过表达表皮生长因子受体对人类黑素瘤脑转移瘤细胞系H1生长和转移的影响

目的 探索表皮生长因子受体（EGFR）在黑素瘤生长和转移过程中的作用.方法 选用本实验室已建立的人黑素瘤脑转移瘤细胞系（H1）,通过慢病毒载体稳定转染野生型EGFR（H1EGFRwt）,使其呈EGFR过表达状态,对照组转染绿色荧光蛋白（H1GFP）后分选纯化.采用细胞划痕实验对实验组H1EGFRwt细胞和对照组H1GFP细胞的迁移能力进行分析,结果以划痕面积愈合率表示.采用集落形成实验观察EGFR对两组细胞独立生存能力和集落形成能力的影响,通过刃天青还原试验评估集落形成结果,结果以两组细胞活细胞数及其代谢活性评分表示.Western印迹分析EGFR激活的信号通路.采用SPSS 20.0软件进行重复测量的方差分析比较两组细胞划痕面积愈合率的差异,采用配对样本t检验比较两组细胞不同预处理的代谢评分差异.结果 流式细胞仪检测显示,H1细胞EGFR和GFP转染成功,分选后得到了纯化H1EGFRwt和H1GFP细胞.细胞划痕实验显示,实验组H1EGFRwt在给予表皮生长因子（EGF）刺激的不同时间点（6、18、24、48 h）,划痕面积愈合率分别为0.145±0.066、0.479±0.096、0.571±0.198、0.672±0.199,对照组H1GFP在相同条件下分别为0.051±0.036、0.254±0.038、0.303±0.077和0.498±0.111,H1EGFRwt细胞的愈合程度均高于H1GFP细胞,两组比较,F=68.49,df=5,P＜ 0.05.集落形成实验证实,H1EGFRwt细胞的代谢评分（92 225.2±6 632.1）高于H1GFP细胞（62 935.7±8 159.2）,两组比较,t=2.26,df=9,P＜0.01.Western印迹结果显示,H1EGFRwt细胞可在EGF的刺激下激活下游信号磷酸化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C-γ（pPLCγ）、磷酸化信号转导和转录活化因子5 （pSTAT 5）、磷酸化信号转导和转录活化因子3（pSTAT3）,而对照组未能激活.此外,H1EGFRwt细胞可在EGF刺激下使磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶（pAKT）和磷酸化有丝裂原活化蛋白激酶（pMAPK）表达明显高于对照组.结论 EGFR在黑素瘤H1细胞的转移机制中发挥重要作用,并有可能成为黑素瘤转移治疗中的靶向目标.

脑胶质母细胞瘤模型研究概况及类脑模型的研发应用

胶质母细胞瘤是恶性程度最高的胶质瘤,建立针对胶质母细胞瘤弥漫性、浸润性生长特征的实验模型,是基础研究的核心。本文系统梳理了近年来国内外有关脑胶质母细胞瘤体内和体外研究模型的建立方法、应用概况及局限性,指出现有的脑胶质母细胞瘤研究模型虽在不断改进与完善,且在某些方面推进了该病的基础研究,但却无法模拟人体脑胶质母细胞瘤生长的复杂环境,揭示该病的动态发病机制及可能的药物作用途径。课题组经过多年的探索,研发了类脑器官模型,该模型可模拟大鼠体内大脑的发育过程,并与颅脑胶质母细胞瘤模型建立了共培养系统,能实现体外直观的实时观察肿瘤细胞的侵袭特征,为进一步研究脑胶质母细胞瘤的发病机制奠定了基础。并可从中分选出侵袭性肿瘤细胞与非侵袭性肿瘤细胞,进行下一步基因组学的系统分析,从而有望筛选出靶向侵袭性胶质母细胞瘤细胞的药物。