临床医学研究生教育现状及改革的几点建议

随着研究生教育规模的扩大,临床医学研究生培养单位在培养过程中遇到一系列问题,文章对主要问题进行了归纳,并针对这些问题提出了几点改革建议,以求解决。

微信在病理学实验教学中的作用

微信是具有通讯、社交、平台化功能的热门移动设备应用程序,为移动学习提供了新的平台。实验教学是病理学教育中的重要组成部分,主要是加深对基本理论知识和临床表现的理解。该文主要就微信在病理学实验教学中所产生的积极作用进行探讨,如何激发学生学习兴趣、促进学生交流及培养培养学生观察、思考及分析问题能力,以更好地促进病理学实验教学的改革。

三种网络教学平台在病理学教学改革方式的利与弊

病理学在医学教学中是基础与临床学科的桥梁,在传统的学习中主要以形态学教学为主,现在网络时代,各学校均采取了多种网络教学改革方法,这些方法普遍提高教学效果,但是也存在一些问题。文章总结这些新网络教学方法的问题从而全面促进病理学教学的发展。

白藜芦醇通过抑制IL-6调节JAK2/STAT3信号通路诱导伯基特淋巴瘤细胞凋亡

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)在伯基特淋巴瘤细胞株中,对IL-6/JAK2/STAT3信号通路的抑制作用。方法体外培养伯基特淋巴瘤Daudi细胞株,CCK-8检测不同浓度RES对Daudi细胞的活性变化,细胞组织免疫化学(SP法)检测Daudi细胞株中信号转导分子p-JAK2、p-STAT3的表达变化;免疫印迹(Western blotting)检测p-JAK2、p-STAT3以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Survivin、Bax的表达变化。结果 RES处理组与正常对照组比较,Daudi细胞的活性随着RES浓度和作用时间的增加而降低;RES预处理24 h,IL6(interleukin 6)处理30 min,与单独用IL-6处理比较,p-JAK2、p-STAT3以及抗凋亡因子Bcl-2、Survivin的表达明显降低,而促凋亡因子Bax的表达明显升高(P<0.05)。结论在伯基特淋巴瘤中,RES可能通过下调由IL6引起的p-JAK2、p-STAT3的表达,提高促凋亡因子的表达,降低抗凋亡因子的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,发挥抗肿瘤的作用。

安罗替尼联合伊立替康方案二线治疗晚期复发难治性小细胞肺癌的临床疗效观察

目的探讨安罗替尼联合伊立替康二线治疗晚期复发难治性小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的疗效与安全性。方法选择2018年1月至2019年1月新乡医学院第一附属医院收治的20例晚期复发难治性SCLC患者为研究对象,均给予伊立替康65 mg·m-2静脉滴注,第1、7天;口服盐酸安罗替尼胶囊12 mg,每日1次,第1~14天,每21 d为1个治疗周期,持续治疗4~6个周期。每2个治疗周期评价1次患者临床疗效,记录最佳疗效评价。对患者进行为期2 a的随访,记录患者无进展生存期(PFS),观察患者不良反应。分别于治疗前、治疗2个周期后,采用酶联免疫吸附法检测患者血浆转化生长因子-β1(TNF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)水平。结果患者最佳疗效为部分缓解13例,疾病稳定7例;客观缓解率(ORR)为65.0%(13/20),疾病控制率为100.0%(20/20)。20例患者PFS为(4.7±2.3)个月,其中13例ORR患者的PFS为(5.7±2.9)个月,7例脑转移患者的PFS为(2.9±1.3)个月。20例患者中有12例在治疗失败或复发转移后接受了三线化学治疗。20例患者发生疲乏12例(60.0%)、厌食5例(25.0%)、高血压10例(50.0%)、手足综合征4例(20.0%)、腹泻2例(10.0%)、白细胞下降10例(50.0%)、血小板减少9例(45.0%)、尿蛋白2例(10.0%),无治疗相关性死亡发生。治疗2个周期后患者血浆TNF-β1、VEGF、MMP2水平均显著低于治疗前(P<0.05)。结论伊立替康联合安罗替尼二线治疗晚期复发难治性SCLC的近期疗效确切,且不良反应可耐受。

