拟境内上市公司股票期权激励个税合规风险研究

股权激励是企业留住人才的重要工具,但产生的税负可能影响激励效果,亦在上市合规性方面受到重点审查。论文围绕股票期权实施的各个节点,对非上市公司股票期权产生的个税合规风险进行梳理、剖析,提出合规解决措施,供拟上市公司参考。

人肺癌细胞特异性结合肽的筛选与验证

目的筛选人肺癌细胞特异性结合肽,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制提供依据。方法以正常人支气管上皮细胞16HBE为吸附细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,利用噬菌体展示肽库经4轮差减吸附淘筛,采用细胞ELISA鉴定噬菌体与肺癌细胞结合的特异性并测序获得多肽序列。结果经4轮筛选噬菌体富集率逐级递增,共挑选394株噬菌体利用ELISA验证,将特异性较好的5株噬菌体克隆基因测序,获得重复率最高的序列(4/5)。结论利用噬菌体展示技术筛选出了与人肺癌细胞癌特异性结合的小分子多肽,为肺癌患者的早期诊断和靶向治疗奠定了基础。

CD1d融合蛋白的表达及其在自然杀伤T细胞原代培养中的作用

目的构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriA tag,建立稳定表达CD1d融合蛋白的细胞系,并检测该蛋白对体外培养人原代自然杀伤T(natural killing T,NKT)细胞的活化刺激功能,为肿瘤过继性免疫治疗提供新方法。方法从健康人外周血提取CD1d全长基因作为目的 DNA片段,与真核表达载体pcDNA3.1(-)分别经双酶切后,酶切产物用T4 DNA连接酶连接,获得重组表达载体,经转染293T细胞、抗性筛选、质粒提取等步骤获得融合的重组质粒。将双酶切鉴定正确的质粒采用磷酸钙转染法导入CHO-K1细胞,经Western blot和ELISA法检测CD1d蛋白的表达,连续培养获得稳定表达CD1d的细胞系,经扩增培养收获培养液后,进行Protien A柱纯化。将纯化的CD1d蛋白用于人外周血经体外分离获得的单个核细胞的连续培养后,进行流式细胞术检测。结果质粒pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriA tag经双酶切鉴定构建正确。获得1株稳定表达CD1d蛋白的细胞株。纯化后的CD1d蛋白相对分子质量约196 000,能够激活单个核细胞中NKT细胞的扩增,培养第8天,CD3+CD56+NKT细胞显著增加,由培养前的0.30%扩增至4.99%。结论成功构建了pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriA tag真核表达质粒,建立了高效稳定表达CD1d蛋白的CHO-K1细胞株,为深入研究CD1d蛋白刺激活化NKT细胞奠定了实验基础,进一步证实了CD1d分子体外刺激NKT活化的功能,为最终免疫治疗提供了细胞。

缺血性脑卒中神经保护剂临床转化研究进展

脑卒中是中老年常见的急性脑血管病,是当今世界最主要的致死性疾病之一,其中缺血性脑卒中约占患者总数80%。我国脑卒中具有"高发病率、高死亡率、高致残率、高复发率、高经济负担"5大特点,是第一位死亡原因。除血管再通外,神经保护剂是目前最具潜力的一种脑卒中治疗策略。神经保护剂的研究已开展很长时间,目前已涉及49个种类,上百项临床试验,但多数药物在动物实验中证实有效,而在临床试验中无效或存在严重不良反应,其可能原因包括药物临床前实验及临床试验相关的多种复杂因素。本文重点阐述缺血性脑卒中神经保护剂临床转化过程中存在的问题及应对策略的相关研究进展。