中药双联用复方对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用研究

筛选单用抑菌作用较强的6种中药药材,依据棋盘法设计15种双联用复方,采用超微药粉琼脂稀释法测定各系列浓度组合的复方对养殖鳗鲡18株常见致病菌的抑制作用.实验结果表明,15种双联用复方对18株致病菌中绝大多数菌株的抑制作用比6种中药单用的抑菌作用强,呈现协同效应(FIC≤1)的比例占85.7%,其中显著协同(FIC≤0.5)占20.4%;复方抑菌作用未发生变化(1<FIC<2)的占11.1%;仅3.2%出现拮抗作用(FIC≥2).说明,合理的中药联用可提高中药单用对致病菌的抑制作用,降低复方中单个中药的抑菌浓度.

氟苯尼考对鳗鲡常见致病菌体外抗菌后效应研究

采用试管液体二倍稀释法测定氟苯尼考对鳗鲡养殖中常见主要致病菌(肠杆菌B01、克雷伯氏菌B12、豚鼠气单胞菌B15和嗜水气单胞菌B20)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),用菌落计数法分别测定氟苯尼考在0.5、1、2、4倍于各菌MIC时对鳗鲡致病菌株B01、B12、B15、B20体外抗菌后效应(PAE)。结果氟苯尼考在0.5、1、2、4倍MIC值时对鳗鲡致病菌株B01、B12、B15、B20均具有一定的PAE,且PAE与药物浓度在一定范围内(0.5-4倍MIC)呈剂量依赖关系,当药物浓度达4倍MIC时,PAE明显延长,分别为2.5±0.165、3.0±0.038、5.0±0.090和5.0±0.232h;氟苯尼考对B01、B12、B15、B20的PAE值在2倍MIC时差异较显著,在4倍MIC时对致病菌株B15和B20的PAE几乎无差异。相同浓度氟苯尼考对致病菌株B01和B12的PAE值明显低于B15和B20。结果提示在养殖鳗鲡病害防治中设计投药方案时,对常见致病菌B01、B12、B15和B20感染所造成的细菌性败血症、烂鳃、肝胆肿大等疾病,除了考虑药代动力学和MIC指标外,还需考虑PAE因素,可适当延长给药间隔时间,降低药物对鳗鲡的副作用及对其摄食量和生长的负面影响。

六种中药及其复方对鳗鲡致病性气单胞菌的体外抑制作用

针对病鳗内脏中分离的5株致病性气单胞菌,采用琼脂稀释法测定五倍子、石榴皮、大黄、虎杖、黄芩及黄连各味中药的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);再根据棋盘法设计15种双联用药方和4种三联用药方,同样检测各组合配方的抑菌作用。实验结果表明,6味中药对养殖鳗鲡5株致病性气单胞菌均有不同程度的抗菌效果,其中五倍子的抑菌作用最强,其次是大黄和石榴皮,而黄连的抑菌效果最差;15种双联用药方较各味中药单用的抑菌活性绝大多数出现增强,抑菌浓度至少减低39%,FIC<1呈现协同效应的比例占85.7%,其中FIC≤0.5表现显著增强抗菌活性的协同比例占23.3%;4种三联用药方对5株致病性气单胞菌均具有显著的协同抑制效应,复方中单味中药的抑菌浓度可以降低80%以上;而双联用HC14对4株致病菌出现FIC≥2的降低彼此抗菌活性的相互拮抗现象。由此说明合理运用不同中药的联用配伍,不仅可提高单味中药的抗菌疗效,而且大大减少了单一中药在实际养殖生产中的给药浓度,降低药物在环境中的残留量,防止残留药物造成环境污染,并且降低用药成本,提高水产养殖业的经济和社会效益。研究为中药复方防治细菌性鱼病提供科学理论参考。

4种中药三联用对鳗鲡致病菌的抑制作用

应用超微粉碎法将虎杖、石榴皮、大黄以及五倍子4种中药进行加工处理至粒径为5～10μm后,组成4个三联用的中药复方,针对近年来从福建各地养殖场病鳗中常检测到的9株致病菌,采用琼脂稀释法测定其抑菌最低浓度。试验结果表明:虎杖、石榴皮、大黄和五倍子组合的4个中药复方对9株养殖鳗鲡主要致病菌均有一定的协同抑制作用,其协同效应因子FIC范围在0.38～0.76。其中,联用效果最好的是复方1,所联用的3种中药对9株致病菌均具有显著协同抗菌效应,FIC≤0.5。每个复方的联用3种中药的最低抑菌浓度均比单用浓度降低了79%以上,不但可大大降低用药量,而且用药成本比单用节省47%以上。

