四川省16家大型禽类养殖场抗生素残留调查和细菌耐药性分析

为评估禽类养殖场粪便中抗生素的残留及细菌耐药性情况,本研究以四川省16家大型规模化禽类养殖场为监测点,重点分析粪便中抗生素残留特征和肠杆菌耐药特征,并对粪便中抗生素的选择性耐药风险熵进行评估。16份粪便样品中共检出18种抗生素,抗生素检出浓度0.54~2780.00μg·kg^(−1),其中,ZJZX中多西环素检出浓度最高,达到2780.00μg·kg^(−1);抗生素的选择性耐药风险熵为0.0040~10561.13,呈现出高选择性耐药风险;其次,从粪便中共筛选鉴定出14株肠杆菌科Enterobacteriaceae细菌,均表现出多重耐药性,且有33种耐药基因被不同程度检出。畜禽粪便中磺胺类、四环素类、氯霉素类和喹诺酮类抗生素残留较为严重,且养殖环境中肠杆菌科细菌表现出多重耐药性,建议有关部门加强畜禽养殖中多西环素、氟苯尼考和恩诺沙星等抗生素的管控,同时应加强对畜禽养殖企业中肠杆菌耐药性的监控。

岷江上游流域土壤抗生素残留评价研究

岷江上游流域土壤中含有一定量的抗生素,在不同浓度抗生素影响下的土壤会抑制自身呼吸,土壤的氧化作用也将受到影响,并且会导致土壤外部环境的变化。因此,如何有效降低抗生素对土壤的不良作用,对保护生态环境和维持相对健康的土壤环境十分重要。提升抗生素残留整治能力,能够提升土壤中微生物活性;因此,可通过抗生素残留评定等方式,增强岷江上游地区的土壤抗生素治理效果。

四川抗生素制药企业废水抗生素残留特征与风险评估

为评估制药企业废水处理系统对抗生素的去除效果及残留抗生素的潜在选择性耐药风险,本研究选取四川省内20家制药企业为研究对象,采用固相萃取-高效液相色谱法对制药废水中残留抗生素进行检测;通过比较废水处理系统进水口和排水口的抗生素浓度,评估废水处理系统对抗生素的去除效果;结合风险熵对残留抗生素的潜在选择性耐药风险进行评估。制药废水中抗生素残留浓度普遍较高;大部分制药企业现有废水处理系统对残留抗生素去除效果不理想;17家制药企业排口抗生素选择性耐药风险处于高风险水平。制药企业废水处理系统对抗生素的处理效果普遍较差,建议制药企业改进其废水处理系统工艺。

四川典型水域表层水体抗生素残留特征与风险评估

为评价四川4个典型湖泊/水库的抗生素残留特征及相关风险等级,采用超高液相色谱-串联质谱仪对水体中15种抗生素的残留水平进行测定,并通过熵值法和蒙特卡洛法对残留抗生素进行风险评估。结果显示:4个水体样本共检出14种抗生素,以兽用抗生为主,其中四环素浓度最高。黑龙滩水库抗生素残留水平较高,且存在高选择性耐药风险,其他3地抗生素残留水平与国内部分湖泊河流相比处于普通水平,且选择性耐药风险水平低;4个水体监测点均存在高环境风险。成人、儿童经饮水途径摄入抗生素的累积健康风险指数在9.5×10^-5~4.03×10^-3之间,且儿童要高于成人。4个典型水域兽用抗生素残留量与检出率相对较高,且环境风险水平较高。

新的f%T>MIC计算方法在抗生素PK/PD折点确定中的应用

目的研究并提出一种针对时间依赖性抗生素f%T>MIC计算的新方法,克服原常规算法的局限性,可用于解决口服抗生素无法计算PK/PD折点的问题。方法通过研究常规PK/PD折点计算的原理及步骤,建立了一种新的f%T>MIC计算方法,并以两种算法对Beagle犬静脉注射头孢他美的PK/PD折点进行计算和比较。结果新算法在关键步骤上基于曲线拟合,不依赖药动学房室模型,不受房室模型和给药途径限制,与常规算法比较f%T>MIC和PTA值相关性良好,相关系数分别为0.999和0.969。结论新的f%T>MIC计算方法,有望为各种给药途径及给药方案下时间依赖性抗生素PK/PD折点的确定提供一种新的思路。

