医学院校本科生批判性思维现状及课程改革效果探析

目的分析医学院校临床医学等5个专业本科生批判性思维倾向性的现状,并探讨课程改革对大学生批判性思维能力培养的实效性。方法采用彭美慈等修订的《批判性思维方式倾向问卷》,对医学院校本科生762人展开问卷调研,并分析总体情况和各特质维度评分结果。结果临床医学等5个专业本科生的批判性思维特质总体呈中等。临床诊断逻辑课程改革能够有效提高医学院校本科生批判性思维能力中特质得分。结论医学院校急需在批判性思维能力培养上探索有效路径,提高人才培养质量,适应国家发展需要。

B细胞淋巴瘤因子-3对乳腺癌雌激素受体α信号通路及细胞增殖的影响

目的探讨B细胞淋巴瘤因子-3(Bcl-3)对乳腺癌雌激素受体α(ERα)信号通路以及细胞增殖的影响。方法取对数生长期MCF-7细胞,随机分为siControl组和siBcl-3#1组,分别滴加ControlsiRNA和siBcl-3#1siRNA,应用细胞转染试剂Lipofectamine TM 2000转染5 h。取稳定转染48 h后的siControl组和siBcl-3#1组MCF-7细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测MCF-7细胞中Bcl-3、乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)、PDZ结构域蛋白1(PDZK1)和ERα靶基因三叶因子1(TFF1)mRNA的表达,Western blot法检测MCF-7细胞中Bcl-3、ERα蛋白表达,细胞计数试剂盒-8实验检测MCF-7细胞增殖能力。取HEK293T细胞,随机分为Input组(即阳性对照组)、IP组(即免疫共沉淀组)和IgG组(即阴性对照组),共转染Bcl-3和ERα质粒48 h后,用100μL免疫共沉淀(Co-IP)细胞裂解液冰上裂解细胞后,分离上清液;Input组取90μL上清液,加入30μL 4×Loading buffer;IP组取450μL上清液,加入40μL Protein A/G和绿色荧光蛋白抗体0.5μL;IgG组取450μL上清液,加入0.5μL IgG、30μL Protein A/G琼脂糖磁珠;采用Co-IP实验检测细胞中Bcl-3和ERα结合效果。取对数生长期的MCF-7细胞,采用免疫荧光共定位实验检测Bcl-3和ERα是否存在共定位现象。结果si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3、GREB1、TFF1和PDZK1 mRNA相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3蛋白和ERα蛋白相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。培养0、24 h时,si-Bcl-3#1组与siControl组MCF-7细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,si-Bcl-3#1组MCF-7细胞增殖能力显著低于siControl组(P<0.05)。Co-IP实验结果显示,Bcl-3和ERα存在相互作用。免疫荧光共定位实验结果显示,Bcl-3和ERα存在共定位现象。结论Bcl-3在乳腺癌细胞中呈高表达,其能够提高乳腺癌ERα信号通路的转导活性,促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖。

HER2靶向TRAC和B2M双基因敲除通用型CAR-T细胞的制备及对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用

目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CAR-T细胞;利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术敲除CAR-T的T细胞受体(TCR)和人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ),制备靶向HER2的通用型CAR-T细胞,CCK-8试验检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。结果制备通用型CAR-T细胞,CAR阳性率为(67.1±1.46)%,TCR和HLA-Ⅰ类分子的敲除率为(86.31±1.78)%。体外杀伤试验显示通用型CAR-T细胞能够有效杀伤HER2阳性肿瘤细胞,其杀伤能力与CAR-T细胞无明显区别。结论成功制备能够靶向杀伤HER2阳性肿瘤细胞的通用型CAR-T细胞,为实现应用通用型同种异体CAR-T细胞治疗HER2阳性肿瘤患者奠定了基础。

ILC2在炎症性疾病中作用的研究进展

2型固有淋巴细胞(ILC2)是最近发现的新型固有淋巴细胞群体,主要存在于肺、肠道、皮肤及黏膜组织,在IL-25和IL-33等刺激下能够产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13等Th2型细胞因子,在自身免疫病、抗感染和体内免疫平衡中发挥重要作用。本文综述了ILC2在炎症性疾病发展过程中的免疫学特性及其发挥的作用,及脏器局部微环境改变对ILC2的影响,为进一步了解ILC2参与的炎症性疾病发病机制及相关治疗提供理论依据。

快速测定唑尼沙胺血药浓度的高效液相色谱法

目的建立简便快速测定唑尼沙胺血药浓度的高效液相色谱法。方法采用甲醇和醋酸铅沉淀蛋白法处理唑尼沙胺血清样本,以苯代三聚氰胺为内标,ACE UltraCore 2.5 SuperC 18(100.00 mm×3.00 mm)为色谱柱分离化合物。流动相A相为超纯水,B相为纯甲醇,梯度洗脱(0.01~5.00 min,18%~50%甲醇;5.00~5.50 min,50%~18%甲醇;5.50~7.50 min,18%甲醇),流速为0.6 mL·min^(-1),进样量20μL,柱温30℃,检测波长240 nm。并依据《中国药典》2020年版第四部通则中“生物样品定量分析方法验证指导原则”对所建方法的选择性、标准曲线、精密度与准确度、残留及稳定性等进行验证。结果本研究建立的方法测定唑尼沙胺血药浓度线性范围为3.92~125.55 mg·L^(-1),R 2>0.999;符合要求。经处理样品24 h内分析稳定,未处理样品4℃保存,1周内分析稳定。结论本研究建立的高效液相色谱法简便快速、准确度高、精密度好,适用于测定唑尼沙胺血药浓度。