LAPTM4B在胶质瘤组织中表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的检测胶质瘤组织中溶酶体相关4次跨膜蛋白B(lysosome-associated protein transmembrane-4 beta,LAPTM4B)蛋白表达,探讨其对细胞增殖和侵袭力的影响以及与患者预后的相关性。方法选取2011年6月至2015年6月在新乡市中心医院行手术切除的胶质瘤患者86例,术后随访,随访截止时间2018年6月30日。选取同期正常脑组织25例,免疫组化(SP法)检测胶质瘤和正常脑组织中LAPTM4B蛋白表达,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,影响患者预后的风险因素分析采用Cox比例风险模型分析,培养U251细胞并分为siRNA-LAPTM4B组、siRNA-NC组和空白组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中LAPTM4B表达,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭力,Western blot检测细胞中LAPTM4B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中的阳性表达率为77.91%,高于正常脑组织中的28.00%(P<0.001);LAPTM4B蛋白阳性表达率在不同WHO分级差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,LAPTM4B蛋白阳性表达组患者中位生存时间和累积生存率低于LAPTM4B蛋白阴性表达组(P=0.002);Cox比例风险模型分析结果显示,WHO分级和LAPTM4B蛋白表达是影响胶质瘤患者预后的风险因素(P<0.05);与siRNA-NC组和空白组比较,siRNA-LAPTM4B组细胞中LAPTM4B mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),24、48、72、96 h时光密度值及细胞克隆数、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量均降低,而E-cadherin蛋白表达量升高(P<0.05)。结论LAPTM4B蛋白在胶质瘤组织中高表达,促进细胞增殖和侵袭,其机制可能与上皮-间质转化有关。LAPTM4B蛋白表达高低与胶质瘤患者生存有关。

中药复方胃肠安对人SGC-7901胃癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究

目的探讨中药复方胃肠安对人SGC-7901胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及抗肿瘤机制。方法将45只SGC-7901胃癌移植瘤裸鼠随机分为对照组,胃肠安低、中、高剂量组(剂量分别为15,30,60mg·kg-1,灌胃给药)。记录4组小鼠肿瘤生长以及生存情况,并采用实时荧光定量PCR(RF-PCR)分析肿瘤组织中凋亡相关基因(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达情况,采用TUNEL染色法分析不同处理肿瘤组织中肿瘤细胞凋亡指数。结果与对照组比较,胃肠安低、中、高剂量组小鼠肿瘤生长明显被抑制、生存率明显增加(P<0.05),呈剂量依赖效应;小鼠肿瘤组织中Caspase-3和Bax mRNA表达水平以及细胞凋亡指数明显增加,而Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(均P<0.05),随着药物浓度的增加呈剂量依赖性变化。结论中药复方胃肠安可显著提高肿瘤组织中肿瘤细胞凋亡基因表达,提高凋亡指数,并抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠的生存时间。

hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ在食管癌中的表达及意义

目的探讨hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ在食管黏膜上皮癌变过程中的意义及相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测正常食管黏膜上皮及食管不同病变组织中hMLH1、转化生长因子β受体Ⅱ的表达情况,并分析其与临床病理参数的相关性。结果 hMLH1在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率(14.92%)显著低于正常食管黏膜组织(95.00%)、非典型增生组织(71.43%)、原位癌组织(68.00%),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。转化生长因子β受体Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率(9.52%)显著低于正常食管黏膜组(85.00%)非典型增生组织(61.90%)、原位癌组织(64.00%)组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。hMLH1和转化生长因子β受体Ⅱ阳性表达率与肿瘤的分化程度密切相关;且两者在食管癌组织中的表达具有相关性。结论 hMLH1和转化生长因子β受体Ⅱ的异常表达与食管鳞状上皮癌变有关;转化生长因子β受体Ⅱ可能是hMLH1的靶基因。

