Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备

目的运用基因工程方法制备Caveolin-1重组蛋白及其抗体,为研究Caveolin-1的功能奠定基础。方法构建原核表达载体pGEX-5X-1-Caveolin-1,酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性后,进行纯化。纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符。重组Caveolin-1蛋白相对分子质量约为48000,以包涵体形式存在Caveolin-1蛋白N端融合GST标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度Caveolin-1融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:10000)。结论构建了高表达Caveolin-1蛋白的原核表达系统,制备的Caveolin-1重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Caveolin-1基因的生物学活性提供了实验材料和依据。

趋化因子CXCL14通过上调MMP-2表达促进人卵巢癌细胞的迁移

目的:探讨趋化因子CXCL14上调MMP-2的表达,促进人卵巢癌细胞系SKOV-3迁移的作用机制。方法:MTT法检测0.57ng/mlCXCL14重组蛋白处理0、24和48h后SKOV-3细胞的增殖能力;划痕实验检测0.57ng/mlrhCXCL14重组蛋白处理0、24和48h后细胞的迁移能力;半定量RT-PCR和Westernblotting检测rhCXCL14处理24h后,SKOV-3细胞中MMP-2mRNA和蛋白表达的变化。结果:0.57ng/mlrhCXCL14对SKOV-3细胞的增殖影响不显著。划痕实验发现,0.57ng/mlrhCXCL14重组蛋白可以促进SKOV-3细胞的迁移。半定量RT-PCR和Westernblotting结果显示,经rhCXCL14重组蛋白处理后可以促进SKOV-3细胞内MMP-2mRNA和蛋白上调。结论:CXCL14能够使卵巢癌细胞中MMP-2的表达上调,从而促进癌细胞的转移。

枸橼酸他莫昔芬对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的:观察枸橼酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0、1、5、10、12、14、15、16、18、20nmol/L)的枸橼酸他莫昔芬在不同的时间点(24、48、72h)对SKOV-3细胞增殖的影响;采用流式细胞技术(FCM)分析不同浓度的枸橼酸他莫昔芬处理细胞24h和48h后对细胞凋亡的影响。结果:枸橼酸他莫昔芬对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),并呈现剂量和时间依赖性。枸橼酸他莫昔芬能够诱导细胞凋亡,且凋亡率随着枸橼酸他莫昔芬浓度和处理时间的增加而升高(P<0.01)。结论:枸橼酸他莫昔芬可显著抑制SKOV-3细胞的增殖,其作用可能与其诱导细胞凋亡有关。

枸橼酸他莫昔芬影响人卵巢癌细胞增殖机制探讨

目的研究枸橼酸他莫昔芬(tamoxifen citrate)对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3增殖的影响及相关机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0.01μmol/L枸橼酸他莫昔芬在不同的时间点对SKOV-3细胞增殖的影响;采用细胞免疫化学(immunocytochemistry)和Western blotting检测0.01μmol/L枸橼酸他莫昔芬作用于SKOV-3细胞48 h后对细胞中Bcl-2表达的影响。结果枸橼酸他莫昔芬对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);枸橼酸他莫昔芬能够下调Bcl-2蛋白的表达。结论枸橼酸他莫昔芬可显著抑制SKOV-3细胞的增殖,其增殖抑制作用可能与其诱导细胞凋亡有关,而枸橼酸他莫昔芬诱导凋亡可能与其下调Bcl-2蛋白表达有关。

血清CA153、miR-10b在早期乳腺癌诊断中的价值

目的探讨血清糖类抗原153(CA153)、微小RNA-10b(miR-10b)在早期乳腺癌诊断中的价值。方法选择2018年2月—2020年2月攀枝花学院附属医院(以下简称“我院”)诊治的79例早期乳腺癌患者作为乳腺癌组,选择同期于我院进行健康体检的42名健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CA153水平,采用实时荧光定量PCR检测血清miR-10b水平,采用受试者工作特征曲线分析血清CA153、miR-10b对早期乳腺癌的诊断价值。结果乳腺癌组血清CA153、miR-10b水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同雌激素受体(ER)、组织学分化及TNM分期乳腺癌患者血清CA153水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同人表皮生长因子受体2(HER2)、TNM分期乳腺癌患者血清miR-10b表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CA153联合miR-10b诊断早期乳腺癌的曲线下面积、敏感度和特异度高于CA153、miR-10b单独检测。结论早期乳腺癌患者的血清CA153、miR-10b水平明显升高,ER表达、分化程度和TNM分期与血清CA153水平有关,HER2表达和TNM分期与血清miR-10b表达水平有关,两者联合检测在早期乳腺癌诊断中具有一定的临床价值。