白细胞介素-25在组织损伤修复中的作用研究进展

白细胞介素(IL)-25又称IL-17E,是IL-17细胞因子家族的一员,主要由上皮细胞和天然免疫细胞产生。IL-25可诱导上皮细胞和2型淋巴细胞中下游信号反应,从而启动、维持Ⅱ型免疫反应。IL-25在肾脏、肝脏、肺部和肠道等组织损伤修复中发挥重要的作用。本文综述了IL-25通过调控不同的信号通路对组织损伤修复的作用研究进展。

高效液相色谱-串联质谱方法测定血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度

目的:建立人血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的血药浓度监测。方法:以去甲基氨磺必利和D,L-N,N-二去甲文拉法辛为内标,甲醇-乙腈溶剂沉淀蛋白;使用ES Sonoma C18(2)色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm)以甲醇和6 mmol·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱;使用三重四级杆进行检测,采用电喷雾的离子源,在正离子模式下以MRM的扫描模式进行定量分析。结果:方法经验证,空白基质的干扰小,注射完高浓度样品后在空白样品中的残留符合要求,高浓度样品可以稀释2倍后进行分析,基质因子变异系数RSD小于15%,处理后的样品12 h内分析稳定、未处理样本4℃冰箱存放1周稳定,氨磺必利在15.53~497.00 ng·mL^-1、舒必利在18.03~577.00 ng·mL^-1、米那普仑在7.91~253.05 ng·mL^-1、西酞普兰在9.71~310.62 ng·mL^-1、文拉法辛在8.62~275.83 ng·mL^-1、O-去甲文拉法辛在9.19~293.92 ng·mL^-1范围内均具有良好的线性关系(R2>0.99),方法的准确度高、精密度好。结论:该方法的样本处理简单,样本分析时间短,可以实现大量临床样本的快速分析,已成功应用于临床服用氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰或文拉法辛的患者的血药浓度监测。

人血清中舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀和去甲氟西汀的LC-MS/MS方法建立及临床应用

目的建立人血清中舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀和去甲氟西汀浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的治疗药物监测。方法以N-甲基氟西汀和N-甲基度洛西汀为内标,用甲醇-乙腈(1∶1,V∶V)混合溶剂沉淀蛋白;使用ES Sonoma C18(2)色谱柱(2.1 mm×50 mm,3μm),以0.2%乙腈和50%甲醇水溶液(含6 mmol·L^-1乙酸铵)为流动相,梯度洗脱;使用三重四级杆质谱进行质量分析,采用电喷雾离子源,在正离子模式下以MRM的扫描模式进行定量分析。结果所建方法经验证,空白基质对分析物和内标无干扰,注射完高浓度样品后各分析物和内标均无残留,基质效应符合文件要求(内标归一化的基质因子变异系数CV%<15%),处理后的样品24 h内分析稳定、未处理样本4℃冰箱存放1周稳定,舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀及去甲氟西汀分别在9.22~295.16、10.80~345.60、8.10~259.12、10.11~323.54及5.90~188.70 ng·mL^-1内均具有良好的线性关系,r2>0.99,方法的准确度高、精密度好。结论该方法的样本处理简单,样本分析时间短,可实现大量临床样本的快速分析,已成功应用于临床服用舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、或氟西汀的患者血药浓度监测。

蓝萼甲素通过IL-6调节HCCLM3细胞STAT3信号通路的表达

目的研究蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)调节HCCLM3细胞信号转导转录激活因子(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路表达的作用,探讨GLA影响HCCLM3细胞转移的作用机制。方法不同浓度(0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)GLA分组刺激培养HCCLM3细胞48 h,qRT-PCR与Western blot分别检测IL-6、STAT3/pSTAT3^Tyr705、MMP9 mRNA与蛋白质的表达;Transwell检测细胞迁移与侵袭;ELISA检测细胞培养液中IL-6的浓度。结果0.1 ng/ml GLA刺激培养HCCLM3细胞48 h,IL-6 mRNA与蛋白质的表达升高,STAT3^Tyr705磷酸化增强,侵袭迁移的细胞增多,分泌至胞外的IL-6浓度也有所升高;随浓度增加,1 000 ng/ml GLA对IL-6的表达、STAT3磷酸化及细胞侵袭迁移表现出明显的抑制作用。结论GLA能够调节HCCLM3细胞IL-6的表达,并通过IL-6影响STAT3信号通路的活化,作用效果与剂量密切相关。

HTLV-1病毒感染诱导宿主细胞线粒体损伤

目的探讨人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型(HTLV-1)感染后对宿主细胞中过氧化物(ROS)的产生及线粒体损伤的影响。方法使用MT2-HeLa细胞共培养体系建立HTLV-1病毒感染模型,采用特异性荧光探针标记法检测细胞活性氧、线粒体膜电位和线粒体总量;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;免疫印迹检测病毒蛋白Tax和p19以及线粒体蛋白TIM23和TOM20;使用逆转录抑制剂(ZDV)处理MT2细胞,Real-time PCR检测相对病毒载量,检测HTLV-1复制被抑制后对线粒体蛋白和总量的影响。结果共培养24 h后,宿主细胞中的ROS水平显著上升,未见明显的凋亡现象,而线粒体膜电位、线粒体蛋白和线粒体总量呈显著下降趋势;当MT2细胞中HTLV-1病毒的复制被ZDV处理抑制后,细胞中的ROS水平和线粒体总量回升。结论HTLV-1病毒感染可致使宿主细胞发生氧化应激,导致线粒体损伤,可能活化了自噬机制降解受损伤的线粒体,维持细胞的稳态。