SARS-CoV、SARSL-CoV与其他冠状病毒的种系发生分析

目的分析不同流行时段重症急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromes coronavirus,SARS-CoV)病毒株与重症急性呼吸综合征样冠状病毒(severe acute respiratory syndromes like coronavirus,SARSLCoV)及其他冠状病毒的分子进化关系。方法从美国国立生物技术信息中心获取不同分离时段的SARS-CoV(9条)、所有SARSL-CoV(24条)、其他冠状病毒(26条)的全基因组序列,用Clustal X 2.1软件进行多重序列比对,用邻接法(neighbor-joining,NJ)MEGA 6.0软件构建系统进化树。结果在包含SARS-CoV、SARSL-CoV和其他冠状病毒基因组序列的不同数据集中,流行早、中期SARS-CoV与流行末期毒株的基因组序列均分别属于不同的分支;以流行早、中期SARS-CoV为根的有根树显示,流行末期SARS-CoV遗传距离最远,而与SARSL-CoV和其他冠状病毒遗传距离更接近。结论流行末期SARS-CoV与流行早、中期SARS-CoV遗传差异大,且可能存在逆向/返祖进化。

cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化；将cGAS表达质粒，转染入HeLa细胞，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平；采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后，HeLa细胞中cGAS的表达升高；转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加，IRF3和p65的磷酸化水平升高；沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低，IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。