β1肾上腺素受体R389G基因多态性与POAG患者眼压变化的关系

目的:探讨β1肾上腺素受体(adrenergic receptor,AR)R389G基因多态性与原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)患者眼压变化的关系。方法:选取2015-01/2017-02我院初诊POAG患者100例,分别于每日6∶00、12∶00、18∶00、24∶00测量患者的眼压并计算均值。眼压均值≥30mmH g的患者作为A组(44例),眼压均值<30mmH g的患者作为B组(56例),对比两组患者的临床资料,并采用多因素Logistic回归分析法探讨β1AR R389G基因多态性与POAG患者眼压变化的关系。结果:A组患者的GG基因型频率(27.3%)与B组患者(8.9%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。A组患者的等位基因G频率(40.9%)显著高于B组患者(18.8%),差异具有统计学意义(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析法分析,POAG患者的收缩压增高、β1AR R389G等位基因G频率增高是POAG患者眼压增高的独立危险因素(P<0.05)。结论:β1AR R389G基因多态性与POAG关系密切,是POAG患者眼压增高的独立危险因素。

氨甲环酸不同给药方式对同期双侧全膝关节置换有效性及安全性研究

目的探讨氨甲环酸(TXA)不同给药方式对同期双侧全膝关节置换(TKA)的有效性及安全性。方法以攀枝花市中西医结合医院2017年1月—2018年7月收治的240例行同期双侧TKA患者为研究对象,随机分为A组(80例)、B组(80例)、C组(80例);其中A组给予TXA静脉点滴联合关节腔内注射,B组给予TXA关节腔内注射,C组给TXA静脉点滴;对比3组手术指标、凝血功能、血红蛋白(Hb)变化幅度、红细胞压积(Hct)变化幅度、D-二聚体水平变化幅度及并发症发生率。结果 3组手术时间、D-二聚体水平变化幅度、并发症发生率无明显差异(P>0.05);A组失血量明显低于B、C组, B组失血量明显低于C组(均P <0.05);3组凝血功能无明显差异(P> 0.05);术后3d,A组Hb、Hct及D-二聚体水平变化幅度明显低于B、C组,且B组Hb、Hct及D-二聚体水平变化幅度明显低于C组(均P <0.05);A组术后并发症发生率明显低于B、C组(P <0.05),B组与C组之间无明显差异(P> 0.05)。结论联合静脉与关节腔内给予同期TKA患者TXA能够明显降低患者失血量,并明显降低Hb及Hct变化,对患者并无明显的不良作用,值得在临床推广应用。

冠状动脉介入诊疗中造影剂对肾功能影响的临床观察

目的:探讨冠状动脉介入诊疗中造影剂对肾功能的影响和引起造影剂肾病的危险因素及其防治。方法:收集我院接受冠状动脉造影检查和经皮冠状动脉介入治疗患者1 056例,术前血肌酐水平均正常。选用非离子型低渗造影剂碘海醇,于介入诊疗前及后第二、五天分别检查肾功能指标,分析造影剂肾病的危险因素及预防、治疗的方法。结果:25例发生造影剂肾病,发生率为2.4%。造影剂肾病组中合并糖尿病者达17/25,非造影剂肾病组为263/1 031,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。平均造影剂剂量造影剂肾病组为(130±12)mL,非造影剂肾病组为(80±14.0)mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。平均术前补液量造影剂肾病组为(250±50)mL,非造影剂肾病组为(350±100)mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:造影剂可引起一过性肾功能改变,造影剂肾病与糖尿病、造影剂用量和补液量有关。

参苓白术辅助治疗对老年溃疡性结肠炎伴脓血便患者临床疗效及免疫功能的影响

目的:探讨参苓白术辅助治疗对老年溃疡性结肠炎伴脓血便患者临床疗效及免疫功能的影响。方法:选取于我院进行治疗的老年溃疡性结肠炎伴脓血便患者50例,随机分为实验组与对照组,每组25例。对照组患者给予柳氮磺吡啶结肠溶胶囊进行治疗,实验组患者在对照组的基础上联合使用参苓白术丸进行治疗,两组患者均治疗3个月,比较两组患者治疗前后血清白介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)及白介素-10(IL-10)水平,并评价两组患者的临床疗效。结果:与治疗前相比,两组患者治疗后的血清IL-2、IFN-γ水平均显著降低,IL-10明显升高;与对照组相比,实验组患者血清IL-2、IFN-γ水平较低,IL-10水平更高(P<0.05);且与对照组相比,实验组患者的临床总有效率较高(P<0.05)。结论:参苓白术散能有效改善老年溃疡性结肠炎伴脓血便患者的免疫功能并提高其临床疗效。