作一初步综述。

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位基因的表达与鉴定

将由 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增并克隆在ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中的ｓｌｔⅡｅ Ｂ基因切出，并按预定的阅读框架插入表达性质粒载体 ｐ Ｇ Ｅ Ｘ６ｐ１ 中的谷胱苷肽转移酶（ Ｇ Ｓ Ｔ）基因的下游。重组质粒 ｐｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ在大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１ 中以融合蛋白的形式表达 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（命名为 Ｇ Ｓ Ｔ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ），即 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（７５６８ｋ Ｄ）与谷胱苷肽转移酶（２７３３５ｋ Ｄ）相连组成分子量为 ３４８８５ｋ Ｄ 的融合蛋白。通过对重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ的菌体裂解物的 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳分析，以及根据抗原抗体结合反应的免疫学特性，通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 鉴定，重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ（含有重组质粒 ｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ的大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１）可以大量表达融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ。根据 Ｇ Ｓ Ｔ 可与其底物谷胱苷肽结合的特性，用谷胱苷肽结合的 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ制备的亲和凝胶纯化表达产物，纯化的表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ，可以鉴定到分子量约为 ３５ｋ Ｄ 的蛋白条带，这与融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ分子量（３４８８５ｋ Ｄ）相当。