生长激素调控免疫细胞功能的研究进展

生长激素（ Growth hormone ，GH）是下丘脑垂体前叶嗜酸细胞分泌的蛋白质激素，其主要生理功能是促进除神经组织以外的所有其他组织的生长；促进机体的合成代谢以及蛋白质的合成；促进脂肪的分解；对胰岛素有拮抗作用；抑制葡萄糖的利用等作用。 GH能刺激骨关节软骨和骨骺软骨生长，因而能使身高增加。早在1930年， Smith发现切除大鼠的垂体后，胸腺开始萎缩，首次提出了内分泌系统对免疫系统的影响。1977年Besedovsky提出神经内分泌免疫网络理论之后， GH和免疫系统之间的关系引起了众多学者的关注。现已证实免疫细胞表面存在GH受体，并且免疫细胞也可分泌GH。本文就近年来GH对免疫细胞功能调节作用的研究进展做一综述。

信号转导与转录激活因子和肿瘤微环境对自然杀伤细胞功能及免疫监视影响的研究进展

自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,通过细胞毒作用直接杀伤病毒侵染及恶性肿瘤转化的细胞,从而发挥机体的免疫监视功能,肿瘤细胞扩散转移是肿瘤治疗所面临的主要临床问题之一。NK细胞介导的免疫监视能有效防止肿瘤转移。本文主要对NK细胞的抗肿瘤作用、微环境对NK细胞杀伤功能的调控、信号转导与转录激活因子对NK细胞功能的影响进行综述,以期为后续NK细胞抗肿瘤的临床应用提供参考。

Tax基因表达细胞系的建立及其生物学活性的初步研究

本研究旨在建立成人T细胞白血病病毒-1(HTLV-1)的tax基因表达细胞系,并对其生物学特性进行初步研究。利用脂质体将真核表达载体pCMV-tax和空载体pCMV-neo-Bam转入T淋巴细胞系(JurkatE 6-1)细胞,用G418筛选出稳定表达tax基因的T细胞系TaxP和表达tax阴性细胞系TaxN。用RT-PCR检测LAT、SLP-76、ZAP-70和NF-κB(p65)mRNA的表达。将pNF-κB-Luc报告基因质粒分别转染入TAX蛋白阳性和空载细胞后,检测细胞内NF-κB的活性。用流式细胞仪检测CD25,CD69分子的表达。结果表明:用G418筛选出稳定转染tax基因的Jurkat细胞株,经检测RNA转录水平获得了tax稳定表达的转染细胞;RT-PCR显示,与TaxN细胞LAT相比TaxP细胞的ZAP-70,SLP-76和NF-κB表达增高(p<0.05);pNF-κB-Luc报告基因检测显示,TaxP细胞中NF-κB的活化程度明显提高(p<0.01);流式细胞仪检测显示,TAX能够促进T细胞表面CD69,CD25分子的表达。结论:建立了tax基因表达细胞系,TAX蛋白能够促进T细胞的活化和激活NF-κB通路。

Copeptin在心肌梗死及脑卒中诊断中的研究进展

心肌梗死和脑卒中的高发病率、病死率及致残率给人们的生活带来严重影响,及时的诊断有助于临床医师准确评估病情的危险程度,并选择合适的治疗方法。越来越多新的标志物被用来预测急性心肌梗死和脑卒中的发生,生物标志物有助于疾病的及时诊断和高危患者的治疗。Copeptin作为一种新的、可用来作为心血管系统疾病、呼吸系统疾病及其他压力相关性疾病的诊断及预后预测指标,越来越受到国内外学者的关注,也成为目前生物医学领域研究的热点。本综述主要论述了copeptin在心肌梗死及脑卒中诊断中的预测价值,并简要总结了在生物医学领域使用copeptin代替精氨酸血管加压素的最新研究进展。

诱骗受体3与肿瘤关系的研究进展

诱骗受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体超家族新成员,是一种可溶性受体,在一些疾病尤其是恶性肿瘤中过表达,与死亡受体3(DR3)相反,DcR3缺乏死亡结构域。过去对于DCR3的研究集中肿瘤,即DcR3可阻断细胞的凋亡进而造成免疫逃逸和化疗耐受,近来对于DcR3的研究多集中于炎症,以及DcR3及其类似物在特定疾病如自身免疫性疾病中的预防和治疗作用,本文综述了DcR3在肿瘤、炎症及其临床应用中的研究进展。

