应用LAM-IgG指标鉴别诊断结核杆菌感染性腹水

目的：了解检测腹水标本阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体(LAM—IgG)指标鉴别诊断结核杆菌感染性腹水的应用价值。方法：研究对象包括恶性腹水组(恶性组)32例，结核杆菌感染性腹水组(结核组)32例、其他良性腹水组(对照组)32例，穿刺采集腹水为检测标本，应用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测LAM—IgG。结果：LAM-IgG的阳性结果为：恶性组6．2％(2／32)、结核组65.6％(21／32)、对照组0。结论：在鉴别诊断结核杆菌感染性腹水方面，LAM-IgG指标的特异性、敏感性均较高，具有应用价值。

自然流产与感染人类微小病毒B19的相关性分析

目的：通过分析人类微小病毒B19(B19V)在自然流产组和正常分娩组的分布情况，探讨B19V感染与人类自然流产之间的关系。方法：自然流产组92人，采集血液及流产组织为检测标本；正常分娩组42人，采集产妇血液及新生儿脐带血为检测标本。用聚合酶链反应(PCR)方法检测B19V。结果：自然流产病人血液中B19V的检出率为20．6％(19／92)，其流产组织中B19V的检出率为27．2％(25／92)。正常产妇血液及其新生儿脐血B19V的检出率均为4．8％(2／42)。经卡方检验，B19V在流产组和对照组的分布情况的差别有显著性(P<0．05，P<0．01)。结论：B19V在流产组的分布情况显著高于对照组，提示B19V感染可能是导致孕妇流产的较重要的因素之一，在临床实践中应引起注意。

高糖、高胰岛素对乳腺癌MCF-7细胞腺苷酸活化蛋白激酶表达的影响及二甲双胍的干预研究

目的观察高糖和高胰岛素及不同浓度二甲双胍干预后乳腺癌MCF-7细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达,探讨AMPK在糖尿病合并乳腺癌发生、发展中的作用及二甲双胍抑制糖尿病合并乳腺癌患者肿瘤生长的可能机制。方法通过Western blot、RT-PCR方法检测MCF-7细胞在高糖、高胰岛素、高糖+高胰岛素及不同浓度二甲双胍干预后AMPK的表达水平,并应用流式细胞仪检测细胞周期。结果高糖+高胰岛素条件下,p-AMPKα1/2及AMPKα1蛋白表达与对照组相比下降(P<0.05)。与对照组相比,高糖组中,AMPKα1、p-A M P Kα1/2蛋白表达和A M P Kα1m RNA表达在二甲双胍处理组均增高(P<0.05);高胰岛素组中,AMPKα1、p-AMPKα1/2蛋白表达和AMPKα1 m RNA表达在二甲双胍处理组中明显增高(P<0.05);高糖+高胰岛素组中,p-AMPKα1/2、AMPKα1蛋白及AMPKα1 m RNA表达在二甲双胍处理组中均升高(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞周期,高糖+高胰岛素共同作用下,G1期乳腺癌MCF-7细胞所占百分比有所下降,且二甲双胍的干预高糖和(或)高胰岛素作用下的MCF-7细胞,可使细胞周期停滞于G1期(P<0.05)。结论高糖+高胰岛素可以降低乳腺癌MCF-7细胞中AMPK的表达水平,减少处于G1期细胞,而二甲双胍可以使高糖和(或)高胰岛素作用下AMPK表达增多,且使细胞停滞于G1期。

