ZWINT和CDK2在乳腺癌中的表达及与临床病理特征的关系和诊断价值

目的探讨ZW10结合因子(ZWINT)和细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)的相关性及其在乳腺癌病理诊断中的价值。方法通过GEPIA数据库分析ZWINT在乳腺癌和正常乳腺组织之间的表达差异,以及在乳腺癌中ZWINT和CDK2表达的相关性。通过Kaplan-Meier Plotter数据库预测ZWINT的表达与乳腺癌患者预后的关系。收集84例乳腺癌及其配对癌旁组织石蜡包埋病理标本和20例乳腺癌及其配对的癌旁组织新鲜标本,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学检测乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中ZWINT和CDK2的mRNA及蛋白的表达,分析ZWINT和CDK2与乳腺癌临床病理特征的关系,并采用关联分析分析ZWINT和CDK2的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估ZWINT和CDK2在乳腺癌病理诊断中的价值。结果数据库分析结果显示,ZWINT在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌中ZWINT和CDK2的表达呈正相关(r_(s)=0.600,P<0.001),ZWINT的表达与乳腺癌患者的预后相关(P均<0.05)。84例病例检测结果显示,在乳腺癌组织中ZWINT和CDK2的mRNA及蛋白的表达均高于癌旁组织(P均<0.05),并且其高表达均与肿瘤大小、分期和淋巴结转移相关(P均<0.05)。关联分析结果显示,对称测量下的Φ、Cramer V系数检验的关联程度相同,为0.322(P=0.003),而列联系数为0.306(P=0.003),ZWINT蛋白和CDK2蛋白表达密切相关。ZWINT和CDK2的ROC曲线的曲线下面积分别为0.886和0.818,对乳腺癌均具有较高的诊断价值。结论ZWINT和CDK2与乳腺癌的发生发展及预后相关,检测ZWINT和CDK2有助于乳腺癌的病理诊断。

“人工智能”时代基于翻转课堂的病理学教学模式初探

“人工智能”时代,随着信息技术和微课、幕课等网络教学课程的迅速发展,如何推进技术与教育的深度融合,提升教学质量,成为众多教育工作者开展教学改革的主要目的。翻转课堂融合了信息化技术和智能移动设备教学技术,打破了传统灌输式的教学模式,以学生为中心,能够更好地激发学生对知识的兴趣。我校病理学相关网络教学平台已建立,教师素质及学生学习能力特点等都符合翻转课堂实施的要求,结合病理学课程特点,分析在病理学教学中引入该模式的可行性,促进病理教学改革。

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果TCF43′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P<0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P<0.05)。结论TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。

DIAPH3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

背景与目的:胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不清楚。Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3,DIAPH3)对多种肿瘤的发生、发展具有重要作用,但其在胃癌中的作用未见报道。探讨DIAPH3在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:利用基因表达谱分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)数据库在线分析DIAPH3在胃癌组织中的表达;收集2020年1月—2020年12月年新乡医学院第四临床学院病理科保存的62例胃癌患者的石蜡包埋组织及配对癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理学相关性分析;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白质水平的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3转录水平表达的影响。利用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞增殖;利用划痕愈合实验检测细胞迁移;利用transwell小室实验检测细胞侵袭。结果:GEPIA数据库在线分析显示,与胃癌癌旁组织相比,DIAPH3 mRNA在胃癌组织中表达升高(P<0.05);胃癌组织中DIAPH3的阳性表达率为70.97%(44/62),高于胃癌癌旁组织16.13%(10/62),差异有统计学意义(P<0.01);与高中分化组比较,低分化组DIAPH3表达升高(P<0.05);与无淋巴结转移组相比,有淋巴结转移组DIAPH3表达升高(P<0.05)。干扰DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均低于阴性对照组(P<0.05);过表达DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均高于过表达对照组(P<0.05)。过表达DIAPH3后干扰cyclin D1,胃癌细胞株的增殖活力低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组(P<0.05)。过表达DIAPH3后干扰vimentin,胃癌细胞株的细胞迁移率和细胞侵袭数低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组(P<0.05)。与干扰对照组相比,干扰DIAPH3组E-cadherin蛋白质表达增加,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达降低(P<0.05);与过表达对照组相比,过表达DIAPH3组中E-cadherin蛋白质表达降低,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达增加(P<0.05)。在敲低或过表达DIAPH3胃癌细胞株中,DIAPH3在mRNA水平均显著降低或升高(P<0.05)。结论:DIAPH3可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用与上调cyclin D1、促进上皮-间充质转化有关。