基于网络药理学探讨地榆抗菌活性成分研究及初步实验验证

目的采用网络药理学方法探讨地榆抗菌活性成分,并结合抗菌药效学实验进行验证。方法基于TCMSP数据库获取地榆化学成分及其对应靶点,通过Gene cards和OMIM数据库获取细菌感染靶点。通过Cytoscape构建药物-疾病-靶点网络图,利用STRING数据库构建蛋白互作网络,采用DAVID数据库开展预测靶点的GO和KEGG分析。采用琼脂二倍稀释法对预测的活性成分进行体外最低抑菌浓度(MIC)测定,进一步利用临床分离菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)建立秀丽隐杆线虫感染和药物救治模型,观察线虫的存活情况,计算存活率。结果共筛选出8个潜在活性成分,其中山奈酚和槲皮素Degree值高于平均Degree值,得到17个关键靶点;GO和KEGG富集分析显示地榆抗细菌感染主要涉及细胞增殖、细胞凋亡、免疫应答等生物学过程,主要作用与调控Toll样受体、TNF、MAPK等信号通路相关。山奈酚对革兰阳性菌MRSA和MSSA的MIC_(50)和MIC_(90)均为128μg/mL。山奈酚、槲皮素对革兰阴性菌铜绿假单胞菌的MIC_(50)和MIC_(90)均为128μg/mL。与菌对照组比较,山奈酚(2.56 mg/mL)对MRSA和铜绿假单胞菌感染的秀丽隐杆线虫存活率明显升高(P<0.05),槲皮素(5.12 mg/mL)可明显提高铜绿假单胞菌感染线虫的存活率(P<0.05)。结论该研究初步揭示了山奈酚和槲皮素可能是地榆抗菌作用的物质基础之一,其作用机制可能与网络药理学预测的调节机体免疫和炎症反应等有关,为进一步实验研究奠定一定基础。

抗真菌抗生素CA1189产生菌SIIA-A1626的鉴定

目的抗真菌抗生素CA1189产生菌SIIA-A1626的分类鉴定。方法采用形态观察、生理生化特征鉴定、16S r RNA基因序列对比及系统发育学分析等相结合的多相分类研究方法来确定该菌株的分类学地位。结果与结论菌株SIIA-A1626在高氏1号培养基和ISP系列培养基上的形态特点和培养特征都呈现出链霉菌属菌株的形态学特征;菌株SIIA-A1626的16S r RNA基因与菌株Streptomyces violascens NBRC 12920T相似性最高,达到99.18%;在基于16S r RNA基因序列分析构建的系统进化树上,菌株SIIA-A1626在链霉菌属簇内形成独立分支。综合以上实验结果,菌株SIIA-A1626可能是链霉菌属的一个新种。

岷江上游养殖场土壤中抗生素残留风险评估

文章采用固相萃取-高效液相-紫外(SPE-HPLC-UV)联用法同时检测土壤中磺胺类、四环素类和氯霉素类抗生素含量,对四川岷江上游流域养殖场土壤中残留抗生素进行风险评估。分时段采集6处不同养殖场土壤,采用乙腈-磷酸缓冲盐和EDTA提取液提取,使用SAX和HLB小柱固相萃取,C_(18)柱进行液相分析,草酸盐-乙腈为流动相,梯度洗脱,270 nm下紫外检测。根据结果,利用环境风险熵值法对上述地区不同时间环境土壤进行评估。结果表明:该检测方法中待测组分能达到有效分离且专属性强。在0.048~41.78μg/mL线性范围内,浓度与峰面积均呈良好线性关系(r>0.9995),不同种类的抗生素最低检出限范围为11~26μg/kg,磺胺类、四环素类和氯霉素类回收率分别为75.2%~79.8%、60.2%~63.0%和65.4%。不同时段土壤样品均检出不同种类抗生素,以四环素类含量最高,且冬季采样土壤中残留量大于春夏季。大部分抗生素残留的环境风险处于较低水平,但仍有部分地区处于中风险水平。该研究所建方法准确、快速、简便,可用于土壤中残留抗生素的检测,结合环境风险分析,有效指导土壤污染检测管理和降解评估。