卒中后抑郁模型大鼠与miR-137抑制下的Grin2A表达

背景:卒中后抑郁是脑血管病后最常见的心理行为障碍并发症,其发病机制目前尚未明确。目前研究表明,microRNA与神经发生和突触形成有关,可能在精神疾病中扮演至关重要的作用。目的:分析卒中后抑郁大鼠模型脑内和外周血中的mi R-137的表达以及其对模型行为学的影响。方法:将36只大鼠分为6组,每组各6只。对照组不做任何处理,卒中后抑郁组大鼠经大脑中动脉阻塞后慢性温和刺激建立卒中后抑郁模型,agomir-137组、agomir-NC组、agomir-137+Grin2A组和agomir-137+vector组大鼠在建立卒中后抑郁模型的基础上分别给予脑室内注射agomir-137、agomir-NC、agomir-137和Grin2A过表达质粒以及agomir-137和空白质粒。结果与结论:实时定量PCR检测显示卒中后抑郁模型大鼠脑内和外周血中miR-137表达水平均明显低于对照组正常大鼠。行为学结果显示,在脑缺血第3周,agomir-137组大鼠垂直得分以及水平得分均显著高于agomirNC组大鼠以及卒中后抑郁组大鼠。糖水消耗实验结果显示,在脑缺血后第2周末起,agomir-137组大鼠糖水消耗百分比即显著高于agomir-NC组大鼠以及卒中后抑郁组大鼠。进一步研究发现,mi R-137可以与Grin2A的3’UTR端结合,抑制Grin2A mR NA的翻译从而下调其蛋白的表达。并且在卒中后抑郁大鼠模型的脑内过表达Grin2A基因后,mi R-137抗卒中后抑郁的作用被显著减弱。提示miR-137可通过与Grin2A mR NA结合抑制其蛋白表达,从而发挥抗卒中后抑郁的作用,为卒中后抑郁提供新的临床治疗靶点。

EGCG对人食管癌ECa109细胞生长凋亡及其p16基因甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平的影响

目的探讨表没食子儿茶素食子酸酯(EGCG)对人食管癌ECa109细胞生长及凋亡的作用,并检测其对ECa109细胞中p16基因甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平的影响。方法以0、25、50、100、200 mg/L浓度的EGCG分别作用于食管癌ECa109细胞24、48、72、96 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ECa109细胞吸光度值,观察细胞存活率;用流式细胞术测定不同浓度EGCG处理后的细胞凋亡率,甲基化特异性PCR(MSP)检测抑癌基因p16在不同药物浓度下的甲基化状态,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测基因p16 mRNA的表达,并用免疫印迹法Western blot检测p16蛋白的表达情况。结果 EGCG处理食管癌ECa109细胞后,MTT法测得细胞存活率随着EGCG浓度和作用时间的增加而降低,各浓度间比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪凋亡检测显示,在96 h时25、50、100、200 mg/L EGCG处理的细胞凋亡率分别为9.98%、15.60%、19.40%、27.20%,与0 mg/L(0.21%)处理比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MSP法显示,p16基因在未加药组(0 mg/L)为高甲基化状态,EGCG处理食管癌ECa109细胞96 h后,25 mg/L组p16基因仍为甲基化,而50 mg/L组出现部分甲基化,100、200 mg/L组表现为去甲基化状态。FQ-PCR法测得25、50、100、200 mg/L组p16基因mRNA相对表达量分别是1.18±0.43、1.29±0.11、1.52±0.74、1.67±0.37,与0 mg/L组(1.00±0.00)比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,EGCG处理细胞96 h后,0、25 mg/L组p16蛋白为无表达,50、100、200 mg/L组恢复表达。结论 EGCG可明显抑制ECa109细胞增殖,诱导ECa109细胞凋亡,且具有明显的剂量和时间依赖性;EGCG可使ECa109细胞中p16基因去甲基化,增加其mRNA和蛋白表达;EGCG可能通过逆转p16基因高甲基化抑制食管癌ECa109细胞。

小分子干扰RNA下调HIF-2α基因表达对人肝癌细胞HepG2体外凋亡的机制

目的 探讨小分子干扰RNA下调缺氧诱导因子-2α基因表达对人肝癌细胞株HepG2体外凋亡的影响,并研究其可能的分子机制.方法 采用不同浓度的氯化钴诱导细胞模拟缺氧,设计合成的特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞48 h后,采用逆转录聚合酶链式反应、免疫蛋白印记方法检测细胞中缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达,流式细胞术观察细胞凋亡率,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9试剂盒检测细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性;免疫蛋白印记法检测凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2、白血病-2相关x蛋白的表达.结果 低氧环境下,缺氧诱导因子-2α表达上调;特异性缺氧诱导因子-2αsiRN A转染HepG2细胞48 h后,转染组缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达下调(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率升高(P<0.05),活性检测显示半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性升高,免疫蛋白印记法检测显示白血病-2表达下调,x蛋白表达上调(P<0.05).结论 特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA可针对性的下调HepG2细胞中缺氧诱导因子-2α的表达,促进HepG2细胞体外凋亡,这一过程可能与下调白血病-2表达、上调x蛋白的表达及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性有关.

