千金子介导Akt信号通路抑制肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化的研究

目的:探讨千金子介导蛋白激酶B(Akt)信号通路对肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:用浓度分别为2、6、18 mg/mL的千金子处理A549作为千金子各浓度组,以不添加千金子培养的细胞作为空白对照组;用100μg/mL的IGF-1和18 mg/mL的千金子共同处理A549作为千金子+IGF-1组,用等量的磷酸盐缓冲液(PBS)和18 mg/mL的千金子共同处理A549作为千金子+PBS组。蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原(PCNA)、细胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果:与空白对照组比较,不同浓度千金子处理的肺癌细胞A549中PCNA、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低,细胞存活率及迁移和侵袭能力显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高,N-cadherin、Vimentin、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.05)。Akt信号通路激活剂IGF-1可逆转千金子对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用。结论:千金子可抑制肺癌细胞A549迁移、侵袭及上皮间质转化,其机制可能与Akt信号通路有关。

银杏黄酮苷元通过调控DUSP1表达对急性胰腺炎大鼠腺泡细胞炎症因子分泌和凋亡的影响

目的:探讨银杏黄酮苷元(GA)对雨蛙素诱导的急性胰腺炎(AP)大鼠腺泡细胞炎症因子分泌和凋亡的影响。方法:采用雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J建立AP腺泡细胞模型。①正常培养的AR42J细胞作为空白对照组,AP模型细胞为AP组,以用15、30、60 mg/L GA处理的AP模型细胞作为GA低、中、高浓度组。②将pcDNA、pcDNA-双特异性磷酸酶1(DUSP1)转染至AR42J细胞6 h后,再用100 nmol/L雨蛙素刺激,分别作为AP+pcDNA组、AP+pcDNA-DUSP1组。③将si-NC、si-DUSP1转染至AR42J细胞6 h后,再用100 nmol/L雨蛙素和60 mg/L的GA处理,分别作为AP+GA+si-NC组、AP+GA+si-DUSP1组,另取AP模型细胞作为AP组、用100 nmol/L雨蛙素和60 mg/L的GA处理的细胞作为AP+GA组。ELISA法检测培养上清中炎症因子IL-6、TNF-α水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;qRT-PCR法检测DUSP1 mRNA的表达水平。结果:GA处理后,雨蛙素诱导的AR42J细胞中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,DUSP1表达水平升高(P<0.05)。过表达DUSP1可降低雨蛙素诱导的AR42J细胞炎症因子水平,促进细胞凋亡(P<0.05)。干扰DUSP1表达逆转了GA对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞炎症因子和凋亡的影响(P<0.05)。结论:GA可通过上调DUSP1表达抑制雨蛙素诱导的AP腺泡细胞炎症反应,促进细胞凋亡。

大剂量咖啡因对脂多糖诱导的新生大鼠神经细胞活力及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的:探讨大剂量咖啡因对脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠神经细胞活力和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法:分离及培养原代大鼠(出生24 h以内)大脑皮层神经细胞。将神经细胞分为空白对照组、LPS组、咖啡因组和咖啡因+LPS组。空白对照组细胞仅用培养液培养24 h;LPS组和咖啡因组细胞分别用10 mg/L的LPS及5 mmol/L的咖啡因处理24 h;咖啡因+LPS组细胞用5 mmol/L咖啡因和10 mg/L的LPS处理24 h;采用MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中PCNA、Cleaved Caspase-3、PI3K和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达。另取大鼠神经细胞分为两组:咖啡因+LPS组细胞用咖啡因和LPS诱导24 h;咖啡因+LPS+LY294002组细胞用咖啡因、LPS和PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理24 h;然后检测两组细胞活力、凋亡率及PCNA、Cleaved Caspase-3、PI3K、p-AKT蛋白的表达。结果:LPS和咖啡因单独作用均可抑制神经细胞存活,诱导凋亡,下调PCNA、PI3K和p-AKT表达,上调Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);两者联用具有协同增效的作用(P<0.05)。与咖啡因+LPS组比较,咖啡因+LPS+LY294002组细胞活力降低,凋亡率升高,PCNA、PI3K和p-AKT蛋白表达降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论:大剂量咖啡因可通过抑制PI3K/AKT信号通路,增强LPS诱导的新生大鼠神经细胞活力抑制和凋亡促进作用。

新型隐球菌感染合并2型糖尿病个体化药学监护一例

本文报告1例55岁患者,因咳嗽3个月,间断发热2个月入院,入院后诊断为肺隐球菌感染、肝功能不全、2型糖尿病,给予伏立康唑抗真菌治疗,动态调整人胰岛素降糖治疗。对患者多次伏立康唑血药谷浓度低于有效浓度范围及其CYP2C19基因检测,临床药师进行个体化药学监护,治疗期间患者病情转归良好出院。

黄连碱上调miR-146a-5p后通过PI3K/AKT通路减轻由MPP+诱导的帕金森病细胞模型损伤

目的探讨黄连碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞损伤的影响及其机制。方法用0.3 mmol/L的MPP+处理SK-N-SH细胞作为PD细胞模型,记为MPP+组,以正常培养的细胞作为空白对照组。用浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的黄连碱预处理4h后再用0.3 mmol/L的MPP+处理作为不同浓度黄连碱处理组。将miR-con、miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后再用0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++miR-con组、MPP++miR-146a-5p组;将anti-miR-con、anti-miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后用20μmol/L的黄连碱预处理4h及0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++Cop+anti-miR-con组、MPP++Cop+anti-miR-146a-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;Western blotting实验检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平。结果与空白对照组比较,MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,活化caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。黄连碱处理及miR-146a-5p过表达后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中细胞存活率显著升高,活化caspase-3表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对SK-N-SH细胞增殖促进和凋亡抑制的作用。黄连碱处理后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中p-AKT、p-PI3K表达水平显著升高,低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对p-AKT、p-PI3K表达水平的促进作用。结论黄连碱可促进细胞存活,抑制MPP+诱导的细胞凋亡,其机制可能与miR-146a-5p及PI3K/AKT信号通路有关。