反向遗传操作技术在瘟病毒属研究中的应用

反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提供参考。

基于CDIO的药剂学实验教学设计

分析动物药学专业传统的药剂实验教学中存在的问题与不足,基于CDIO工程教育理念,从实验方法、实验内容、考核方法等方面对传统的药剂学实验设计进行全面系统地改进,以期为实现药剂学实验课程的高效施教提供方法借鉴。

鹿尾蛋白与多肽制备工艺优化及其对TM3细胞增殖活性研究

以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、提取温度40℃,在此条件下蛋白含量为60.72%±0.56%;水酶法提取多肽工艺中最佳蛋白酶为胰蛋白酶,酶解最佳条件为pH8、加酶量1500 U/g、酶解时间4 h、提取温度50℃,在此条件下水解度为22.85%±0.35%。水酶法提取鹿尾多肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性优于超声水提鹿尾蛋白。

植物精油的抑菌作用研究进展

近年来,随着细菌/真菌感染率大幅度上升,食源性疾病的全球发病率不断增多,而伴随致病菌耐药性的出现,现有抗菌药物的抑菌效果越来越有限,并对机体产生较大的毒副作用。精油系植物提取物的主要有效组分具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和抗菌等多重药理作用,其显著的抗细菌和抗真菌活性对于解决食品中日渐增多的耐药性细菌/真菌感染问题有着重要意义。论文对植物精油抑菌作用进行阐述,并详细地分析精油主要成分含量的影响因素,为更好的利用精油提供参考,同时为保障食品安全及相关研究提供科学依据。

水貂阿留申病毒诱导CrFK细胞凋亡信号通路的研究

本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同)通过分光光度法检测试剂盒检测Caspase-8、Caspase-9的活性;利用western blot检测Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。采用Caspase-8和Caspase-9抑制剂处理CrFK细胞后感染AMDV G株,于不同时间检测Caspase-3的活性。于AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间,利用荧光定量PCR检测细胞中死亡受体通路分子Caspase-8、Fas、FasL和线粒体通路分子Caspase-9、Bax、Bcl-2、Cyt C以及凋亡执行因子Caspase-3的mRNA转录水平;采用JC-10线粒体膜电位试剂盒检测各时间点细胞线粒体膜电位的去极化情况。结果显示,AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8的活性均无明显变化,而Caspase-9的活性则随感染时间的延长而明显增强;western blot结果显示,Caspase-8蛋白的表达不受影响,而Caspase-9在AMDV感染后12 h被切割活化。Caspase-3活性的检测结果显示,抑制CrFK细胞中Caspase-8的活性后再感染AMDV,Caspase-3的活性逐渐增强,而抑制细胞中Caspase-9的活性后再感染AMDV,则Caspase-3的活性无明显变化,即抑制了Caspase-9再感染AMDV并不能诱导细胞凋亡;荧光定量PCR结果显示,AMDV感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8、Fas、FasL基因的转录水平均无明显变化,而Caspase-9、Caspase-3、Cyt C基因mRNA转录水平及Bax/Bcl-2的比值则随感染时间的延长而逐渐升高。线粒体膜电位结果显示,AMDV感染的CrFK细胞线粒体膜电位下降,发生了明显去极化现象,表现为细胞发生了凋亡。综上,本研究首次证实AMDV G株感染CrFK细胞后激活了线粒体途径的细胞凋亡执行分子Caspase-3及线粒体通路相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9和Cyt C,并未激活死亡受体通路相关分子,AMDV G株是通过激活细胞线粒体通路而诱导CrFK细胞的凋亡。本研究为AMDV感染CrFK细胞凋亡机制的研究奠定了基础。

HRM技术在梅花鹿茸及其混伪品药材鉴定中的应用

目的采用高分辨率熔解曲线技术(HRM),基于SRY序列对梅花鹿茸及相关混伪品药材进行快速鉴别,为规范市场药材管理提供一个新的分子检测手段。方法购买梅花鹿茸及相关鹿茸药材进行DNA提取,选择SRY序列为鉴别序列,在退火温度为57℃,40个循环数的条件下,建立正品梅花鹿茸的熔解曲线模型,并对其DNA模板浓度、引物浓度进行筛选得到适宜范围。结果在DNA质量浓度为10~100 ng·μL-1、引物浓度为10μmol·L-1的条件下,正品梅花鹿茸药材的熔解曲线Tm值为(82.77±0. 03)℃。应用该方法检测市场随机收集的10份鹿茸产品,通过比较分析7份为正品梅花鹿茸,3份为驯鹿茸。进而将其PCR产物进行测序,加以验证。结论 HRM方法稳定、灵敏、重现性好,可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材鉴定。

水貂阿留申病毒感染过程中主要分子蛋白作用机理研究进展

水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由AMD病毒(AMDV)感染水貂引起的自身免疫系统功能紊乱,并引发自身免疫的慢性、传染性疾病,在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失[1-2]。由于其特殊的致病机制和抗体依赖性增强作用(ADE)[3-4],尚无预防该病的商业疫苗。目前主要通过检疫淘汰病貂来净化貂厂,但该方法无法从根本上杜绝该病的发生发展。因此国内外对AMDV致病机制进行了大量研究,结果表明AMDV中参与ADE的结构蛋白、负责调控病毒复制的非结构蛋白及宿主的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspases)在致病机制中具有重要作用。本文对AMDV感染过程中各主要分子蛋白的相关调控进行阐述,以期为AMDV的致病机理以及进一步研究和防治AMD奠定理论基础。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究