人IL-16重组腺病毒对Hela细胞中HPV18病毒蛋白表达的影响及凋亡机制的研究

目的探讨人IL-16重组腺病毒对Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法用IL-16重组腺病毒感染Hela细胞后,不同时间收获细胞。MTT法检测细胞增殖,藻红蛋白标记的annexin V和7-氨基放线菌素D联合染色(annexin V-PE/7-AAD)结合流式细胞术检测感染后Hela细胞的凋亡、Western blot法检测Hela细胞中HPV病毒相关蛋白p16、E7以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果 MTT法结果证明IL-16腺病毒感染的Hela细胞增殖受到明显抑制;流式细胞术检测结果表明细胞凋亡增加,Western blot法证实HPV病毒相关蛋白P16、E7表达降低,Bax蛋白表达量增强,而Bcl-2蛋白表达量减弱,且呈现一定程度的时间依赖性。结论人IL-16重组腺病毒可通过下调Bcl-2蛋白的表达和上调Bax蛋白的表达诱导Hela细胞凋亡。

PI3K/Akt/mTOR信号传导通路与成人T淋巴细胞白血病关系的研究进展

成人T淋巴细胞白血病(ATL)是严重危害人类健康的一种疾病,它是由与H IV类似的逆转录病毒HTLV-I感染CD4+T细胞而诱发的恶性肿瘤。HTLV-Ⅰ导致ATL中起主要作用的是Tax蛋白,其反式激活作用占有重要地位,它可以激活PI3K/AKT/mTOR信号途径。PI3K/Akt/mTOR被认为是蛋白质合成的主要信号调节通路,研究表明该信号传导通路是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一,其在成人T淋巴细胞白血病的发生、发展治疗及转归中发挥重要作用,并且已经成为治疗的新靶点。本文就PI3K/Akt/mTOR信号传导通路以及与ATL关系的研究进展作如下综述。

肥胖状态下不同组织细胞与自噬关系的研究进展

近年来越来越多的关注投向肥胖与自噬之间关系的研究,肥胖状态下机体不同组织细胞中的自噬发挥不同的作用。脂肪细胞特异性自噬基因Atg7和Atg5被敲除后脂滴积累减少,胰岛素抵抗得到改善;肝细胞中增加自噬可以提高其代谢功能:胰岛β-细胞中自噬缺陷可损伤细胞功能:适宜的自噬水平对维持骨骼肌内环境的稳态至关重要。

巨噬细胞在肾损伤中作用的研究进展

巨噬细胞浸润在各种肾脏疾病中是一把双刃剑,决定肾组织损伤和修复的结局。巨噬细胞具有高度的异质性,局部微环境不同,巨噬细胞可极化为M1型或M2型。M1型巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)和活性氧(ROS)等炎症介质,引起肾组织炎症和肾纤维化;相反,M2型巨噬细胞释放白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)等抗炎介质,抑制肾脏炎症而促进肾纤维化。不同表型的巨噬细胞在肾损伤和修复过程中发挥的不同作用,了解肾脏局部微环境中决定巨噬细胞表型和功能的因素,可为治疗肾病寻找到新的靶点,为肾病患者提供一条新的生物替代疗法。

自噬与天然抗病毒免疫反应的相互调节

机体内天然免疫系统可通过多种机制抵御病毒感染,近来发现自噬也可有效抵御感染细胞的病毒颗粒。病毒感染可以通过模式识别受体促进自噬,这些受体位于细胞膜和细胞质中,是细胞天然免疫反应的启动器。自噬能调节模式识别受体介导的天然抗病毒反应,在维持免疫稳态中发挥重要作用。然而,一些病毒在演变过程中建立了逃避自噬或利用自噬逃避抗病毒免疫反应的能力。病毒、自噬与天然免疫反应间相互调节,共同抵御病毒感染,这是目前研究的热点领域。本文旨在概述该领域的最新进展,提出待解的重要问题,为相关研究者提供参考。