阿霉素白蛋白透明质酸纳米粒的制备及评价

目的制备以人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)和透明质酸(hyaluronic acid,HA)为载体,负载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,DOX)的纳米粒子,对纳米粒制备处方进行优化,并对制剂进行质量评价,初步考察纳米粒的体外抗肿瘤效果。方法采用去溶剂-交联法制备得到负载阿霉素的白蛋白透明质酸纳米粒子(DOX-HSA-HA NPs),并利用Box-Behnken Design响应面优化筛选最优处方,采用透射电镜、激光粒度仪对纳米粒的形貌和粒径进行考察,并考察纳米粒的体外释放效果及体外溶血情况,最后通过细胞毒性实验初步考察纳米粒的体外抗肿瘤效果。结果按优化条件制得的DOX-HSA-HA NPs透射电镜下呈球形,分布均一,粒径为(213.39±0.79)nm,PDI值为0.062±0.012,Zeta电位为-25.53 mV,包封率达88.85%,载药量达2.06%;体外释放结果表明,在pH 6.8和pH 7.4条件下DOX-HSA-HA NPs具有缓释效果,加入透明质酸酶之后,DOX的释放量增加;溶血性实验表明,纳米载体材料HSA-HA NPs无溶血风险,可用于静脉注射给药;体外细胞实验表明,空白载体对细胞基本无毒性,相比于DOX-HSA NPs,DOX-HSA-HA NPs对小鼠乳腺癌4T1细胞的细胞毒性增强。结论采用去溶剂-交联法制得的DOX-HSA-HA NPs分布均匀,包封率高,具有明显的缓释作用和增强的细胞毒性。

新型噻唑肽类抗生素产生菌SIIA-A6351的鉴定

目的新型噻唑肽类抗生素产生菌SIIA-A6351的分类鉴定。方法采用形态观察、生理生化、细胞壁化学类型、16SrDNA基因测序等多相特征来鉴定该菌株。结果与结论鉴定菌株SIIA-A6351为四川游动放线菌(Actinoplanes sichuanensis),为噻唑肽类抗生素的新产生菌。

一种时间依赖性抗生素序贯给药的PK/PD折点计算方法

目的用一种新的f%T>MIC计算方法,对时间依赖性抗生素头孢他美Beagle犬序贯给药的PK/PD折点进行计算,并与多次静脉注射和多次口服给药进行比较。方法设计Beagle犬包括序贯给药(3d×190mg/tid,i.v.+4d×250mg/bid,p.o.)、多次静脉注射(7d×190mg/tid,i.v.)和多次口服(7d×250mg/bid,p.o.)的3种给药方案,用模拟的方法在单次给药实验的基础上通过药动学"叠加"原理获得3种给药方案的模拟C-T曲线,并建立f%T>MIC计算公式;用蒙特卡罗模型对3种设计的给药方案进行PK/PD折点计算和评价。结果 Beagle犬序贯给药、多次静脉注射和多次口服给药的PK/PD折点分别为24.1、23.6和7.98μg/m L。结论模拟结果显示,新的f%T>MIC计算方法可用于时间依赖性抗生素序贯给药的PK/PD折点计算,头孢他美序贯给药与多次静脉注射的PK/PD折点接近,序贯给药可替代多次静脉注射。