PXMP4促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨过氧化物酶体膜蛋白4(peroxisomal membrane protein 4, PXMP4)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用生物信息学分析65例配对结直肠癌组织中PXMP4 mRNA的表达。应用免疫组化检测112例配对结直肠癌组织中PXMP4的表达,并进行临床病理相关分析;利用RT-PCR和Western blot法检测过表达/干扰结直肠癌细胞中PXMP4的表达;采用CCK-8、划痕愈合实验和Transwell实验检测结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 65例结直肠癌组织中有64例PXMP4 mRNA的相对表达量高于正常肠黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01)。112例结直肠癌组织中PXMP4的阳性率为71.429%(80/112),高于正常肠黏膜组织(5.4%,6/112);按肿瘤分化程度和淋巴结转移分组,PXMP4的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。与空载组和阴性对照组相比,过表达PXMP4能促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),干扰PXMP4能抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论 PXMP4在结直肠癌组织中表达上调,其与肿瘤分化程度和淋巴结转移有关;PXMP4促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2信号通路抑制剂对乳腺癌细胞缺氧诱导因子-2α表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2(MEK/ERK1/2)信号通路抑制剂对缺氧诱导的乳腺癌MCF-7细胞中缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达的影响。方法乳腺癌MCF-7细胞常规培养24 h后,分为常氧组、缺氧组、缺氧+低剂量LY294002组、缺氧+高剂量LY294002组,缺氧+低剂量U0126组和缺氧+高剂量U0126组。常氧组细胞使用含生理盐水的RPMI 1640培养基,缺氧组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴的RPMI 1640培养基,缺氧+低剂量LY294002组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和4μmol·L-1 LY294002的RPMI 1640培养基,缺氧+高剂量LY294002组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和40μmol·L-1 LY294002的RPMI 1640培养基,缺氧+低剂量U0126组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和2μmol·L-1 U0126的RPMI 1640培养基,缺氧+高剂量U0126组细胞应用含8μmol·L-1 U0126的RPMI 1640培养基,继续培养3 h。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞HIF-2αmRNA的表达;采用Western blot法检测各组细胞HIF-2α蛋白、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果缺氧组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量高于常氧组(P<0.05);缺氧+低剂量LY294002组、缺氧+高剂量LY294002组、缺氧+低剂量U0126组、缺氧+高剂量U0126组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧组(P<0.05)。缺氧+高剂量LY294002组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧+低剂量LY294002组(P<0.05);缺氧+高剂量U0126组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧+低剂量U0126组(P<0.05)。结论PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号通路可能是缺氧诱导HIF-2α表达的上游信号通路,在缺氧条件下对HIF-2α具有正向调节作用,在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

微RNA调控乳腺癌耐药性研究进展

乳腺癌是世界上最常见的女性恶性肿瘤之一,我国乳腺癌的发病率呈逐年上升的趋势,严重威胁到女性的身心健康。化学药物治疗是临床肿瘤治疗的标准方法之一,但化学药物治疗易导致耐药,也是最终导致化学药物治疗失败的主要原因。探究乳腺癌潜在的耐药机制对改善乳腺癌效果具有重要意义。微RNA(miRNA)通过介导基因表达在乳腺癌耐药中发挥调控作用,但详细的作用机制尚不十分明确。现对miRNA在调控乳腺癌耐药性中的作用进行综述。

细胞骨架调节蛋白3促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭

细胞骨架调节蛋白3(diaphanous related formin3,DIAPH3)参与肌动蛋白重塑和调节细胞的运动和黏附,在多种肿瘤发生发展中发挥重要作用,但其在食管鳞状细胞癌(简称:食管鳞癌)中作用尚未见报道。本研究探究DIAPH3在食管鳞癌中的作用及其分子机制。首先,基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)数据库和免疫组织化学染色法,用于分析食管鳞癌组织中DIAPH3在转录水平和蛋白质水平的表达。结果显示,食管鳞癌组织中DIAPH3mRNA和蛋白质的表达高于癌旁组织,其与肿瘤分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。利用Western印迹检测食管鳞癌组织中DIAPH3蛋白的表达量。结果表明:与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中蛋白质的表达量升高(P<0.05)。再利用CCK-8、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验,分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。实验结果显示:与对照组相比,干扰DIAPH3组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05),而过表达DIAPH3组细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。最后,利用Western印迹检测过表达/干扰DIAPH3细胞中的细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达。Western印迹结果显示:与对照组相比,干扰DIAPH3组细胞中,E-钙黏着蛋白表达增加,且波形蛋白和细胞周期蛋白D1表达减少(P<0.05),而过表达DIAPH3组细胞中,E-钙黏着蛋白表达减少,且波形蛋白和细胞周期蛋白D1表达增加(P<0.05)。这些研究表明,DIAPH3促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。其结果为食管鳞癌的诊治提供了新思路。

长链非编码RNA SNHG1对肝细胞癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其分子机制

目的检测长链非编码RNA SNHG1在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达,分析其对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响,探讨其作用机制与上皮间质转化(EMT)的关系。方法取正常肝细胞L02和人HCC细胞HepG2和SMMC7721进行培养,采用qRT-PCR法检测细胞SNHG1 mRNA表达。将HCC细胞分为干扰组和对照组,干扰组细胞转染靶向SNHG1 mRNA的小干扰片段,对照组细胞转染阴性对照的小干扰片段。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞间质标志蛋白Vimentin、上皮标志蛋白E-cadherin的表达。结果HepG2和SMMC7721细胞中SNHG1的相对表达量分别为3.056±1.98、4.22±1.64,均高于L02细胞中的1.01±0.21(P均<0.05)。与对照组比较,干扰组HepG2和SMMC7721细胞中SNHG1穿膜细胞数量、细胞迁移率均降低(P均<0.05),Vimentin蛋白表达减少,E-cadherin蛋白表达增加(P均<0.05)。结论SNHG1在HCC细胞中呈高表达,可促进细胞的侵袭及迁移;其机制可能与SNHG1调控E-cadherin、Vimentin蛋白表达进而促进EMT形成有关。