内向整流钾通道激动剂对异丙肾诱发心肌肥厚大鼠心律失常的抑制作用及机制研究

目的研究内向整流钾通道激动剂扎考必利(zacopride,Zac)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱发的心肌肥厚大鼠心律失常的抑制作用及其电生理机制。方法1 51只SD大鼠(200~230 g),随机分为对照组、ISO组和ISO+Zac组(n=17)。连续7 d经腹腔注射5 mg·kg^(-1)ISO,建立大鼠心肌肥厚模型;2利用体表心电图观察Zac对ISO诱发的心肌肥厚大鼠心律失常的效应;3应用全细胞膜片钳技术观测Zac对模型组大鼠心肌细胞内向整流钾电流(I_(K1))、静息电位(RMP)、延迟后除极(DADs)及触发活动(TA)的影响。结果 1 M型超声心动图显示,与对照组相比,ISO组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD)均明显降低,左室后壁舒张末期厚度(LVPWd)和室间隔舒张末期厚度(IVSd)均增高(P<0.05),提示ISO诱发建立大鼠心肌肥厚模型成功;2体表心电图显示,ISO组肥厚大鼠88.89%发生室性心律失常(频发室性期前收缩),生理盐水对照组大鼠未观察到心律失常的发生。在连续7 d给予15μg·kg^(-1) Zac干预后,肥厚大鼠心律失常发生率降至11.11%(P<0.05);3与对照组相比,ISO组大鼠RMP由(-71.05±1.27)m V降低至(-69.38±1.21)m V(P<0.05);连续7 d给予15μg·kg^(-1) Zac后,RMP增加至(-73.86±1.33)m V,较对照组和ISO组均明显增大(P<0.05);4 ISO+Zac组大鼠单个心肌细胞DADs和TA发生率较ISO致心肌肥厚组明显降低,由88.24%降低至11.76%(P<0.05);5与对照组相比,ISO组大鼠内向整流钾通道电流(I_(K1))明显降低,在给予Zac(15μg·kg^(-1))后I_(K1)明显增加(P<0.05)。结论选择性I_(K1)通道激动剂Zac可明显抑制ISO诱发的心肌肥厚大鼠心律失常的发生,其机制与它通过增强I_(K1)使膜电位负值增大和抑制延迟后除极的效应有关。

大鼠颈动脉体免疫组化实验方法

目的运用石蜡切片免疫组化试验方法检验大鼠颈动脉体。方法通过对颈动脉体的固定,石蜡包埋,切片。分析切片的质量及其原因,运用免疫组化方法标记大鼠颈动脉体标记物——酪氨酸羟化酶。结果大鼠颈动脉体在100%的酒精和二甲苯的脱水时间18 min为宜。将颈动脉体水平放置包埋和修剪之后更好进行石蜡切片操作。结论应用免疫组化方法研究颈动脉体的过程需要小心操作,反复练习,及时总结,才能熟能生巧,最终掌握适用于颈动脉体的研究方法。

细胞因子诱导杀伤细胞联合p38抑制剂对食管癌EC109细胞的作用

目的探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合p38抑制剂对食管癌EC109细胞的作用。方法常规分离健康人外周血单个核细胞,并诱导为CIK细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;将食管癌EC109细胞分为空白对照组(不做处理)、p38抑制剂组(加入p38抑制剂)、CIK组(加入培养14 d的CIK细胞)和联合组(加入p38抑制剂联合培养14 d的CIK细胞)。乳酸脱氢酶释放法检测各组食管癌EC109细胞的存活率;流式细胞仪检测各组食管癌EC109细胞的周期阻滞率和凋亡率。结果空白对照组、p38抑制剂组、CIK组及联合组EC109细胞存活率分别为100.00%、75.00%、50.00%和25.00%,对食管癌细胞G1期的阻滞率分别为31.46%、42.04%、50.16%和72.02%,食管癌EC109细胞凋亡率分别为7.15%、19.31%、42.15%和67.17%,其中p38抑制剂组、CIK组及联合组EC109细胞存活率、对G1期的阻滞率、细胞凋亡率均显著高于空白对照组(P<0.05),联合组以上指标均显著高于p38抑制剂组和CIK组(P<0.05)。结论 CIK联合p38抑制剂对食管癌EC109细胞具有较强的杀伤作用。

