不同pH值条件下姬氏染液对血涂片染色效果的影响

目的：探讨不同pH值缓冲液配制出的姬氏染液对血涂片染色效果的影响。方法：使用pH值分别为6．4、6．6．6．8、7．0、7．2、7．4、7．6的缓冲溶液配制的姬氏染液和双蒸水配制的姬氏染液对小鼠血涂片进行染色，比较染色效果。结果：pH值为6．4和6．6时。红细胞清晰着色好，白细胞细胞棱着色淡；pH值为6．8的染色后，红细胞清晰着色好，白细胞可见紫色细胞值；pH值为7．0的染色后，红、白细胞着色均较淡；pH值为7．2的染色后，红细胞清晰着色好，白细胞核清晰；pH为7．4的染色后，红、白细胞均较清晰且着色好；pH为7．6的染色后，红细胞颜色偏蓝，白细胞着色好；用双蒸水配制的染液染色后，红、白细胞均清晰且着色好。结论：低pH值的染液红细胞很好的着色，但白细胞的胞核着色偏淡。而高pH值的染液可使白细胞染色效果较好，但是红细胞着色不佳；使用双蒸水配制的染液，红细胞和白细胞的染色效果都很好。

河南省HIV携带者刚地弓形虫感染情况

收集河南省1 038份HIV携带者外周血样,提取其基因组DNA后,利用巢式PCR技术扩增弓形虫529 bp重复序列基因,凝胶电泳检测目的片段。1 038份HIV携带者全血血样中（男762份,女276份）,弓形虫PCR阳性血样66份,弓形虫PCR阳性率为6.4%（66/1 038）。男性和女性的弓形虫PCR阳性率分别为6.3%（48/762）和6.5%（18/276）。已婚508份,未婚、离异或丧偶530份,其弓形虫PCR阳性率分别为4.9%（25/508）和7.7%（41/530）（χ^2=3.451,P〉0.05）。高中及以上学历、高中以下学历人群的弓形虫PCR阳性率分别为6.9%（34/489）和5.8%（32/549）（χ^2=0.545,P〉0.05）。20~40岁组人群的弓形虫PCR阳性率最高,为7.6%（31/410）。有性病史、无性病史和病史不详者的弓形虫PCR阳性率分别为8.0%（9/113）、6.5%（50/773）和4.6%（7/152）（χ^2=0.355,P〉0.05）。

甘露聚糖结合凝集素对调节性T细胞诱导分化及功能的影响

目的 探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对调节性T细胞（regu-latory T cell,Treg）诱导分化及功能的影响.方法 采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4＋CD25-T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化细胞并加入适当浓度的TGF-β1作为诱导剂,在对照组基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,荧光活化细胞分选法（FACS）分析各组中适应性调节性T细胞（induced regulatory T cell,iTreg）比例变化情况;RT-PCR方法分析新鲜脐血单个核细胞（cord blood mononuclear cell,CBMC）、纯化的CD4＋CD25-T细胞、未加MBL对照组及MBL组Foxp3 mRNA表达的水平;CCK-8法测定MBL对iTreg调节异体CD4＋CD25-T细胞增殖的影响.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,超生理浓度MBL能够增强CD4＋CD25-T细胞向Treg细胞诱导分化;RT-PCR结果显示MBL能够增强iTreg高表达Foxp3 mRNA;体外抑制试验显示,iTreg以浓度依赖方式抑制异体CD4＋CD25-T细胞的增殖,培养体系中加入MBL后增强了iTreg对CD4＋CD25-T细胞的增殖抑制效应.结论 MBL能够促进Treg诱导分化,而且对Treg抑制效应T细胞的增殖具有一定的协同调控作用.

诊断兔豆状囊尾蚴病的阻断ELISA方法的建立和初步应用

为了提高对兔豆状囊尾蚴病的血清学诊断率,本研究用纯化的63 000囊液蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了高效价一抗,再用63 000囊液蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗鼠IgG为二抗,通过对各种试验条件的优化,建立了特异诊断兔豆状囊尾蚴病的阻断ELISA方法。结果显示,63 000囊液蛋白最佳包被浓度是5mg/L;一抗最佳稀释度为1∶800;最佳封闭时间是37℃3h;二抗最佳稀释度为1∶5 000,最佳反应时间是37℃30min;底物显色5min,终止反应后可先用目测法进行初步判定,并立即用酶标仪检测,根据D450值和判定标准确诊。用新建的阻断ELISA方法对兔的常见病,如兔脑炎原虫病、兔瘟、兔巴氏杆菌病、兔球虫病和弓形虫病进行了检测,均无交叉反应。从屠宰场和感染兔场随机采集150份血清样品,分别用阻断ELISA方法和间接血凝试验（IHA）进行比较检测,证明阻断ELISA方法的诊断率明显高于IHA。总之,阻断ELISA方法是一种简便、快速、灵敏和准确诊断兔豆状囊尾蚴病的新方法,适宜于基层兽医工作者应用和推广。

甘露聚糖结合凝集素对Th17细胞诱导分化的影响

目的 研究甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）诱导分化的影响.方法 通过MACS分选器从人新鲜脐带血液中分选获得CD4＋T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化CD4＋T细胞并加入适当浓度的IL-6和TGF-β1作为诱导剂,在对照组的基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,利用流式细胞术（FACS）检测各组中Th17细胞比例变化情况;Q-PCR分别检测未加MBL对照组和不同浓度MBL实验组Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt（retinoid-related orphan receptor-γ-t,RORγt）mRNA表达水平;ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量;FACS检测Th17细胞在MBL-/-小鼠和WT小鼠中的变化.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,MBL能够显著降低Th17细胞的比例;Q-PCR结果显示,MBL能够显著降低RORγt mRNA的表达;ELISA结果显示,MBL能够显著降低IL-17A的表达水平;动物实验结果表明,与WT小鼠相比,MBL-/-小鼠CD4＋RORγt＋Th17细胞比例显著上升.结论 MBL能够抑制CD4＋T细胞向Th17细胞诱导分化.