响应面法优化聚醚类抗生素拉沙里菌素的发酵条件

目的为了提高拉沙里链霉菌Streptomyces lasaliensis产拉沙里菌素的发酵水平,利用响应面法对其发酵条件进行优化。方法用Plackett-Burman实验对影响发酵水平的9个主要因素进行显著性评价,筛选出3个显著因素,再选取最陡爬坡法逼近最佳响应面区域的发酵条件,通过CCD中心组合实验以及响应面分析,确定最优发酵条件。结果优化后,最佳培养条件为葡萄糖6.26g/L、糊精28.75g/L、p H 5.58,最佳产量为393.121mg/L。结论在此优化条件下,拉沙里菌素的产量提高了1.18倍。

四川地区兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类药物耐药性调查

本研究旨在调查四川地区兔场中粪肠球菌对恶唑烷酮类药物的耐药性,检测恶唑烷酮类耐药基因。以四川多个地区兔场分离鉴定的79株粪肠球菌为研究材料,开展分离株对恶唑烷酮类的药物敏感性试验。运用PCR技术检测分离株中恶唑烷酮类耐药基因cfr、poxtA和optrA。结果显示,在分离出的79株粪肠球菌中,有19株对利奈唑胺耐药(MIC≥2mg/L),耐药率为2405%。PCR结果表明,有16株含有optrA基因,其余基因未检出。16株携optrA基因粪肠球菌分为13个ST型,其中分离自峨眉山市某兔场的CSC1菌株可能是一个新的ST型。结论:兔源粪肠球菌对恶唑烷酮类耐药率为2405%,由optrA基因介导,optrA基因在粪肠球菌中检出率为2025%,兔场与兔场之间分离的菌株之间存在密切进化关系,耐药菌株的广泛交流可能造成多重耐药基因optrA传播。

硫酸阿米卡星多囊脂质体的制备及评价

目的制备硫酸阿米卡星多囊脂质体(amikacin sulfate multivesicular liposomes,AMK-MVLs),对其进行质量评价,并考察了其体外抗菌活性。方法采用复乳法制备AMK-MVLs混悬液Ⅰ,Box-Behnken效应面法优化筛选最佳处方,采用生理盐水洗涤后调整药物浓度得AMK-MVLs混悬液。采用光学显微镜、激光粒度仪、差示扫描量热(differential scanning calorimeter,DSC)考察制剂的理化性质,采用透析法考察其体外释放规律,通过微量稀释法初步考察其体外抗菌活性。结果优化得到AMK-MVLs混悬液Ⅰ的最佳处方为:大豆磷脂与胆固醇质量比为1.91:1,三油酸甘油酯用量为1.02%,PVA用量为0.62%。AMK-MVLs呈堆叠有无数囊泡的非同心球状,AMK-MVLs混悬液包封率(87.12±1.55)%,平均粒径为11.93μm。DSC结果表明,AMK以无定型状态存在于脂质体内。体外释放结果显示AMK-MVLs混悬液在72 h时释药约80%。体外溶血实验表明,AMK-MVLs脂质体粒子浓度低于400μg/mL时无溶血风险。体外抗菌实验结果显示,相较于AMK溶液,AMK-MVLs混悬液对E.coli、P.aeruginosa、S.aureus 3种细菌具有更好的抗菌效果。结论成功制备了一种硫酸阿米卡星多囊脂质体,其粒径分布均匀、包封率高,释药规律符合Higuchi动力学模型,具有增强的抗菌活性。

碳青霉烯类抗生素中间体MAP的合成工艺改进

本研究报道了一种以4-乙酰氧基氮杂环丁酮(4-AA)为起始原料经过Reformatsky、酰化、还原、亲核取代、Dieckmann环合、烯醇化六步反应得医药中间体β-甲基乙烯基磷酸酯(MAP)的方法,通过单因素对照实验对关键反应的重要参数进行了优化,得到一条收率高、成本低和高效的合成路线,总收率达到43%,液相纯度达到98.82%,并采用MS和^(1)HNMR对关键中间体和产物都进行了表征。

