黄鳝生殖发育不同时期性腺差异蛋白的初步研究

提取黄鳝从雌性性逆转发育为雄性过程中7个不同生殖发育时期生殖腺的总蛋白,通过考马斯亮蓝染色扫描分析,选出在相对分子质量17附近的一条蛋白带进行基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱分析(MAL-DI-TOF),搜库显示与其匹配的蛋白为二磷酸核苷激酶(Nucleoside diphoshate kinase,NDPK).该蛋白带的表达由雌性发育→雄性发育呈现逐渐减弱的趋势,在黄鳝的性腺发育中,NDPK可能参与了黄鳝生殖腺的性逆转过程.

ERK/JNK在黄鳝雌、雄发育阶段生殖腺中的表达和定位

为探讨MAPK家族中ERK和JNK两个主要亚族在黄鳝雌、雄发育阶段生殖腺中的表达状况,应用蛋白质免疫印迹杂交技术和免疫组织化学法检测了ERK、JNK在黄鳝卵巢组织和精巢组织中的表达和定位。蛋白免疫印迹杂交显示:ERK在黄鳝雌、雄性腺组织中均有强的表达;JNK在性腺中的表达总体上弱于ERK,JNK1在精巢组织中的表达比卵巢组织显著降低,但JNK2在雌、雄性腺组织中的表达无明显差异。在免疫组织化学的观察中,ERK和JNK在卵原细胞和精原细胞中均为阳性反应,且定位相似:细胞质及细胞核核质呈阳性反应,核仁阴性。随着卵母细胞生长和成熟,ERK和JNK在卵母细胞胞质中阳性反应逐渐减弱。实验结果提示,ERK和JNK在黄鳝卵巢发育。

三倍体鲫鱼早期胚胎发育观察

以异源四倍体鲫鲤为父本，二倍体金鱼为母本通过倍间杂交形成三倍体鲫鱼．对三倍体鲫鱼早期胚胎发育过程进行了观察．三倍体鲫鱼成熟卵子呈黄色，圆形，有粘性，卵径为1．3—1．4mm．水温为（20±1）℃情况下，卵子受精后1h，卵裂开始．受精后在-3h时间段内进行卵裂．受精后3．50h逐渐进入早、中、晚囊胚期，受精后10h进入原肠期，受精后15．50h进入神经胚期，19．0h后器官开始形成．受精后63—75h，仔鱼孵化出膜．另外，对三倍体鲫鱼受精卵进行切片观察，结果表明：三倍体囊胚期细胞分裂旺盛，原肠期细胞表现出正常的细胞分裂、细胞变形和迁移行为．结合三倍体鲫鱼胚胎外观发育观察，说明三倍体鱼具有正常的早期胚胎发育过程，为三倍体鱼的大规模生产提供了胚胎发育的生物学依据．

雌核发育鲫鲤早期胚胎发育观察

雌核发育二倍体鲫鲤第二代(G2)产生的卵子经紫外线灭活的散鳞镜鲤精子的诱导,无需染色体加倍处理,可以发育成为雌核发育鲫鲤第三代(G3).描述了G3的早期胚胎发育过程.雌核发育鲫鲤的卵为粘性卵,色素含量高,在(19±1)℃水温下,受精后70 min第一次卵裂,原肠晚期统计受精率为37.36%,约89 h后,受精卵开始脱膜,约106.5 h后,胚体完全脱膜,最终统计孵化率为26.11%.

四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫染色体减数分裂观察(英文)

用精巢细胞直接制片法观察了异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和二倍体红鲫、湘江野鲤精母细胞染色体第一次减数分裂中期配对情况 ;作为对照 ,观察了上述四种鱼肾细胞的有丝分裂中期染色体。在精母细胞第一次减数分裂中 ,异源四倍体鲫鲤同源染色体两两配对 ,形成 10 0个二价体 ,没有观察到单价体、三价体和四价体 ;三倍体湘云鲫精母细胞形成 5 0个二价体和 5 0个单价体 ;红鲫和湘江野鲤精母细胞分别形成 5 0个二价体。肾细胞检测表明异源四倍体的染色体数目为 4n =2 0 0 ;湘云鲫为 3n =15 0 ;红鲫和湘江野鲤分别为 2n =10 0。减数分裂时染色体分布情况与肾细胞染色体检测结果相吻合。具有四套染色体的异源四倍体鲫鲤在减数分裂中只形成 10 0个二价体 ,而不形成 2 5个四价体或其它形式 ,为产生稳定一致的二倍体配子提供了重要的遗传保障 ,也为人工培育的异源四倍体鲫鲤群体能够世世代代自身繁衍下去提供了重要的遗传学证据。三倍体湘云鲫在减数分裂过程中出现二价体、单价体共存 ,同源染色体在配对和分离中出现紊乱 ,导致非整倍体生殖细胞的产生 。