人mcl1不同亚型在结肠癌组织中表达变化的临床意义

目的探讨人mcl1基因不同亚型在结肠癌组织中差异表达的临床意义。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠腺癌组织以及相应的癌旁组织各20例中mcl1基因三种m RNA剪接异构体和三种蛋白亚型的表达水平,进而分析这些亚型表达差异与肿瘤临床病理特征之间的相关性。结果 mcl1基因亚型1在结肠肿瘤组织及相应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.009,P=0.022),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P=0.004,P=0.034)。亚型2在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.002,P=0.011),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P<0.001,P=0.007)。亚型3在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.027,P=0.045),但肿瘤组与相应旁组织之间以及腺癌组与腺瘤组之间的比较差异均无统计学意义。结论研究表明mcl1亚型1和亚型2对结肠癌肿瘤恶性程度呈正相关,可以作为临床评估结肠癌恶性程度有效的诊断指标之一。而亚型3可以作为肿瘤早期诊断的标志物,但其表达水平与恶性程度无明显相关性。

长链非编码RNA SNHG6在胶质瘤组织中表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA SNHG6(LncRNA SNHG6)在胶质瘤组织中表达及临床意义。方法选取2009年2月—2014年2月在新乡市中心医院接受手术治疗的胶质瘤患者94例,同期,选取留取因颅脑外伤或癫痫而行手术治疗的正常脑组织37例,实时荧光定量PCR检测胶质瘤和正常脑组织中LncRNA SNHG6表达,所有胶质瘤患者均于院外随访,随访截止时间2019年2月28日,记录患者总生存时间,生存分析采用Kaplan-Meier法,影响预后的风险因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果LncRNA SNHG6表达量胶质瘤组织中为(1.88±0.17),正常脑组织中为(1.01±0.13),两者比较,差异有统计学意义(t=28.230,P<0.001);不同WHO分级、KPS评分和术后复发的胶质瘤组织中LncRNA SNHG6相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,两组中位生存时间和累积生存率比较,低表达组均高于高表达组,差异有统计学意义(χ^2=9.562,P=0.002);WHO分级、KPS评分、术后复发和LncRNA SNHG6相对表达均是影响胶质瘤患者预后的风险因素(HR=2.365、2.028、2.188和2.038,P<0.05)。结论胶质瘤组织中LncRNA SNHG6表达量升高,且与胶质瘤恶性程度及不良预后有关,可作为患者预后评估的风险因素。

血栓弹力图指导氯吡格雷用于经皮冠状动脉介入术后抗血小板治疗的临床预后观察

目的探讨血栓弹力图指导的氯吡格雷对于经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)后主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)的影响。方法选取2015年8月-2016年8月于解放军总医院心血管内科行PCI介入治疗患者263例。分为氯吡格雷组(123例)和替格瑞洛组(140例)。氯吡格雷组患者使用血栓弹力图检测其抗血小板效果,当存在血小板高反应(high platelet reactivity,HPR)现象时,将氯吡格雷维持剂量改为150 mg(3个月后改为75 mg),并随访12个月,比较两组的MACE发生率。HPR定义为腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集率≥50%。结果两组患者支架内血栓、靶血管再次血运重建、心绞痛再发作、心源性死亡差异无统计学意义(P均>0.05),氯吡格雷组因胸痛再入院发生率较替格瑞洛组明显升高(4.9%vs 0.7%,P=0.042)。氯吡格雷组MACE发生率较替格瑞洛组明显升高(13.0%vs 5.0%,P=0.022)。结论在PCI术后,个体化指导的氯吡格雷组MACE发生率高于替格瑞洛组,提示替格瑞洛效果可能更好。