为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。

生物效应评价在中药质量控制研究中的应用进展

建立科学的中药质量控制与评价方法是保障中药安全、有效的关键点和难点。现有的中药质量控制与评价方法存在诸多的局限性,不能实现真正意义上的有效评价。在现有中药质量评价体系的基础上,结合生物效应评价方法,能实现中药质量控制及评价的科学性,为中药的现代化提供必要的技术支持。对生物效应评价法的特点、优势及构建进行了分析与总结,归纳了具有活血化瘀、宣肺及抑菌、抗炎等生物活性中药的生物效应评价方法,为建立科学的中药质量控制与评价方法提供借鉴。

不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响

为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。

抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选

为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。

黄芩苷药代动力学研究进展

黄芩是中国的传统中药材，其主产于河北、山东等地，具有解热、抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用。黄芩苷是黄芩的主要活性成分，但是黄芩苷生物利用度低，制约了黄芩在临床上的使用。近年来，国内外对黄芩苷在体内代谢动态规律开展了大量研究，该文通过对黄芩苷及其复方药物中黄芩苷的药代动力学研究进展进行综述，并总结黄芩苷研究现状，旨在为黄芩苷进一步的研究提供科学依据。

中药外源性污染物检测技术的现代研究

中药外源性污染物残留现已成为引起中药不良反应的重要原因之一,按照其来源不同主要包括农/兽药残留、重金属污染、真菌毒素残留、病原微生物污染及其他有机污染物残留。对中药的主要外源性污染物的检查对象及检测方法的现代研究进行综述,为补充、完善、提升中药质量安全体系提供参考和依据。

黄芩苷药理作用研究进展

黄芩属于传统中药唇形科植物,具有抗癌、抗病毒、抗氧化等药理作用。黄芩苷是黄芩的主要活性成分,也是指标性成分,具有广泛的药理作用。文章总结近几年研究的黄芩苷药理作用及作用机制并进行阐述,根据黄芩苷的性质、药理作用、作用机制及治疗疾病的作用靶点等角度为今后更深入的研究黄芩苷药理作用及临床应用提供思路与方向,为进一步的利用和开发更多的治疗人畜共患疾病制剂提供参考。

牛传染性鼻气管炎疫苗的研究进展

牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)即牛疱疹病毒1型(BoHV-1)感染所引起的一种高度接触性传染病。该病给我国养牛业带来了巨大的经济损失。由于缺乏有效的治疗性药物,疫苗免疫仍然是防控该病的有效措施。当前,牛传染性鼻气管炎疫苗主要包括灭活疫苗、弱毒疫苗2种常规疫苗和亚单位疫苗、DNA疫苗、IBRV基因缺失疫苗、病毒活载体疫苗4种基因工程疫苗,各种疫苗各有优点。现对上述疫苗的最新研究进展进行综述,以期为IBRV疫苗的研究与开发提供参考。

药物抗牛病毒性腹泻病毒的研究进展

目前,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染尚无特异性的预防疫苗、治疗方法和抗病毒药物,开发针对牛病毒性腹泻的新型有效药物势在必行。然而,药物抗BVDV的作用机制及靶点不够明确,应用于治疗动物疾病是否有效没有针对性研究,一直以来是制约开发更多的抗BVDV药物的瓶颈问题。文章总结了BVDV侵染细胞机制、药物抗BVDV作用途径,对药物抗BVDV作用进行阐述,以期为药物抗BVDV作用机制研究提供参考,为开发更多有效、低毒、无耐药性的药物提供思路与借鉴。

猪伪狂犬病病毒变异株在国内的研究进展

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的猪病毒性传染病。免疫接种疫苗是防控伪狂犬病的有效途径之一,但是近年来在我国很多地区的伪狂犬病疫苗免疫猪群中接连暴发了新的伪狂犬病疫情,主要原因是由于伪狂犬病病毒发生了新的变异,新的PRV流行变异株与传统的PRV相比抗原性已发生较大变化。本文从PRV的特征、PRV变异株流行情况、PRV变异株主要毒力蛋白及其遗传变异、PRV变异株疫苗的研制及PRV感染的防控等方面进行阐述,旨在为PRV流行变异株的防控提供参考。

水貂阿留申病毒研究进展

水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性、进行性传染病,是危害世界养貂业的重要疫病之一。由于AMDV具有抗体依赖性增强作用和特殊的致病机制,目前尚未开发出有效的疫苗。本文从AMDV的起源、遗传进化、宿主范围、传播途径和病毒的复制机制等几方面对AMDV的研究现状进行探讨,为今后AMD的致病机制及防控的研究提供参考。

水貂阿留申病毒诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡

为研究水貂阿留申病毒(AMDV)在体外诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡情况,用AMDV-G株感染CrFK细胞,采用CCK-8法检测CrFK细胞感染后的细胞存活率,用AO/EB染色法检测CrFK细胞核的形态变化,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过分光光度计法检测细胞凋亡执行分子Caspase-3活性。结果显示,AMDV-G株感染可导致CrFK细胞增殖率下降,产生明显的形态学凋亡特征;流式细胞术检测结果显示,AMDV-G株感染可引起CrFK细胞凋亡并随着感染时间的延长凋亡率增加,同时Caspase-3活性显著升高。上述结果表明,AMDV-G株在体外能够诱导CrFK细胞凋亡,为进一步研究AMDV致病机理奠定基础。