SLC7A11基因ShRNA表达载体的构建及喉癌稳定细胞株的筛选

目的:构建ShRNA沉默SLC7A11基因,并转染喉癌细胞株,为研究SLC7A11基因在喉鳞状细胞中作用提供基础。方法:针对SLC7A11基因构建3个表达特异性的ShRNA的真核表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞包装慢病毒。将病毒感染喉癌UMCC-5和Hep-2细胞,48h后加入puromycin抗生素进行筛选细胞3代以上,使用荧光显微镜观察筛选后的稳定表达对应shRNA细胞,直至无抗性细胞全部去除。通过RT-PCR及Westernblot的方法比较实验组及空白对照的各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:筛选后的喉癌UMCC-5和Hep-2细胞中全部表达荧光标签,暗示ShRNA-SLC7A11成功感染喉癌细胞系内,然后使用RT-PCR及Westernblot检测,两组喉癌细胞中发现Sh-SLC7A11转染后SLC7A11mRNA水平及蛋白的含量,明显低于Sh-CTRL组(p<0.05),结果显示,与空载质粒组相比,ShRNA慢病毒载体可有效沉默SLC7A11在UMCC-5和Hep-2细胞系中的表达。结论:成功构建并筛选出ShRNA-SLC7A11基因表达的喉癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因在喉癌中的作用奠定了基础。