PI3K/Akt/GSK-3β通路介导ABC转运蛋白调控人结肠癌HCT-15细胞多药耐药

目的:研究PI3K/Akt信号通路是否通过下游糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)途径调控ABC转运蛋白的表达参与人结肠癌HCT-15细胞的多药耐药。方法:选用人结肠癌HCT-15细胞为实验对象,分别采用GSK-3β抑制剂(HY-19807)和PI3K/Akt通路抑制剂(HY-13898)处理细胞。CCK-8法检测奥沙利铂对细胞的半数抑制浓度,计算抑制率及耐药指数。Western blot法检测细胞内Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK3β-Ser9及ABC转运蛋白(P-gp和MRP-2)的水平。RT-qPCR法检测各组细胞内ABC转运蛋白mRNA的表达变化。流式细胞术检测不同抑制剂对细胞周期的影响。结果:应用GSK-3β抑制剂HY-19807处理后的HCT-15细胞,其奥沙利铂半数抑制浓度较对照组明显上升,并出现p-GSK3β-Ser9、P-gp和MRP-2蛋白水平的上调(P<0.05),Akt及p-Akt的蛋白水平变化不明显(P>0.05);RT-qPCR结果同样为ABCB1和ABCC2的mRNA表达量升高(P<0.01);同时细胞周期检测结果显示HY-19807处理能够促进HCT-15细胞由G 1期向S期过渡,细胞增殖旺盛。而应用PI3K/Akt通路抑制剂HY-13898作用于HCT-15细胞后,其奥沙利铂半数抑制浓度较对照组下降,并出现p-GSK3β-Ser9、p-Akt、P-gp和MRP-2的蛋白水平下调(P<0.01);RT-qPCR检测结果同样为ABCB1和ABCC2的mRNA表达量降低(P<0.01);同时出现G 1期延长,细胞由G 1期向S期过渡受到抑制,细胞的增殖受到抑制。各实验组总GSK-3β蛋白表达一致。结论:PI3K/Akt信号通路通过调控GSK-3β的磷酸化水平,改变ABC转运蛋白的表达,参与结直肠癌细胞的增殖与多药耐药。

MiR-145-5p在大肠癌中的表达及与多药耐药的关系

目的探讨大肠癌中miR-145-5p和多药耐药基因(MDR1)蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达及两者的关系。方法分别在组织、细胞水平采用SP法、Real-time PCR法、Western blotting法检测50例大肠癌(CRC)患者组织及30例癌旁正常组织患者中P-gp的表达,miR-145-5p的表达变化对MDR1 mRNA及P-gp的影响及两者与临床病理特征之间的相关性。结果大肠癌组织中miR-145-5p表达量明显低于癌旁正常组织,MDR1 mRNA及P-gp的表达量明显高于癌旁正常组织(r=-0.403,P<0.01)。大肠癌细胞(HCT-15)中miR-145-5p能够抑制MDR1 mRNA及P-gp的表达(P<0.05)。结论MiR-145-5p对大肠癌多药耐药基因及蛋白的表达具有调控作用,参与了大肠癌的发生、发展及多药耐药。

结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达变化对多药耐药的影响

目的:探讨人结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达发生变化后对P-gp和MRP的影响。方法:采用Western Blot和qRT-PCR法检测人结肠癌细胞分别转染miR-145-5p mimics/inhibitor、miR-143-3p mimics/inhibitor后P-gp和MRP的表达。结果:转染miR-145-5p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低(P<0.05),转染miR-145-5p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高(P<0.05)。转染miR-145-5p mimics NC和miR-145-5p inhibitor NC后P-gp和MRP的蛋白和基因表达无明显变化(P>0.05)。转染miR-143-3p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低(P<0.05),miR-143-3p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高(P<0.05)。转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC后P-gp和MRP的蛋白和基因表达无明显变化(P>0.05)。结论:miR-145-5p及miR-143-3p对多药耐药蛋白P-gp、MRP具有调控作用,参与了结肠癌的多药耐药。