苯丙氨酸脱氢酶分离纯化的开放实验教学设计与实践

开放实验教学既是一种教学理念,又是一种教学策略,在本科生毕业阶段和向研究生过渡的阶段显得尤为重要。本次开放实验教学设计依托课题组研究较为深入的苯丙氨酸脱氢酶,将发酵、提取、粗纯、精纯、酶活测定、高效液相色谱(HPLC)分析和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的整条项目链作为教学和实践内容,同时训练学生整理、处理数据和撰写报告的能力,提升其综合科研水平。

岷江上游流域土壤抗生素残留对农业生产的影响

抗生素能够在一定程度上提升微生物、动物以及人类的抗性基因,但长此以往会导致机体抗药性增强,造成抗生素对动物、微生物以及人类的效用降低,影响某个种群的长远发展,因此,抗生素的大量残留也被认为是一种环境污染。本研究以岷江上游寿溪河流域为例,分析该区域土壤中抗生素污染现状、抗生素来源、抗生素对动植物的影响以及降低土壤中抗生素的措施等几个方面,以期为降低抗生素对农业发展的负面影响,提供有益参考。

5个恶唑烷酮类新化合物对铜绿假单胞菌群体感应系统的抑制研究

目的 以铜绿假单胞菌PAO1为模式菌,研究恶唑烷酮类新化合物对铜绿假单胞菌群体感应系统的抑制作用及其作用机制。方法 测定5个恶唑烷酮类新化合物对PAO1生物膜、绿脓菌素、运动能力抑制活性,采用qRT-PCR测试其对群体感应相关基因的下调作用,并评估化合物对秀丽隐杆线虫感染模型的保护活性。结果 化合物SIIA-MA2与SIIA-MA4对PAO1生物膜、绿脓菌素、运动能力具有较强的抑制活性,其作用机制均是并显著下调PAO1中10个已知的受群体感应系统正调控的基因。化合物SIIA-MA2与SIIA-MA4对秀丽隐杆线虫感染模型具有良好的体内保护活性,其中化合物SIIA-MA2对急性感染模型具有显著保护活性;化合物SIIA-MA4对慢性感染模型具有显著保护活性。结论 恶唑烷酮类新化合物SIIA-MA2和SIIA-MA4通过抑制PAO1群体感应系统发挥抗感染作用。

钯催化5-烯基恶唑酮(3+2)环化反应的分子机制和化学选择性研究

采用M06-L(PCM-SMD)计算方法,研究了钯催化5-烯基恶唑酮和烯丙基碳酸酯独特的(3+2)环化反应机制及化学选择性缘由。结果表明,5-烯基恶唑酮分子中亚胺活性部位的反应活性优于α,β-不饱和羰基活性部位的活性,理论预测的选择性为99.8%。π…π堆积相互作用、Pd…N耦合作用和分子内氢键共同决定了高化学选择性。底物分子中杂原子的电荷越低,导致亚胺部位的亲核性越强和C=N双键越弱,从而增强了亚胺部位的反应活性,大大提升了化学选择性。这一研究为探究π-烯丙基钯环化反应构筑有生物活性的杂环骨架提供了一定的理论依据。

基于没食子酸分析的百药煎发酵炮制工艺研究

为了优化百药煎发酵炮制工艺,缩短发酵炮制时间,确定最适工艺参数。本文采用单因素和正交实验法,以百药煎性状和主要有效成分没食子酸含量为考察指标,考察各个因素对百药煎发酵炮制的影响。结果表明,百药煎的最适发酵炮制工艺为温度30℃,湿度75%,加水量45%,发酵炮制时间7 d。该发酵炮制工艺稳定可靠,操作性强,可为百药煎的工艺研究提供参考。