MiRNA-373在皮肤鳞状细胞癌的表达及对侵袭的影响

目的 分析microRNA-373（miR-373）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达，探讨对皮肤鳞癌细胞侵袭的影响。方法 实时 PCR检测皮肤鳞癌组织和细胞中miR-373的表达，将miR-373模拟物、miR-373抑制剂以及阴性对照miRNA转染皮肤鳞癌A431细胞，采用细胞侵袭实验分析miR-373表达下调对细胞侵袭的影响，采用Western 印迹分析miR-373表达下调对MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。结果 皮肤鳞癌组织（2.465 ± 0.218）和SCL-1细胞及A431细胞（1.864 ± 0.178，2.919 ± 0.277）中miR-373的表达水平显著高于瘤旁组织和细胞（1.000 ± 0.000），差异有统计学意义（P 〈 0.05）。在转移性的皮肤鳞癌患者（3.323 ± 0.344）中，miR-373的表达显著高于非转移组（1.914 ± 0.161），差异有统计学意义（t = 4.158，P 〈 0.01）。与未处理组和阴性对照组相比，miR-373模拟物显著增加皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭能力，而miR-373的抑制剂显著下调皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭，差异有统计学意义（均P 〈 0.05）。结论 MiR-373表达下调显著抑制皮肤鳞癌A431细胞的侵袭，并能显著下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。

干扰素诱导跨膜蛋白3在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时定量PCR和免疫组化法检测正常结肠组织、结肠腺瘤和结肠腺癌组织中IFITM3mRNA和蛋白的表达水平，分析其与结肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果IFITM3mRNA在正常结肠组织、结肠腺瘤、未转移结肠腺癌和转移结肠腺癌组织中的表达水平分别为4．49±0．69、7．32±0．76、12．19±1．34和18．37±0．61，差异有统计学意义（P〈0．001）。IFITM3蛋白在正常结肠组织、结肠腺瘤、未转移结肠腺癌和转移结肠腺癌组织中的阳性表达率分别为3．9％（2／51）、11．3％（14／124）、19．0％（19／100）和69．0％（78／113）。IFITM3蛋白表达与肿瘤周围组织浸润、肝转移、结肠旁淋巴结转移、结肠系膜淋巴结转移、系膜根部淋巴结转移、腹网膜转移和美国癌症联合委员会（MCC）分期有关（均P〈0．05）。IFITM3蛋白阳性表达结肠癌患者的5年生存率为40．2％，IFITM3蛋白阴性表达结肠癌患者的5年生存率为88．8％，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论IFITM3表达与结肠癌转移程度及预后有关。

胃炎、食管炎和食管癌患者血清中人丝氨酸蛋白酶8的表达及临床意义

目的探讨人丝氨酸蛋白酶8(PRSS8)在胃炎、食管炎和食管癌患者血清中的表达情况及意义。方法采集临床诊断为食管炎、食管癌和胃炎患者以及正常人群的血清样本,其中食管炎患者血清样本20例,食管癌患者血清样本6例,胃炎患者血清样本60例,正常血清样本28例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)的方法测定各组中PRSS8的表达水平,并将食管炎患者组、食管癌患者组和胃炎患者组分别与正常组相比较。结果各组血清PRSS8表达水平差异有统计学意义(F=13.24,P<0.01)。食管炎患者组PRSS8表达水平[(4.58±1.67)μg/L]高于正常组[(3.52±1.49)μg/L],差异有统计学意义(LSD-t=2.59,P<0.05);食管癌患者组PRSS8表达水平[(5.05±0.57)μg/L]高于正常组[(3.52±1.49)μg/L],差异有统计学意义(LSD-t=2.54,P<0.05);食管癌患者组PRSS8表达水平[(5.05±0.57)μg/L]高于食管炎患者组[(4.58±1.67)μg/L],差异无统计学意义(LSD-t=0.83,P>0.05);胃炎患者组PRSS8表达水平[(5.39±1.04)μg/L]高于正常组[(3.52±1.49)μg/L],差异有统计学意义(LSD-t=6.22,P<0.05)。结论食管炎、食管癌和胃炎患者血清中PRSS8表达水平均增高,提示血清中的PRSS8可能与食管炎、食管癌和胃炎的发生发展相关。