卵巢癌中环状RNA-101748高表达的病理意义及对增殖的影响

目的探讨浆液性卵巢癌(SOC)中环状RNA-101748(circ-101748)表达的病理意义及其通过调控微小RNA(miR)-340表达对卵巢癌细胞增殖的影响。方法收集SOC病例69例。采用RNA原位分子杂交技术(RISH)检测circ-101748在浆液性卵巢癌中的阳性表达情况,统计分析circ-101748阳性表达与SOC病理特征的关系;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)增殖活性实验检测circ-101748对卵巢癌细胞增殖的影响;基于生物信息学预测circ-101748的下游miRNA及其下游靶蛋白;通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和双荧光素酶报告实验验证circ-101748对miR-340的调控及miR-340对Ki-67的调控作用;通过回复实验证实circ-101748/miR-340信号轴对Ki-67的调控及对卵巢癌细胞增殖的影响。结果RISH结果显示,circ-101748阳性染色为棕黄色,定位于胞质和胞核;circ-101748阳性例数占比为73.91%(51/69),高于癌旁正常组织的11.59%(8/69),差异有统计学意义(P<0.05)。在SOC中,circ-101748的阳性表达与肿瘤直径(χ^(2)=9.763,P<0.05)、肿瘤分期(χ^(2)=9.656,P<0.05)密切相关,但与年龄、病理级别、淋巴结转移无关联(P>0.05)。MTT实验表明,过表达circ-101748后卵巢癌细胞的增殖活性显著升高,而降低circ-101748表达后卵巢癌细胞的增殖活性显著降低(P<0.05)。通过circBANK预测miR-340是circ-101748的靶基因;qRT-PCR结果表明,在卵巢癌细胞中过表达circ-101748后,miR-340表达水平显著下降(P<0.05),降低circ-101748表达后,miR-340表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实,circ-101748能与miR-340特异性结合,并可负性调控miR-340的表达。通过TargetScan和miRbase预测增殖蛋白Ki-67是miR-340的下游靶基因,进一步双荧光素酶报告实验验证表明,野生型Ki-673′非翻译区(3′UTR)可降低miR-340的荧光素酶活性,提示miR-340通过Ki-673′UTR抑制Ki-67蛋白的表达。回复实验结果表明,过表达miR-340可以消除circ-101748对卵巢癌细胞增殖蛋白Ki-67的促进表达作用,而过表达circ-101748或降低miR-340的表达可进一步激发卵巢癌细胞增殖蛋白Ki-67的表达;circ-101748能直接抑制miR-340的表达,而miR-340能直接抑制Ki-67的表达,circ-101748/miR-340/Ki-67信号通路在卵巢癌生长和增殖中起到显著促进作用。结论在卵巢癌中circ-101748为致癌基因,可通过调控miR-340/Ki-67信号轴促进卵巢癌细胞增殖和生长。

子宫颈鳞状细胞癌中超保守核糖核酸339的表达及其临床病理意义

目的分析子宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中超保守核糖核酸339(uc.339)的表达水平及其临床病理意义,探讨uc.339对宫颈癌细胞增殖的影响和相关机制。方法收集102例CSCC标本的临床特征。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测uc.339在CSCC组织中的表达水平,分析uc.339与临床病理特征的关系。通过MTT实验和克隆形成实验分析uc.339对细胞增殖的影响。采用生物信息学预测uc.339下游靶基因;采用qRT-PCR验证uc.339对靶基因微小RNA-339-5P(miR-339-5P)的影响;采用双荧光素酶报告实验验证uc.339对miR-339-5P的调控作用;采用回复实验证实uc.339对miR-339-5P调控及对宫颈癌细胞增殖的影响。结果qRT-PCR实验结果表明,CSCC组织中uc.339的表达水平高于癌旁正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05)。uc.339的表达与肿瘤大小(Pearson′s R=7.909)和病理分级(Pearson′s R=-4.859)显著相关(P<0.05),与患者年龄、人乳头瘤病毒(HPV)感染、淋巴结转移和TNM分期无相关性(P>0.05)。MTT实验提示过表达uc.339可促进宫颈癌细胞增殖,而降低uc.339表达则抑制了细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞克隆形成实验表明,过表达uc.339宫颈癌细胞克隆形成数目多于Scramble对照,降低uc.339表达宫颈癌细胞克隆形成数目低于si-对照,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学预测显示miR-339-5P是uc.339的靶基因;在宫颈癌细胞中过表达uc.339后,miR-339-5P表达水平下降,而降低uc.339表达后,miR-339-5P表达水平则升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实uc.339与miR-339-5P特异性结合,并可负性调控miR-339-5P的表达。回复实验提示过表达miR-339-5P能消除uc.339对宫颈癌增殖的促进作用,而降低miR-339-5P的表达则能进一步激发宫颈癌细胞的增殖活性。结论CSCC中uc.339表达水平上调,可能是一个新的致癌基因。uc.339通过抑制miR-339-5P表达促进CSCC细胞的增殖。

妊娠期糖尿病母血及脐血血清和胎盘中YKL-40的表达及意义

目的通过检测GDM患者母血血清、脐血血清和胎盘组织中人类软骨糖蛋白39(YKL-40)的表达情况,为探讨GDM的发病机理提供理论依据。方法采用ELISA和免疫组化检测随机选取2015年1—12月于扬州市妇幼保健院产科病房分娩的对照组正常孕妇20名和GDM组GDM患者60例母血血清、脐血血清和胎盘组织中YKL-40的表达水平。结果 (1)YKL-40蛋白主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞与血管内皮细胞的胞浆,胞核。YKL-40在对照组产妇静脉血清中的表达量为(0.369 2±0.003 2)pg/m L,脐静脉血清中的表达量为(0.336 7±0.003 1)pg/m L,GDM产妇血清中的表达量为(0.405 1±0.002 1)pg/m L,脐血中的表达量为(0.404 2±0.002 4)pg/m L,GDM患者母血血清、脐血血清中的YKL-40的表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)GDM组胎盘组织中YKL-40表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 GDM患者母血血清、脐血血清和胎盘组织中YKL-40的表达水平均明显高于正常对照组,YKL-40可能与GDM发病有关,GDM的发病可能与炎症刺激相关,为GDM的早期预测、诊断及治疗提供线索。