β-catenin不同表达定位与胃癌临床病理特征的关系

目的探讨β-catenin不同表达定位在胃癌组织中的意义及与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测120例胃癌组织及50例正常胃黏膜中β-catenin的表达情况。结果β-catenin在正常胃黏膜中的表达定位于细胞膜,阳性率为100. 00%。但其在胃癌组织中细胞膜表达缺失,出现细胞质、细胞核或质/核异位表达,异位表达率高达81. 67%(98/120),其异位表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P <0. 05)。120例胃癌组织中,β-catenin细胞核异位表达率为36. 67%(44/120),并且其细胞核表达与胃癌TNM分期有关(P <0. 05),β-catenin细胞核阳性患者5年总体生存率明显低于细胞核阴性者(P <0. 05)。结论在胃癌的发生过程中β-catenin起重要作用,其不同表达定位与胃癌的进展有关,β-catenin有望成为胃癌诊断及治疗的潜在靶点。

节律因子BMAL1通过SHH信号转导通路影响胃癌MGC-803细胞的增殖

背景与目的:节律因子BMAL1除了在维持正常生物节律中发挥核心作用外,也参与多种肿瘤的演进过程,但其具体作用机制还未完全阐明。探讨节律因子BMAL1对胃癌细胞增殖的影响及下游信号转导通路。方法:应用靶向BMAL1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)进行细胞转染(si-BMAL1组),并设置乱序阴性对照(negative control,NC)组,通过蛋白质印迹法(Western blot)验证细胞转染效率。分别采用MTT法和平板集落形成实验检测细胞的活力和增殖情况,采用Western blot测定细胞中增殖相关功能蛋白cyclin D1的表达水平以及SHH信号转导通路蛋白SHH、SMO、GLI1的表达变化。采用SHH信号通路抑制剂环巴胺处理BMAL1下调后的MGC-803细胞,采用Western blot检测SHH、SMO、GLI1及cyclin D1的蛋白水平,采用平板集落形成实验检测细胞增殖能力的变化。结果:与NC组相比,si-BMAL1组细胞活力增强,细胞中cyclin D1的表达上调,SHH、SMO、GLI1的表达明显上调(P<0.05)。SHH抑制剂环巴胺处理干扰BMAL1的MGC-803细胞后,与si-BMAL1组相比,si-BMAL1+环巴胺组SHH、SMO、GLI1的蛋白水平下调,cyclin D1并未发生明显变化,si-BMAL1促进胃癌细胞增殖的作用可被环巴胺所逆转。结论:BMAL1可能通过SHH信号转导通路抑制胃癌MGC-803细胞的增殖。

丹皮酚通过抑制miR-155-5p减轻体外培养心肌细胞受到的缺氧/复氧损伤

目的:探究丹皮酚对受到缺氧/复氧损伤的H9C2细胞的影响及其作用机制。方法:使用或不使用丹皮酚处理H9C2细胞,并建立体外H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型。使用qRT-PCR检测miR-155-5p的相对表达水平,通过MTT和流式细胞术检测H9C2细胞的增殖活性和凋亡水平。使用乳酸盐脱氢酶和肌酸激酶对应的ELISA试剂盒检测H9C2细胞损伤情况。结果:丹皮酚显著增强了H9C2细胞活性,减弱了细胞凋亡水平及乳酸盐脱氢酶和肌酸激酶的释放。丹皮酚显著抑制了H9C2细胞中miR-155-5p的表达。单独抑制miR-155-5p产生的效果与丹皮酚一致。同时,使用丹皮酚处理H9C2细胞并向H9C2细胞中转染miR-155-5p mimics后丹皮酚的效果被过表达的miR-155-5p逆转了。结论:丹皮酚通过下调miR-155-5p水平减弱了缺氧/复氧导致的H9C2细胞损伤。

白藜芦醇对抗酒精诱导的SH-SY5Y细胞损伤作用:氧化应激与凋亡

目的:探讨白藜芦醇在酒精诱导的SH-SY5Y细胞损伤中的抗氧化及抗凋亡作用,揭示白藜芦醇抗酒精神经性损伤的作用机制.方法:SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导成正常神经细胞后以白藜芦醇预处理SH-SY5Y细胞24 h,用酒精诱导氧化应激及凋亡的产生.MTT方法检测白藜芦醇处理组与对照组SH-SY5Y细胞活力;用ELISA试剂盒检测不同实验组的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、流式细胞术检测不同实验组细胞凋亡水平;采用RT-PCR方法检测抗氧化应激凋亡通路中关键基因SOD1、SOD2、过氧化氢酶及Caspase3和PRAP的m RNA表达水平.结果:MTT结果显示,与对照组比较,白藜芦醇(25、50、100μmol/L)对SH-SY5Y细胞的细胞毒性均在20%以下,300 mmol/L酒精可致近50%SH-SY5Y细胞死亡;25-100μmol/L白藜芦醇可有效对抗300 mmol/L酒精对SHS Y5Y引起的细胞毒性作用;S O D活性显示100μmol/L白藜芦醇预处理组SOD含量(0.391±0.011)明显高于非处理组(0.286±0.019),而R O S结果显示酒精诱导组(29234.79±2288)明显高于白藜芦醇25、50、100μmol/L预处理组(18023.26±1359.66;13528.44±1078.99;8219.87±635.99);RT-P C R结果显示,与300m m o l/L酒精比较,25、50和100μm o l/L白藜芦醇可上调SOD1(0.623±0.032;0.686±0.0213;0.854±0.014)、S O D2(1.001±0.058;0.938±0.021;1.190±0.078)、过氧化氢酶(1.828±0.067,2.018±0.079;2.196±0.100)及PARP(2.828±0.161;3.018±0.208;4.196±0.190)m RNA表达量;不同剂量白藜芦均可下调Caspase3 mR NA表达量(5.828±0.367;5.318±0.279;4.196±0.200).结论:本实验结果揭示了300 mmol/L的酒精可以引起SH-SY5Y细胞氧化应激与凋亡的发生表明白藜芦醇通过介导氧化应激及氧化应激引起的抗凋亡途径发挥了神经保护作用.

