PD-1抗体增强奥沙利铂体内外抗结肠癌的效果

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合PD-1抗体对结肠癌的抗肿瘤作用。方法:选用结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,用流式细胞术检测细胞中PD-L1的表达。采用T细胞共培养的方法检测OXA预处理HCT-116细胞联合PD-1抗体作用后细胞因子分泌及CD4/CD8亚型变化。建立BALB/c小鼠的结肠癌细胞CT26移植瘤模型,用OXA联合PD-1抗体治疗,评估其抗肿瘤活性;同时采用CD8抗体清除小鼠CD8^+T细胞,评估CD8^+T细胞在OXA抗肿瘤中的作用。结果:OXA能够显著上调结肠癌细胞表面PD-L1的表达。OXA预处理后的结肠癌HCT-116细胞和T细胞共培养后,与单纯培养的T细胞相比,能降低其培养上清中IL-2、IFN-γ和TNF的水平(均P<0.05)及体系中CD4^+记忆性T细胞和CD8^+T_(EMRA)比率(P<0.05)、增加CD4^+(P>0.05)和CD8^+(P<0.05)初始T细胞比率;联合PD-1抗体后,与OXA预处理的HCT-116和T细胞共培养组相比,T细胞培养上清中IFN-γ和IL-10含量(P<0.05)以及CD8^+T_(CM)和T_(EMRA)比率增加(P>0.05)。体内抑瘤实验表明,OXA联合PD-1抗体可以增强其抗肿瘤活性,抑瘤率显著高于单用OXA组和αPD-1组(58.2%vs 25.6%、29.1%,均P<0.05);清除CD8^+T细胞后,OXA的抗肿瘤活性由68.4%下降到46.2%(P<0.05)。结论:OXA联合PD-1抗体具有联合增效的作用,同时CD8^+T细胞在OXA的抗肿瘤活性中具有重要作用。

拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的作用及机制

目的探讨拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的体外活性及其作用机制。方法MTT法检测拉帕替尼、顺铂单独及二者联合对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用,并计算两药联合作用指数。碘化丙啶(PI)染色或AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡,Westernblot法检测两药单独及联合处理后食管鳞癌细胞EGFR和HER2的磷酸化及下游信号分子的表达变化。结果拉帕替尼联合顺铂可协同抑制食管鳞癌细胞的增殖,二者之间的联合作用指数小于1。拉帕替尼联合顺铂可使食管鳞癌细胞阻滞于G2/M期,并可显著诱导细胞凋亡。联合用药可显著抑制EGFR和HER2的磷酸化,并进而抑制两个主要的下游信号分子ERK和AKT的活化。结论拉帕替尼联合顺铂在体外具有协同抗食管鳞癌活性,对EGFR和HER2过表达食管鳞癌是一种有前景的治疗策略。

小檗碱通过调控IGF-1R信号通路抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的实验

目的检测小檗碱对食管癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞的增殖抑制作用;碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法检测细胞周期进程;Annexin V-FITC和PI双染法结合流式细胞技术检测小檗碱的凋亡诱导作用;Western blot技术检测小檗碱对胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的活化及下游主要信号分子AKT和p44/42MAPK(ERK)磷酸化水平的影响。结果小檗碱在体外可浓度依赖性地抑制四种食管癌细胞系的增殖,且其IC50值与细胞表面IGF-1R的表达水平呈负相关。小檗碱可使细胞阻滞在G2/M期。细胞凋亡实验结果显示,小檗碱可浓度依赖性地诱导食管癌细胞发生凋亡,并且在相同浓度下KYSE450细胞(IGF-1R高表达)的凋亡率显著高于KYSE150细胞(IGF-1R低表达)。Western blot结果显示,小檗碱处理可显著抑制IGF-1R的磷酸化,并抑制AKT和ERK的活化,且抑制作用随着小檗碱浓度的增加而增强。结论小檗碱可通过对IGF-1R及其介导的下游信号通路的调控来发挥抑制食管癌细胞增殖、阻断细胞周期进程以及诱导食管癌细胞凋亡的作用。