冬凌草甲素对人食管鳞癌细胞系KYSE-150和KYSE-450增殖及迁移的影响

目的探讨冬凌草甲素(ORI)对食管鳞癌细胞系KYSE-150和KYSE-450增殖、凋亡、周期及迁移的作用。方法 MTT法检测ORI对食管癌细胞增殖的影响;集落形成实验检测ORI对集落形成的影响;流式细胞术检测ORI对食管癌细胞凋亡和周期的影响;Transwell迁移实验检测ORI对食管癌细胞迁移的作用;Western blotting检测ORI对抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期抑制蛋白p21Cip1/Waf1及上皮-间质转化(EMT)标志蛋白表达水平的影响。结果 ORI对KYSE-150和KYSE-450细胞的增殖、迁移和集落形成有显著的抑制作用(P<0.05),且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖性;流式结果显示,随着ORI浓度的增加,细胞的凋亡率明显增加(P<0.05),G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.05);ORI处理食管癌细胞48 h,Bcl-2、间质细胞标志蛋白,波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达下调,p21Cip1/Waf1、上皮细胞标志蛋白,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调。结论冬凌草甲素可能通过诱导细胞凋亡,阻滞细胞在G2/M期抑制食管癌细胞的增殖,并通过抑制EMT转化从而抑制食管癌细胞的迁移。

肾上腺素对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肾上腺素对人胶质瘤细胞系U251细胞增殖、凋亡、周期的作用。方法:应用RT-PCR方法检测U251细胞中β-肾上腺素能受体(β-AR) mRNA的表达。MTT法检测肾上腺素对U251细胞增殖的影响;克隆形成实验检测肾上腺素对U251细胞克隆形成的影响;Annexin V-FITC/PI检测肾上腺素对U251细胞凋亡的影响;流式细胞术检测肾上腺素对U251细胞周期的影响;Western Blot检测周期、凋亡和自噬相关蛋白表达变化。结果:人胶质瘤细胞U251表达β-AR;肾上腺素以浓度依赖性的方式抑制U251细胞增殖(P <0. 05);肾上腺素抑制U251细胞的克隆形成(P <0. 05);流式结果显示,随着肾上腺素浓度的增加,细胞的凋亡率明显增加(P <0. 05),G0/G1期细胞比例显著增加(P <0. 05),G2/M期细胞比例下降(P <0. 05);肾上腺素处理U251细胞48 h,细胞周期蛋白Cyclin D表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I比值升高。结论:肾上腺素可能通过激活细胞自噬抑制人胶质瘤细胞的增殖,使细胞阻滞在G0/G1期。

烟雾病患者临床与脑血管造影特点分析

目的分析烟雾病(MMD)患者的临床和脑血管造影(DSA)特点。方法将45例烟雾病患者分为少年组(14例,年龄≤15岁)和成年组(31例,年龄>15岁),并对两组患者的临床和脑血管造影特点进行分析。结果 45例患者中双侧颈内动脉均有不同程度的狭窄闭塞,伴有双侧大脑前动脉、中动脉狭窄并不全闭塞或者闭塞的23例,单侧大脑前、中动脉狭窄并不全闭塞12例,单侧大脑前、中动脉完全闭塞1例,单侧大脑中动脉闭塞5例,单侧大脑前动脉闭塞4例。其中,少年组14例中有12例表现为缺血性脑卒中,成年组31例中21例表现为出血性脑卒中。所有病例均可清晰得显示出脑底明显增多的异常血管网、吻合血管及动脉瘤等病变。结论烟雾病临床表现多样,少年常表现为缺血性卒中,成年常表现为出血性卒中,DSA检查为诊断烟雾病的金标准,早期诊断、及时治疗可有效得减轻临床症状。

颅内动脉瘤手术方法选择和时机把握

颅内动脉瘤破裂是引起自发性蛛网膜下腔出血的主要原因,在普通人群的患病率为2.3％,并且一些研究发现,未破裂动脉瘤的患病率为3.2％,多发生于50岁左右的人群,女性患病率高于同龄的男性[1-2].颅内动脉瘤以其较高的致残率和病死率,已成为人类疾病的重要'杀手'之一,同时增加经济负担,最近文献也表明,英国每年花费51亿英镑来治疗动脉瘤[3-4].因此,对于颅内动脉瘤尽可能早地诊治,具有非常重要的临床意义.