熊果酸减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤

目的探讨熊果酸减轻脂多糖诱导的THP-1细胞损伤的作用及其机制。方法以脂多糖诱导的THP-1炎性细胞为模型,MTT法检测不同浓度的熊果酸(0.1、1、5、10、20、40和80μmol/L)对细胞增殖的影响,RT-PCR法检测TLR4、MCP-1和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测MCP-1和IL-6表达,Western blot法检测P65、磷酸化P65蛋白表达,荧光素酶报告系统检测核转录因子κB(NF-κB)活性。结果与对照组比较,LPS作用组能显著增高MCP-1、TLR4、IL-6 mRNA和MCP-1、IL-6、P65、磷酸化P65蛋白的表达并上调NF-κB活性(P<0.05);与LPS单独作用组比较,熊果酸(1和5μmol/L)干预组能够显著降低MCP-1、TLR4、IL-6mRNA和MCP-1、IL-6表达水平并下调NF-κB活性(P<0.05)。结论熊果酸可能是通过下调NF-κB活化减轻脂多糖诱导的THP-1细胞的损伤。

绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和潜在的抗癌特性.本文运用MTT试验,DAPI染色和Annexin V-FITC分析了EGCG对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导.结果表明,EGCG对Hep G2细胞具有明显的增殖抑制作用,存在剂量和时间依赖效应;EGCG能诱导Hep G2细胞凋亡,并具有剂量依赖效应.

人IL-16基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的：构建并鉴定人白细胞介素16（IL-16）的重组腺病毒pad—IL-16表达载体，为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法：分离正常人外周血单个核细胞（PBMC），组胺刺激后提取总RNA，RT-PCR扩增IL—16基因，将其克隆到含有绿色荧光蛋白（GFP）标记的腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV后，再与腺病毒骨架质粒pAdEasy—1共转化BJ5183细菌，获得重组腺病毒载体pAd—IL-16，转染HEK293T细胞包装病毒。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光，测定病毒效价，RT—PCR和Western blot分别分析细胞内IL-16 mRNA和蛋白质的表达。结果：经双酶切及基因鉴定，重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见约400bp插入片段，测序结果和GenBank中的基因序列一致；重组病毒效价为2．8×10^8pfu／mL；重组病毒感染后，HEK293T细胞中IL-16 mRNA和蛋白质均有表达。结论：成功构建IL-16重组腺病毒载体，并可在HEK293T细胞中表达，为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。

IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:研究IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响,为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法:IL-16腺病毒载体转染MT2细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术(FCM)、测定线粒体膜电位和单细胞凝胶电泳等方法,证实MT2细胞增殖抑制和凋亡。结果:用MTT法绘制生长曲线,观察到IL-16腺病毒载体转染的MT2细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6h后出现凋亡片段;进一步用FCM检测细胞周期停滞于G1期,并且出现细胞凋亡;单细胞凝胶电泳发现细胞12h后有明显凋亡DNA拖尾形成;IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24h内逐渐增强,预示细胞凋亡;免疫荧光发现12h自噬相关蛋白LC3,即可在细胞膜上表达,自噬已经开始出现。结论:重组人IL-16腺病毒载体转染MT2细胞,24h内即可诱导MT2细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。

重组人生长激素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化碳产生及Toll样受体4表达的影响

目的研究重组人生长激素(rhGH)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)生成及Toll样受体4(TLR4)表达的影响以探讨rhGH的免疫调节作用。方法采用Griess反应、中性红吞噬实验及RT-PCR法分别测定不同剂量(1、3、25和100μg/L)rhGH作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、吞噬功能及TLR4的表达。结果结果显示3μg/L rhGH可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量及TLR4的表达,增强巨噬细胞吞噬中性红能力。结论rhGH对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产生及TLR4表达有显著的调节作用,这种调节作用呈现剂量相关性,为rhGH的合理应用提供一定的实验基础。