中药对鳗鲡病原菌的体外抑制作用

研究虎杖、石榴皮、大黄、黄芩、五倍子、黄连、冬凌草、独活、贯众、木贼草等10种中药材单用和五倍子、大黄、石榴皮、虎杖、黄芩、黄连两两联用(15种配方)对从养殖病鳗中分离得到的12株常见病原菌的抑菌作用。结果表明:中药单用对病原菌均有不同程度的抑制作用,其中,五倍子的抑菌作用最强,其次是大黄和石榴皮,木贼草的抑菌作用最差;中药联用呈现协同效应(FIC<1)的占68.3%,其中有显著协同效应(FIC≤0.5)的占26.0%,与中药单用相比,中药联用对大多数病原菌的抑制作用增强,且可大大减少单一中药的给药浓度。

基于16S rDNA序列和RFLP分析的病鳗分离菌株鉴定

结合16S rDNA基因序列和限制性片段长度多态性(RFLP)的分析方法,通过与GenBank库中已递交的细菌16S rDNA基因序列进行同源性比较,对分离自发病鳗鲡(欧洲鳗鲡,日本鳗鲡和美洲鳗鲡)的30株细菌进行初步鉴定和分类.结果表明,这些细菌可大致分为气单胞菌属(Aeromonas sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、邻单胞菌属(Plesiomonas sp.)、克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)和肠杆菌属(Enterobacter sp.)等7个菌属.分析认为,部分分离菌株可能是引起鳗鲡病害的疑似致病性菌株.

氟苯尼考与中药联用对养殖鳗鲡主要病原菌的体外抗菌活性分析

为了筛选出防治养殖鳗鲡细菌性疾病的中西药联用药方,利用超微粉碎机将黄连、黄芩、虎杖、石榴皮、大黄及五倍子6种中药研磨成粒径为5～10μm的药粉后,分别与氟苯尼考配制成6种中西药联用药方,针对本研究室近年从养殖病鳗中分离到的18株常见病原菌,采用超微药粉琼脂稀释法测定各药方的体外抑菌效应。结果显示:6种中西药联用药方对18株养殖鳗鲡常见病原菌均有不同程度的抑制效应,其联用FIC指数的范围为0.38～3.00。表明采用中西药联用,不仅可以提高抗菌药效,还可以大大减少氟苯尼考在养殖生产中的使用,从而减少对环境的污染和耐药菌株的产生。

五倍子对鳗鲡4株常见病原菌的体外抗菌后效应

采用试管液体二倍稀释法测定中药五倍子对鳗鲡养殖中常见主要致病菌（肠杆菌B01、迟缓爱德华氏菌B09、豚鼠气单胞菌B18和嗜水气单胞菌B27）的最小抑菌浓度（MIC）。然后再采用菌落计数法分别测定五倍子在0.25、0.5、1、2、4倍于各菌MIC时对鳗鲡病原菌株B01、B09、B18、B27的体外抗菌后效应（PAE）。结果显示：五倍子在0.25、0.5、1、2、4倍MIC值时对鳗鲡病原菌株B01、B09、B18、B27均具有一定的体外抗菌后效应,且PAE与药液浓度在一定范围内（0.25~4倍MIC）呈剂量依赖性,当药液浓度达4倍MIC时,PAE明显延长（P〈0.05）;五倍子对各病原菌株B01、B09、B18、B27的PAE值在1倍MIC浓度以上差异显著（P〈0.05）,在4倍MIC时对于病原菌株B01和B18的PAE之间差异较小。结论：实验结果提示在养殖鳗鲡病害防治中设计投药方案时,对主要致病菌B01、B09、B18和B27感染所造成的烂鳃、肝胆肿大、败血症等疾病,除考虑药代动力学和MIC指标外,还应考虑PAE因素,可适当延长给药间隔时间,降低药物对鳗鲡的副作用及对其摄食量和生长的负面影响。

五倍子对鳗鲡致病性气单胞菌的体外抗菌后效应

采用试管液体二倍稀释法测定中药五倍子对鳗鲡养殖中致病性气单胞菌(威隆气单胞菌K17、肠棕气单胞菌G03、豚鼠气单胞菌R37和嗜水气单胞菌G06)的最小抑菌浓度(MIC)。然后再采用菌落计数法分别测定五倍子在0.25、0.5、1、2、4倍于各菌MIC时对鳗鲡4株致病性气单胞菌K17、G03、R37、G06的体外抗菌后效应(PAE)。结果显示:五倍子在0.25、0.5、1、2、4倍MIC值时对鳗鲡4株致病性气单胞菌均具有一定的PAE,且PAE与药液浓度在一定范围内(0.25～4倍MIC)呈剂量依赖性,当药液浓度达4倍MIC时,PAE明显延长(P<0.05);五倍子对各致病菌株K17、G03、R37、G06的PAE值在1倍MIC浓度以上差异显著(P<0.05),在4倍MIC时对于致病菌株K17和R37的PAE之间差异较小。结论:试验结果提示,在养殖鳗鲡病害防治中设计投药方案,选用中药五倍子治疗由致病性气单胞菌感染所造成的烂鳃、肝胆肿大、败血症等疾病时,除了考虑药代动力学和MIC指标外,还应考虑PAE因素,可适当延长给药间隔时间,降低药物对鳗鲡的副作用及对其摄食量和生长的负面影响。