利拉鲁肽对ob/ob小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响和相关机制研究

目的探讨利拉鲁肽对ob/ob小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响,并探讨骨骼肌应激诱导蛋白2(Sesn2)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬因子表达及与胰岛素抵抗的相关性。方法将30只雄性7周龄ob/ob小鼠按照随机数字表法分为3组:ob/ob小鼠组(Ob组)、高脂喂养组(Ob+HFD组)和利拉鲁肽组(Ob+HFD+Lir组),每组10只,另将10只雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组),NC、Ob及Ob+HFD组小鼠腹腔注射生理盐水,Ob+HFD+Lir组小鼠腹腔注射利拉鲁肽注射液400μg·kg^(-1)·d^(-1),适应性喂养1周,随后干预5周。检测各组小鼠体重,并进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),透射电镜观察腓肠肌形态和自噬小体数量,Western blotting检测小鼠腓肠肌组织中Sesn2、AMPK、磷酸化的AMPK(p-AMPK)、螯合体1(P62)、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白的表达。组间比较采用单因素方差分析。结果与NC组比较,Ob组和Ob+HFD组小鼠体重及OGTT时间-血糖曲线的曲线下面积(AUC)增加,与Ob组比较,Ob+HFD组体重及AUC增加,与Ob+HFD组比较,Ob+HFD+Lir组小鼠体重和AUC降低,差异均有统计学意义[NC组、Ob组、Ob+HFD组、Ob+HFD+Lir组AUC分别为(1196.0±136.5)、(1573.0±117.4)、(1781.0±193.6)、(1312.0±140.8)mmol·L^(-1)·min^(-1),P<0.05]。与NC组比较,Ob组和Ob+HFD组透射电镜观察小鼠腓肠肌组织自噬小体数量减少,肌组织损伤,胞质局部水肿,肌原纤维局部断裂,肌丝粗细不一;与Ob组比较,Ob+HFD组腓肠肌组织自噬小体数量进一步减少,肌组织损伤更明显,胞质水肿,肌原纤维排列紊乱,细胞器肿胀,而Ob+HFD+Lir组小鼠腓肠肌自噬小体数量增加,肌组织损伤较轻,胞质略浅、变淡,细胞器轻度肿胀,肌原纤维少量断裂,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,Ob组和Ob+HFD组小鼠腓肠肌Sesn2、GLUT4蛋白表达降低,p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AKT/AKT比值降低,P62蛋白表达升高;与Ob组比较,Ob+HFD组上述变化更明显,给予利拉鲁肽干预逆转了上述蛋白表达和比值的异常,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论利拉鲁肽减轻ob/ob小鼠骨骼肌胰岛素抵抗可能与Sesn2/AMPK途径和自噬有关。

利拉鲁肽通过调节Sestrin2改善棕榈酸诱导的L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(Sesn2)在利拉鲁肽改善大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗,将实验细胞分为对照组(Con组)、棕榈酸0.6 mmol/L处理组(PA组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽10 nmol/L处理组(PA+Lir10组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽100 nmol/L处理组(PA+Lir100组)和棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽1000 nmol/L处理组(PA+Lir1000组)。细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组细胞活性,Western印迹法检测各组葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)和Sesn2蛋白的表达。小干扰RNA(siRNA)转染L6细胞,抑制Sesn2的表达后,用棕榈酸0.6 mmol/L和利拉鲁肽100 nmol/L干预细胞,采用Western印迹法检测细胞中Sesn2、Akt、p-Akt、GLUT4蛋白表达水平。结果与Con组相比,PA组细胞存活率明显下降(P<0.05),p-Akt/Akt比值、Sesn2、GLUT4蛋白表达水平下降(P<0.05)。给予利拉鲁肽干预后,PA+Lir100、PA+Lir1000组细胞活性升高(P<0.05),p-Akt/Akt比值、Sesn2、GLUT4蛋白表达水平升高(P<0.05)。抑制Sesn2的表达后,转染si-Sesn2后给予棕榈酸0.6 mmol/L组(PA+si-Sesn2组)和转染si-Sesn2后给予棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽100 nmol/L组(Lir100+PA+si-Sesn2组)的p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平均明显低于转染阴性组(si-Con组;P<0.05);即使给予利拉鲁肽干预后,与PA+si-Sesn2组相比,Lir100+PA+si-Sesn2组的p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平无明显升高(P>0.05)。结论棕榈酸可诱导L6细胞p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平下降。利拉鲁肽通过上调Sesn2表达,使p-Akt/Akt比值、GLUT4蛋白表达水平升高。这一过程可能参与了利拉鲁肽改善棕榈酸引起的L6细胞的胰岛素抵抗。