溴隐亭对植物血凝素诱导活化T淋巴细胞的影响

目的研究溴隐亭(BRC)对植物血凝素(PHA)诱导活化T淋巴细胞的影响。方法用泌乳素(PRL)与BRC单独和联合刺激培养PHA诱导活化的CD4+T淋巴细胞系JurkatE6-1细胞,利用实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测活化T淋巴细胞重要信号分子转接蛋白(LAT)、T细胞受体相关的相对分子质量为70000的蛋白激酶ζ链(ZAP-70)mRNA表达变化情况;利用Realtime-PCR方法检测活化T淋巴细胞自身PRLmRNA表达变化情况;利用流式细胞术检测T淋巴细胞活化早期表面标志细胞分化抗原CD25分子表达变化情况;利用脂质体转染荧光素酶报告系统检测T淋巴细胞活化的核转录因子-κB(NF-κB)活性变化情况。结果1.BRC可抑制PHA诱导的T淋巴细胞活化和PRL-泌乳素受体(PRLR)信号转导途径的共同信号分子ZAP-70mRNA及活化T淋巴细胞自身PRLmRNA的表达;2.BRC促进了活化T淋巴细胞信号分子LATmRNA和活化T淋巴细胞表面CD25分子的表达;3.BRC抑制了PHA诱导的活化T淋巴细胞核NF-κB活性。结论BRC可通过抑制T淋巴细胞活化和PRL-PRLR途径中的共同信号分子ZAP-70及活化T淋巴细胞自身PRLmRNA分泌,对T淋巴细胞活化发挥抑制作用。

rhIL-16对Tax 1蛋白阳性细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的探讨rhIL-16对Tax 1蛋白阳性细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法将pCMV-Tax1-Bam质粒稳定转染到Jurkat E6-1细胞后,构建Tax 1基因表达细胞系Tax 1P,用IL-16腺病毒载体转染Tax 1P细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术测定线粒体膜电位等方法,证实Tax 1P细胞增殖抑制和凋亡。结果用MTT法计算细胞生长抑制率,观察到IL-16腺病毒载体转染的Tax 1P细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6 h后出现凋亡片段;进一步用流式细胞仪检测细胞周期停滞于G1期,IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24 h内逐渐增强,预示细胞凋亡。结论重组人IL-16腺病毒载体转染Tax 1P细胞,24 h内即可诱导Tax 1P细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为成人T淋巴细胞白血病防治提出了新思路。

河南省公众对安乐死的认知、态度及意向调查

目的:了解河南省公众对安乐死的认知、态度及意向,为在该人群中开展有针对性的知识宣传及相关部门采取相应措施提供参考依据。方法:针对河南省公众特点,自行编制"河南省公众对自愿安乐死认知调查问卷",对1000位河南省公民进行调查,内容包括一般人口社会学特征,对安乐死的认知、态度及意向。结果:75.6%的被调查者对安乐死有一定了解,不同职业的被调查者对安乐死的认知差异有统计学意义(P<0.05);50.3%的被调查者赞成安乐死,52.6%的被调查者赞成安乐死合法化,并且学历越高者越倾向于赞成安乐死合法化(P<0.05),医生的赞同率仅有36.8%。60.5%和58.8%的被调查者分别认为安乐死属于社会问题和伦理问题。结论:河南省公众对安乐死总体知晓率较高,多数人对实施安乐死和安乐死合法化持谨慎态度。普通公民应在现代医学伦理观的指导下正确看待安乐死。

17-β-雌二醇对HMGB1过表达THP1细胞的细胞周期进程的影响

目的:研究17-β-雌二醇联合HMGB1的过表达对人单核细胞系THP1细胞细胞周期和NF-κB转录因子的影响。方法:血清饥饿法同步化细胞周期后,利用脂质体法将pFLAG-CMV-HMGB1转染THP1细胞;10-9mol/L17-β-雌二醇刺激同步化THP1细胞16、30小时后,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测Cyclin A、Cyclin D1的mRNA表达水平,免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性。结果:HMGB1过表达的THP1细胞中HMGB1蛋白的表达水平比正常THP1细胞要高3.7倍,血清饥饿法成功将THP1细胞周期同步化,同步化后G0/G1期细胞百分数由53%上升到78%;17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞30小时后出现Cyclin AmRNA表达上升为原来的7.9倍,而Cyclin D1 mRNA表达明显下降,G1期细胞百分比由53.11%下降为33.33%,S期细胞百分比由35.43%上升为53.91%,此改变在刺激后30小时达到最大值;NF-κB活性在17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞明显升高,且时间上提前于细胞周期动力学改变。结论:雌激素对THP1细胞周期调节依赖HMGB1,NF-κB可能参与其中。