整合素CD29/CD49/CD90在天然性逆转黄鳝雌雄生殖腺中的表达状况

整合素是细胞黏附分子家族中的一员,参与调节细胞的生长、增殖与分化.黄鳝是一种雌性先熟的雌雄同体鱼类,其性逆转发育机制亟待研究.应用免疫组化方法探讨CD29,CD49,CD90 3种整合素分子在黄鳝雌、雄性发育中的表达状况.研究结果表明,CD29,CD49,CD90在雌性生殖腺各级卵母细胞中均不表达,位于生殖褶边缘的性原细胞中可见表达;在雄性生殖腺的初级精原细胞中表达,但在成团分布的次级精原细胞、各级精母细胞中均未表达.

黄鳝成体性腺组织生殖干细胞的体外培养及鉴定

通过黄鳝成体性腺组织的体外培养，探讨黄鳝成体性腺生殖干细胞体外分离培养与鉴定的方法．分离黄鳝性腺组织进行植块培养，倒置相差显微镜下观察细胞生长状况．利用H．E、油红0染色、碱性磷酸酶（AP）细胞化学染色等方法对培养细胞进行鉴定．黄鳝成体性腺组织原代培养3～5d，可见组织周围有细胞迁出，并形成生长晕．15d左右，生长晕直径可达3～3．2mm，生长晕中的细胞主要包括：成纤维细胞、神经样细胞、类生殖干细胞三种类型．成纤维细胞呈不对称的长梭形，突起短而多，细胞核较浅，核仁明显，有2～3个核仁，是生长晕的主要细胞成分．神经样细胞具有放射丝状细胞突起，油红O染色呈阳性反应．类生殖干细胞呈圆形，单核或多核，核质比大，AP染色呈现出阳性反应．探索了适于黄鳝成体性腺组织体外培养的条件和方法，并对原代培养的细胞进行了初步鉴定，为进一步利用体外培养的黄鳝成体性腺生殖干细胞开展黄鳝性逆转分子机制研究奠定了基础．

重要转录因子FoxO3a在斑马鱼性腺中的表达分析

FoxO蛋白作为Forkhead Box家族的重要一员,在动物的生长发育、细胞分化、代谢、免疫和凋亡等方面起重要作用,研究发现FoxO蛋白是哺乳动物卵泡发育的重要调节因子.通过检测雌雄斑马鱼性腺中foxo3a基因的表达情况,初步研究FoxO在鱼类生殖发育中的作用.PCR和蛋白免疫杂交结果都显示foxo3a基因在斑马鱼雌性性腺中的表达量要明显高于雄性.这一结果提示,foxo3a基因在斑马鱼的卵巢发育中可能发挥重要作用.

Helq对干细胞多能性影响的研究

目的探讨Helq缺失是否影响干细胞的多能性。方法利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得Helq敲除的胚胎干细胞。结果免疫荧光染色结果显示敲除Helq后,Oct4及Nanog的表达与对照组相比无明显差异,通过四倍体补偿实验证明胚胎干细胞的多能性不受影响。同时我们利用Helq敲除的胚胎干细胞继续进行体外分化,最终可以得到Day2的上胚层样细胞。通过免疫染色及real-time PCR分析,结果表明Helq敲除的胚胎干细胞分化为上胚层细胞液无明显异常。结论 Helq缺失不影响多能性干细胞的多能性。

体细胞重编程研究进展及前景展望

体细胞重编程是指已分化的体细胞通过体细胞核移植或转录因子诱导等手段重建其表观遗传标记,恢复胚胎期多能性或全能性状态的过程。由于这一发现革新了人们对发育生物学的理解,同时具有良好的应用前景,今年的诺贝尔生理或医学奖授予了在该领域做出创造性贡献的两位科学家——约翰·戈登(John Gurdon)和山中伸弥(Shinya Yamanaka)。目前广泛使用的体细胞重编程手段主要有体细胞核移植和诱导多能性干细胞。由于诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)能够分化为机体所有的细胞类型,因此,在药物筛选、疾病病理学研究、细胞替代治疗等领域具有重要的应用价值和前景。本文将简要回顾这一领域的发展过程,并讨论本领域未来面临的主要问题。