干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法及Western blot法检测60例结直肠癌手术切除组织及癌旁正常组织中OCT4的表达,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,运用Kaplan-Meier法分析OCT4表达与结直肠癌患者总生存率的关系。结果结直肠癌组织中OCT4的阳性率为80.00%,高于癌旁正常组织(16.67%),差异有统计学意义(P<0.05),OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征尚无相关性(P>0.05)。Western blot实验显示:结直肠癌组织中OCT4蛋白的相对表达量为7.70±0.07,高于癌旁正常组织(0.70±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征无相关性(P>0.05)。生存分析显示:OCT4阳性患者的总生存期低于阴性患者。结论 OCT4在结直肠癌中过表达,可作为预测结直肠癌患者预后的潜在分子标志物。

大鼠肝癌发生过程中超微结构、c-myc和HER-2表达变化及意义

目的探讨大鼠肝癌(HCC)发生过程中的超微结构、c-myc和HER-2表达的变化情况。方法采用黄曲霉毒素B1(AFB1)制作诱导性大鼠HCC模型,并观察诱导性大鼠HCC模型在不同阶段的超微结构、c-myc和HER-2表达变化。结果该组大鼠HCC模型中,肝细胞呈变性损伤、异型性到癌变;线粒体由增生肿胀到枯竭、空泡变;糖原颗粒呈渐减少等特征性变化。观察到典型肝细胞吞噬细胞现象。c-myc、HER-2的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增产物电泳图谱显示在266、221bp处有DNA片段区带。与对照组大鼠肝组织比较,c-myc、HER-2mRNA在损伤病变、早期癌变和癌变肝组织的表达水平均显著升高。结论 AFB1诱导性大鼠肝细胞出现变性、异型性及癌细胞渐变的超微结构变化,其中c-myc、HER-2的异常表达可能参与了AFB1诱导大鼠癌变的过程。

lncRNA-ATB在子宫内膜癌中的表达及与临床病理特征的关系

探讨长链非编码RNA-ATB在子宫内膜癌组织中所具有的表达,分析并研究其表达与子宫内膜癌患者各项病理特征间所具有的关联性。方法:选取共54例子宫内膜癌组织、共20例正常子宫内膜组织,借助实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法,对子宫内膜癌、正常子宫内膜组织中所具有的lncRNA-ATB进行检测,分析并研究子宫内膜癌组织中所具有的lncRNA-ATB与患者各项病理特征间所具有的关联性。结果:在子宫内膜癌组织中所具有的lncRNA-ATB显著高于正常子宫内膜组织,P<0.01。lncRNA-ATB所具有的高表达、子宫内膜癌淋巴结转移、肌层浸润深度、TNM分期间体现出正向的关系,P<0.05,而与患者的年龄、组织学分级间不具有关联性,P>0.05。结论:在子宫内膜癌组织中所具有的lncRNA-ATB高表达,与淋巴结转移、浸润深度、TNM分期间体现出正向的关系,lncRNA-ATB与子宫内膜癌的发生发展有关。

靶向抑制LncRNA-ATB对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响

目的观察靶向抑制长链非编码RNA(LncRNA)-ATB对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法构建靶向干扰LncRNA-ATB的Si-RNA,利用脂质体法转染Ishikawa、HEC-1-A细胞,qRT-PCR检测LncRNA-ATB mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果qRT-PCR结果显示,ISK-siRNA组、HEC-siRNA组中LncRNA-ATB mRNA的表达水平显著低于ISK-NC组、HEC-NC组(P<0.05)。MTT结果显示,ISK-siRNA组48、72 h细胞增殖能力显著低于ISK-NC组(P<0.05);HEC-siRNA组24、48 h细胞增殖能力显著低于HEC-NC组(P<0.05)。凋亡实验结果显示,ISK-siRNA组、HEC-siRNA组总凋亡率显著高于ISK-NC组、HEC-NC组(P<0.05)。迁移及侵袭实验结果显示,ISK-siRNA组、HEC-siRNA组穿膜细胞数显著少于ISK-NC组、HEC-NC组(P<0.05)。结论LncRNA-ATB可以调控促进子宫内膜癌细胞增殖、抑制凋亡并增强其迁移侵袭能力,因此,LncRNA-ATB有可能成为子宫内膜癌早期诊断及治疗的新靶点。

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制

目的探讨鬼臼苦素(PPP)对人结直肠癌细胞系HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制。方法不同浓度PPP处理HCT-15细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测HCT-15细胞的增殖活性;倒置显微镜下观察HCT-15细胞的形态变化;流式细胞术检测HCT-15细胞周期的改变;Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达水平。结果CCK-8法结果显示,PPP能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,并呈剂量-时间依懒性;倒置显微镜下观察发现,细胞失去原有形态回缩为圆形,折光性降低,活细胞数量明显减少;流式细胞术结果显示,G2/M期细胞比例显著升高,G0/G1期和S期细胞比例明显降低;Western blotting结果显示,PCNA、细胞周期蛋白D1的表达水平明显降低。结论PPP可显著抑制人结直肠癌HCT-15细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调PCNA、cyclin D1的表达水平,进而将细胞阻滞于G2/M期发挥抑制作用。